DAMPs/IL-33、PCT聯合檢測在肺炎鑒別診斷中的應用研究

龍宏洋，肖懷琴，成映昀，戴小波

（1.珠海市香洲區人民醫院，廣東珠海 519070；2.珠海高新技術產業開發區人民醫院（廣東省第二人民醫院珠海醫院）廣東珠海 519085）

肺炎是威脅人類健康的常見疾病之一，在感染性疾病中占很大比例，細菌、病毒、支原體、真菌、非典型病原體等為其常見的病原微生物。目前臨床上診斷肺部感染的主要依據有疾病誘因、癥狀、體征、白細胞計數和分類、病原微生物培養、肺部影像學改變等，因影響因素較多，不能及時反映患者的病情變化，缺乏一定的敏感性或特異性。本研究通過檢測IL-33、PCT在各種肺炎患者中的變化，探討IL-33、PCT在肺炎中的鑒別診斷價值，現將相關內容報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集2016年1月-2018年3月廣東省珠海市香洲區人民醫院的病毒性肺炎患者、支原體肺炎患者、細菌性肺炎患者和健康人群血液標本，共計132例，分為病毒組、支原體組、細菌組與對照組，其中病毒組分巨細胞病毒組25例、腺病毒組20例、呼吸道合胞病毒組25例，支原體組20例，細菌組22例，對照組20例。巨細胞病毒組患者平均年齡為（3.8±1.9）歲，其中男性患者14例，女性患者11例；腺病毒組患者平均年齡為（2.9±1.8）歲，其中男性患者12例，女性患者8例；呼吸道合胞病毒組患者平均年齡為（3.3±2.1）歲，其中男性患者13例，女性患者12例；支原體組患者平均年齡為（3.4±1.4）歲，其中男性患者14例，女性患者6例；細菌組患者平均年齡為（1.5±1.7）歲，其中男性患者13例，女性患者9例；對照組患者平均年齡為（2.5±2.2）歲，其中男性患者9例，女性患者11例。各組患者一般資料比較，無顯著性差異（P＞0.05）。

1.2 檢測方法 病毒性肺炎組及細菌性肺炎組患者符合肺炎診斷標準，肺部聽診均可聞及中小濕啰音、哮鳴音等；肺部X線片有點片狀陰影。并根據CURB-65對患者病情嚴重程度進行分級。病毒性肺炎組：70例，白細胞總數正常或低于正常，細菌培養陰性，抗生素治療無效，外周血特異性病毒抗體檢測呈陽性。支原體肺炎組：20例，白細胞總數正常或增高，細菌培養陰性，抗生素治療有效，外周血特異性病毒抗體呈陰性，肺炎支原體抗體呈陽性。細菌性肺炎組：22例，白細胞增高或中性粒細胞白細胞增高，細菌培養呈陽性，抗生素治療有效，外周血特異性病毒抗體呈陰性。對照組：20例，上述檢測指標均為陰性。

病毒學特異性IgM抗體標本采集：抽取外周靜脈血，檢測呼吸道病毒IgM抗體，包括呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、巨細胞病毒（CMV），所有試劑由深圳晶美生物工程有限公司提供。

支原體標本采集：采集患者入院時的靜脈血標本，檢測肺炎支原體，檢測試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供。

IL-33、PCT標本采集：采集靜脈血標本，用于檢測IL-33、PCT及其他常規檢查項目（血常規、腎功能等），IL-33、PCT均采用酶聯免疫吸附（ELISA）方法檢測，檢測試劑盒由Bio-swamp公司提供，均嚴格按說明書操作。

1.3 統計學方法 利用統計學軟件SPSS 22.0進行數據分析。采用t檢驗及Spearman線性相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清PCT水平 細菌組血清PCT水平分別高于支原體組（t=19.21,P＜0.05）、巨細胞病毒組（t=10.55、P＜0.05）、呼吸道合胞病毒組（t=21.07,P＜0.05）、腺病毒組（t=18.79,P＜0.05）及對照組（t=19.14,P＜0.05），具有統計學差異；巨細胞病毒組血清PCT水平低于細菌組（t=10.55,P＜0.05），但高于支原體組（t=10.98,P＜0.05）、呼吸道合胞病毒組（t=11.54,P=0.000＜0.05）、腺病毒組（t=10.50,P＜0.05）及對照組（t=10.87,P＜0.05），具有統計學差異；支原體組、呼吸道合胞病毒組、腺病毒組血清PCT之間無統計學差異；支原體組、呼吸道合胞病毒組、腺病毒組血清PCT與對照組比較也無統計學差異。見表1。

2.2 血清IL-33水平 細菌組血清IL-33水平高于支原體組（t=18.03,P＜0.05）、巨細胞病毒組（t=3.90,P＜0.05）、呼吸道合胞病毒組（t=6.69,P＜0.05）、腺病毒組（t=6.77,P＜0.05）及對照組（t=17.56,P＜0.05），具有統計學差異；巨細胞病毒組血清IL-33水平低于細菌組（t=3.90,P＜0.05），但分別高于支原體組（t=6.96、P＜0.05）及對照組（t=10.87,P＜0.05），具有統計學差異；呼吸道合胞病毒組IL-33水平分別高于支原體組（t=7.09,P＜0.05）及對照組（t=7.05,P＜0.05），具有統計學差異。腺病毒組IL-33水平分別高于支原體組（t=5.64,P＜0.05）及對照組（t=5.62,P＜0.05），具有統計學差異；巨細胞病毒組、呼吸道合胞病毒組、腺病毒組之間血清IL-33組無統計學差異；支原體組血清IL-33與對照組比較無統計學差異。見表2。

表1 各組患者血清PCT水平比較（Mean±SD）

表2 各組患者血清IL-33水平比較（Mean±SD）

3 討論

最近研究[1]表明，組織細胞在受到損傷后釋放的一類內源性活性分子可以通過與模式識別受體（PRRs）相互作用，調節免疫細胞的分化方向，這些內源性細胞因子被稱為損傷相關細胞因子（damage associated molecular patterns,DAMPs）。損傷相關細胞因子能影響Th細胞分化方向，是免疫細胞細胞毒效應連級放大及細胞因子瀑布效應的主要啟動因子。白細胞介素-33（IL-33）是DAMPs相關細胞因子途徑的主要組成成分，DAMPs/IL-33途徑與CTL細胞對病毒感染細胞的攻擊性密切相關[2]，當感染細胞被殺死后，組織細胞釋放的IL-33能快速誘導CTL細胞進行全力攻擊，是CTL細胞等免疫細胞生物學活性連級放大的主要內源性活性因子；Sesti-Costa等[3]發現，IL-33可促進CD8+T細胞和NK細胞的脫顆粒作用以及IFN-γ、TNF的分泌，從而介導免疫系統對病毒的清除作用，而釋放的IFN-γ可誘導IL-33的表達[4,5]。降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體，是一種能準確反映細菌感染的特殊生物標記物[6]。

細菌性肺炎是由細菌引起的最常見的肺部感染性疾病，細菌感染機體后會激活免疫系統做出一系列免疫應答，釋放多種促炎癥因子，促炎癥因子參與和放大炎癥作用，從而引起肺部損傷而發生病變。支原體肺炎為非典型肺炎中的一種，是由支原體（MP）感染引起的，呈間質性肺炎及毛細支氣管炎樣改變，肺泡有炎癥滲出。病毒性肺炎主要是由細胞毒性T淋巴細胞介導的一種免疫性炎癥，病毒侵入呼吸道后，引起宿主細胞凋亡、壞死，導致呼吸道及肺組織的直接損傷；另一方面，活化的CTL效應細胞可以殺傷被病毒感染的呼吸道上皮細胞，INF-γ等細胞因子的大量釋放可以引起一系列的病理變化，形成瀑布效應，導致嚴重的病理損傷以及全身炎癥反應綜合征（SIRS），是病毒性肺炎病情惡化及患者死亡的主要原因。

本研究中，細菌組血清PCT水平顯著高于其他組，具有統計學差異，這與相關研究報道相一致[7,8]。本研究中，巨細胞病毒組血清PCT水平也呈輕度增高，與支原體組、呼吸道合胞病毒組、腺病毒組及對照組相比較，具有統計學差異，這可能和巨細胞病毒性肺炎的發病機制有關，巨細胞病毒感染一般容易引起全身性炎癥反應綜合征（SIRS）并伴有多器官功能紊亂，因此常伴隨有PCT水平的輕度增高。在IL-33方面，細菌組IL-33水平顯著高于其他組，這和細菌性肺炎起病急、進展快以及細菌性肺炎肺組織損傷重有關；病毒組IL-33水平高于支原體組及對照組，低于細菌組，支原體組IL-33水平無明顯變化，說明在細菌或病毒感染后，由于肺組織細胞的損傷，大量釋放IL-33，并通過損傷相關細胞因子途徑，與模式識別受體（PRRs）相互作用，調節機體免疫細胞的分化方向，而支原體肺炎一般為間質性肺炎，炎性滲出及組織損傷不明顯，因而IL-33水平無明顯增高。

上述結果表明：在IL-33聯合PCT檢測時可以發現，細菌組PCT、IL-33水平都明顯增高，巨細胞病毒組PCT水平輕度增高，但IL-33水平增高明顯，其他病毒組性肺炎僅有IL-33水平明顯增高，PCT水平不增高，支原體肺炎PCT及IL-33水平都無明顯改變，因此IL-33在聯合PCT檢測時，在鑒別各種肺炎的鑒別診斷中具有一定的價值。