不同人乳頭瘤病毒檢測方法的臨床應用價值研究

周婷婷 李雨艷 宋麗影 牟 榮*

（吉林金域醫學檢驗所有限公司，吉林 長春 130012）

人乳頭瘤病毒（HPV）是人類生殖器疣感染的主要病因，而且也是造成女性感染宮頸癌的主要病毒[1]。宮頸癌是女性生殖系統腫瘤的第二位惡性腫瘤[2]。現階段，基本可以確定宮頸癌的病因與高危型HPV的持續感染存在相關性，而且自感染HPV至發生宮頸癌是一個相對漫長的過程，通常會給患者8～10年的時間來進行干預[3]。因此，早期篩查極為重要。隨著宮頸癌的發病率逐年增多，早期篩查收到的準確性是患者獲得良好的診治的前提條件[4]。現階段我國篩查主要采用免疫組化法、PCR-反向點雜交法及熒光定量PCR方法[5]。雖然在HPV的臨床檢驗中已經有了多種檢驗手段，但是每種檢測手段都存在一定的誤診或漏診率，提高診斷的準確度是檢驗醫學的發展目標。本研究旨在通過不同免疫檢驗方法用于抗HPV的結果進行對照分析，結果顯示如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取12份已經確診的HPV（+）患者樣本作為主要研究樣本，并將100例健康體檢者中的確定為（-）患者樣本作為對照樣本。

1.2 檢驗方法

1.2.1 免疫組化法：首先進行微波抗原修復，PBS（0.05 mol/L）清洗，之后加入一抗孵育，PBS清洗，加入二抗孵育，PBS清洗；最后滴加過氧化物酶標記蓮霉卵白素再次孵育，PBS清洗；DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。

1.2.2 PCR-反向點雜交法：采用HPV基因分型檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法），采用PCR和反向點雜交法相結合的基因芯片技術，嚴格按照說明書操作。

1.2.3 熒光定量PCR方法：采用HPV核酸檢測試劑盒（熒光PCR法），將DNA樣品加入PCR反應液的反應管內，瞬間離心后放全自動熒光定量PCR儀內，嚴格按照說明書進行循環程序進行操作，循環結束后采用熒光分析儀應用其電腦軟件統計并給出定量結果。

1.3 評價標準。敏感度：是指篩檢方法能將實際有病的人正確地判定為患者的比例；特異度：是指篩檢方法能將實際無病的人正確地判定為非患者的比例；約登指數：表示篩檢方法發現真正的患者與非患者的總能力，約登指數=（敏感度+特異度）-1，指數越大說明篩查實驗的效果越好，真實性越大。

1.4 觀察指標：觀察三種方法樣本檢測的陽性、陰性結果，并與確診陰性和陽性結果相比對，統計三種方法的陽性率、假陽性率、陰性率、假陰性率，并計算出準確率、敏感度、特異度、約登指數。

1.5 統計學方法：采用SPSS 22.0統計學軟件進行統計學處理，數據以率（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05差異顯著，具有統計學意義。

2 結 果

2.1 對血清樣本的檢驗結果對比：三種免疫檢驗結果無統計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 三種檢驗方法對血清樣本的檢驗結果比較[n（%）]

2.2 血清樣本診斷指標分析對比：聚合酶鏈式反應（PCR ）方法的敏感度及特異度均優于其他兩種檢測，約登指數比較聚合酶鏈式反應（PCR）方法＞原位核酸雜交法＞免疫組化法（P＜0.05），見表2。

3 討 論

宮頸癌已經被國際上證實其發病大多數情況下于HPV病毒感染有關[6]。宮頸癌的篩查的早期篩查能夠降低其發病率及致死率，而針對HPV病毒的篩查的用于對宮頸癌的早期發現，放置癌前病變具有極為重要的價值[7]。雖然目前宮頸癌疫苗已經應用于臨床青年女性，但是受到HPV病毒菌株的變化，僅能預防部分高危HPV感染的情況，臨床的早期篩查仍然不能忽視[8]。

表2 三種檢驗方法對血清樣本診斷指數比較

目前，HPV感染需要在HPV-DNA復制后才能夠發現病毒蛋白的表達，所以，陰性者也不能完全排除可能感染的診斷，故該免疫組化法的敏感性及特異度均較低[7]。而PCR-反向點雜交法具有精準分型、效率高、性能佳、多設備通用、內部質控、多標本檢測的優勢。而且能夠直接診斷出細胞感染的HPV病毒，可以用于組織的病理學檢查。但是，其對樣本量需求高，檢測成本高，不適合大量臨床應用。熒光定量PCR方法方法是基于核酸雜交理論的以HPV-DNA為模板的指數增長的速率采用體外擴增，具體敏感度高的診斷意義。其不僅能夠確診HPV陽性感染，而且可以對HPV分型進行診斷，而且能夠區分高危還是低位類型病毒感染，可以測定病毒載量，進行基因序列分析、發現新基因型等。采用內標基因監控，結果可靠；能夠有效防止檢測環境中的PCR產物污染，從PCR擴增道結果產生的過程始終處于完全封閉的系統中，而且避免PCR后處理，降低了擴增產物污染和交叉感染的可能性，所以其具有更高的敏感度及特異度。

本研究結果發現，三種免疫檢驗結果無統計學差異（P＞0.05）；PCR-反向點雜交法的敏感度更高，熒光定量PCR方法的特異度及敏感度均好，約登指數比較熒光定量PCR方法＞PCR-反向點雜交法＞免疫組化法（P＞0.05）；一種檢測手段的優劣主要以準確率、敏感度及特異度進行評價，而約登指數是對檢測方式的真實性的反應指標，通過結果可以看出，聚熒光定量PCR方法的特異度及敏感度均較高，可以作為HPV病毒篩查的首選工具；免疫組化法雖然操作相對簡單，但其敏感度及特異度均較低，不適合作為篩查工具。

綜上所述，對于抗HPV的早期篩查，都需要在檢驗實驗室進行，熒光定量PCR方法敏感度及特異度相對較高，不容易漏診，PCR-反向點雜交法特異度較高，能夠避免誤診，而免疫組化法由于特異度及敏感度均相對較低，不適于臨床廣泛應用。