微波法提取丹參中脂溶性成分丹參酮ⅡA的工藝研究

林大專 張義英 惠 春 孫全樂

（長春醫學高等專科學校，吉林 長春 130031）

丹參為唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根莖，具有活血祛瘀、通經止痛、涼血消癰、清心除煩等功效[1]。丹參的主要成分可分為脂溶性成分和水溶性成分兩大類，其中脂溶性成分主要為丹參酮類[2]，丹參酮是丹參中的主要活性成分，包括丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ等，具有較明顯的心腦血管保護活性、體內外抗腫瘤活性等[3]，本文利用單因素試驗和正交試驗，對微波法提取丹參酮ⅡA的工藝進行系統研究，為丹參中脂溶性成分的開發利用提供參考幫助。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀（Agilent 1200可變波長檢測器（VWD），Agilent 1200數據站，P/N-7725i手動進樣器，G1354A四元梯度泵及G1316A柱溫箱（美國Agilent公司產品）； XH-200A型祥鵠電腦微波萃取儀（北京祥鵠科技發展有限公司）；丹參飲片（購于安國市昌達中藥材飲片有限公司，經生藥教研室王月珍鑒定為真品），丹參酮ⅡA標準品（Chengdu PUSH Bio-Technology Co.Ltd.，批號Q0070291，規格：50 mg，含量≥99%）；甲醇（美國Fisher公司，批號：A452-4，色譜純）；無水乙醇（北京化工廠，批號2015130，分析純）。

2 方 法

2.1 丹參樣品液的制備：稱取丹參飲片10 g于250 mL錐形瓶中，根據單因素和正交試驗設計在不同溫度、提前功率、料液比下用不同濃度乙醇用微波萃取儀提取丹參中脂溶性成分，提取液合并后濃縮，定容至100 mL量瓶中，搖勻，待用。

2.2 丹參酮ⅡA的含量測定

2.2.1 色譜條件：Agilent TC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（80∶20）；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長270 nm；進樣量20 μL。

2.2.2 標準品溶液的配制：精密取丹參酮ⅡA標準品0.0052 g，加甲醇溶解，定容至50 mL，制成104 μg/mL的標準品儲備液。

2.2.3 線性試驗：分別精密吸取上述標準品儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。以峰面積對標準品濃度作圖，繪制標準曲線。回歸方程為y=164.4x+33.76，r=0.9993，即濃度在5.2～31.2 μg/mL的范圍內線性良好。

2.3 單因素實驗：每個單因素實驗重復3次，以丹參酮ⅡA含量作為指標，分別考察提取功率、提取時間、提取溶劑、料液比等因素對丹參中丹參酮ⅡA提取率的影響。

2.4 正交試驗：在單因素考察的基礎上，以溶劑濃度、提取時間、提取功率和料液比為因素，優化丹參酮ⅡA的提取工藝，因素-水平設計見表1。

表1 因素水平表

3 結 果

3.1 單因素試驗結果

3.1.1 提取功率的影響：當功率在300～600 W時，丹參酮ⅡA含量隨功率的增加而增加，此后功率增加，丹參酮ⅡA結構遭到破壞，含量下降，因此最佳的提取功率是600 W。

3.1.2 提取時間的影響：時間在1.5～5.5 min 區間內丹參酮ⅡA含量呈上升趨勢，且在5.5 min時達到最大，此后提取時間延長，丹參酮ⅡA受熱分解，含量開始下降，因此最佳的提取時間為5.5 min。

3.1.3 提取溶劑的影響：乙醇濃度為70%時，丹參酮ⅡA的提取率最高。

3.1.4 料液比的影響：采用6倍量的乙醇提取時，丹參酮ⅡA的提取率最高。

表2 正交試驗結果

3.2 正交試驗結果：以丹參酮ⅡA得率為考核指標，用L9（34）正交表設計使用，分別考察了提取溶劑、提取時間、提取功率和料液比等因素對提取效果的影響，結果見表2、表3。

表3 正交試驗方差分析表

4 小結與討論

4.1 由表2可知，RA＞RD＞RC＞RB，影響因素次序為A、D、C、B，即乙醇濃度、料液比、功率、時間。

4.2 表2中，由K3A＞K2A＞ K1A知，因素A的水平3比其他2個水平好，同樣由最佳工藝條件是A3B3C2D2，即提取溶劑為95%、提取時間6.5 min、料液比1∶6、功率為600 W。

4.3 從表3正交實驗方差分析可知，提取溶劑、提取時間、功率、料液比對丹參中丹參酮ⅡA提取率影響都顯著，其中提取溶劑的影響最顯著。

4.4 微波輔助提取所需的時間少、能耗低，能夠有效保留活性成分，是一種提取丹參酮ⅡA較好的方法。由實驗結果可知，該工藝合理、簡單、可行，可作為提取丹參中脂溶性成分的優選工藝。