細菌檢驗中PCR檢驗法的應用價值分析

史 業 成

(尉氏縣人民醫院檢驗科 開封 475500)

陰道細菌感染是致陰道炎的常見誘發因素，病情呈進行性發展，甚至會致盆腔感染及腹部感染，使患者出現異位妊娠，或失去生育能力[1]。在陰道炎治療中，應先了解陰道內細菌感染情況及感染程度，采取針對性治療方案。另外由于抗菌藥物廣泛應用，抗菌耐藥性不斷增強，用藥效果欠佳。因此需先了解陰道炎細菌感染狀況，細菌培養法是既往檢測細菌常用手法。隨著醫療技術的不斷進步，PCR檢驗法得到應用日漸廣泛，并取得較高檢測準確性[2]。筆者就以我院收治的75例陰道炎患者為例，對其分別采取細節培養及PCR檢驗法行細菌檢驗，分析其檢驗結果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取我院在2017年1月～2018年7月期間行細菌檢驗的陰道炎患者75例，患者知情本次研究，簽署同意書。患者均為育齡期女性，精神正常；患者因陰道炎、陰道瘙癢、陰道異味及白帶分泌物增加等表現而就診；患者近2d內未有過性生活；近期陰道未用藥。患者年齡20～56歲，平均年齡(36.84±6.82)歲，病程3個月～4年，平均病程(11.36±3.48)個月。

1.2 檢驗方法

75例陰道炎患者先采集陰道分泌物，取無菌棉簽輕輕插入陰道穹隆部位，輕柔旋轉，蘸取陰道分泌物，并放置2mL無菌生理鹽水保存。

細菌培養：將陰道分泌物置于陰道瓊脂培養基接種，在37℃恒溫箱中孵育培養48h，至培養基出現菌落后，選擇半菌落光滑、灰色透明樣、類似露滴狀的菌群，生化鑒定。

PCR法檢驗：先對標本離心15min，12000r/min，丟棄上清液，取堿性裂解液，添加至標本的下層沉淀中。將離心后標本放置60℃水浴中進行加熱，時間15min，待充分裂解后，再次進行離心，10min；取上清液作DNA模板，PCR擴增為空白對照，取緩沖液、雙蒸餾水、引物、模板，依次加入對照品，隨后以PCR儀進行檢驗。

1.3 觀察指標

按照《微生物檢驗操作規程》行細菌檢驗，觀察細菌培養法及PCR檢驗對細菌陽性檢出率，對比兩種檢驗方法對腸球菌、戛納桿菌及棒狀桿菌檢出率。

1.4 統計學分析

采取SPSS20.0統計學軟件處理本次研究內相關數據，對等級資料(%)采取秩和檢驗。P<0.05時，代表差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法細菌檢驗陽性率比較

PCR檢驗法對細菌檢驗陽性率89.33%，高于細菌培養法的61.33%，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩種方法對細菌檢驗陽性率比較[例(%)]

組別陽性率陰性率觀察組(n=75)67(89.33%)8(10.67%)對照組(n=75)46(61.33%)19(38.67%)Z7.4277.427P0.0060.006

2.2 兩種方法不同致病菌檢出率比較

PCR檢驗法對腸球菌、戛納桿菌及棒狀桿菌檢出率分別為20%、34.67%、32%，均高于細菌培養法的12%、28%、21.33%，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩種方法不同致病菌檢出率比較[例(%)]

組別腸球菌戛納桿菌棒狀桿菌觀察組(n=75)16(20%)27(34.67%)24(32%)對照組(n=75)9(12%)21(28%)16(21.33%)Z4.4914.1035.197P0.0140.0290.013

3 討論

對陰道炎細菌檢驗時，多采取陰道分泌物檢查，可直接觀察陰道炎性感染程度，確定陰道內細菌分布情況[3]，細菌檢驗具較高的準確性，能準確反映疾病狀況。因女性陰道內有大量上皮細胞、陰道桿菌、革蘭陽性球菌等多種菌群，而陰道內菌群失調，陰道防御能力降低，細菌侵入性增加，使大量益生菌死亡，影響上皮細胞代謝功能，使陰道內酸堿水平紊亂，致陰道炎發生[4～5]。為此，進一步肯定了細菌檢驗對陰道炎的判斷有積極作用。

細菌培養法是臨床病原菌檢驗的常用方法，具較高的細菌檢出率，但細菌培養法操作復雜，檢驗過程較為繁瑣，對實驗室環境要求較高，需耗費較長的檢驗時間，臨床應用受到一定限制[6]。

PCR檢驗法為分子生物學檢測范疇，操作簡單方便，具較高的診斷靈敏度，其檢驗靈敏度高達90%；另外PCR檢驗法結合PCR高敏感性及DNA雜交特點，屬于熒光定量檢測，無需耗費太長的檢驗時間，對檢驗環境無較大要求，更適用于在基層醫院的廣泛開展[7～8]。本次研究中，PCR檢驗法對細菌檢驗陽性率89.33%高于細菌培養法61.33%，對不同致病菌陽檢出率也高于細菌培養法，差異具有統計學意義(P<0.05)。因此，與細菌培養法相比，PCR檢驗法的應用，操作簡單，具較高靈敏度及準確性，更利于細菌檢驗。

在PCR檢驗法過程中應注意：(1)在采集陰道分泌物時，應避免陰道分泌物被尿液或其他體液干擾，以免影響檢驗結果；(2)提高檢驗醫生的采集、檢驗水平，嚴格控制標本的采集、檢驗，確保標本的檢驗質量及檢驗的準確性。

鑒于此，在細菌檢驗中，較細菌培養法相比，PCR檢驗法具有較高的細菌檢出率，檢驗結果準確，操作簡單，更具應用效果，值得臨床推廣應用，并適用于基層醫院的開展。