復方丹參片對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響

郭玉東 左澤平 高 陽 胡宇馳 曹春然 王志斌 李 麗

（北京市藥品檢驗所，北京 100035）

復方丹參片是含丹參的一種制劑，主要含有丹參、三七和冰片，具有活血化瘀，理氣止痛的功效，用于治療氣滯血瘀所致的胸悶（癥見胸悶，心前區刺痛）、冠心病和心絞痛。復方丹參片臨床使用量很大，然而不同廠家生產的質量參差不齊，藥典質量控制方法不能完全反應其活性，因此對復方丹參片進行藥效再評價，并篩選合適的活性指標用于其質量控制。本實驗采用皮下腎上腺素加冰浴法制備大鼠血瘀模型，觀察復方丹參片對血瘀模型大鼠血液流變學的影響，旨在探討復方丹參片活血化瘀可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

品系：SD大鼠；級別：SPF級；許可證號：SCXK（京）2006-0009；由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。

1.2 實驗試劑

0.9%氯化鈉注射液，批號：12080542（國藥集團容生制藥有限公司）；水合氯醛，批號：20110509（國藥集團化學試劑有限公司）；凝血酶原時間（PT）測定試劑盒，批號：NO620322（Instrumentation Laboratory）；活化部分凝血酶原時間（APTT）測定試劑盒，批號：NO716816（Instrumentation Laboratory）；二磷酸腺苷ADP，濃度：5μmol/L（北京世帝科學儀器公司）；鹽酸腎上腺素注射液（Adrenalin hydrochloride，縮寫為 Adr），批號：1209251（天津金耀氨基酸有限公司）；枸櫞酸納，批號：20110604（北京化學試劑公司）

1.3 實驗藥品

復方丹參片（0.32 g/片，60片/盒，用法用量：一日三次，一次三片，北京同仁堂），批號：12120393；阿斯匹林泡騰片 （0.5 g/片），批號：1211032。

1.4 實驗儀器

TE2101-L電子天平（北京塞多利斯儀器系統有限公司），LG-R-80B血液黏度儀（北京世帝科學儀器公司），MEK-6318血液分析儀（北京健長醫療器械有限公司），LG-PABER血小板聚集凝血因子分析儀（北京世帝科學儀器公司），LG-B-190紅細胞變形聚集測試儀（北京世帝科學儀器公司），ACL ELITE PRO全自動血凝儀（Instrumentation Laboratory）。

1.5 方法

1.5.1 動物分組及急性血瘀模型的制備：SD大鼠60只，雌雄各半，體質量190～220 g，隨機分為6組，分別為模型組、正常對照組（不皮下注射鹽酸腎上腺素給予等體積的生理鹽水）、陽性藥組（阿斯匹林泡騰片）、復方丹參片高、中、低劑量組。阿斯匹林泡騰片組給藥劑量2.5 mg/kg，復方丹參片高、中、低劑量組分別為0.68、0.34、0.17 g/kg，模型組和空白組給予生理鹽水，給藥體積均為1.0 mL/100 g，連續給藥6 d后，除正常組外，各組動物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.9 mg·kg-1，共2次，間隔4 h，在第一次皮下注射Adr 2 h后將大鼠置于冰水中3 min，第二次皮下給Adr后造成血瘀證模型[1-2]，造模1 h后給藥1次，然后禁食12 h[3]。于取血前1 h再給藥1次，腹腔注射4%水合氯醛麻醉大鼠，供取血用。

1.5.2 復方丹參片對血瘀模型大鼠血小板數、血小板聚集率及紅細胞壓積的測定：從上述血瘀模型大鼠腹主動脈取血5 m L，加3.2% 枸櫞酸鈉抗凝（血液與抗凝劑體積比9∶1），以1 000 r/min離心10 m in，制備富血小板血漿（PRP），剩余血液經2 500 r/min離心 15 min，制備貧血小板血漿（PPP）[4]。用全血分析儀測定RPR中血小板數及紅細胞壓積。測定血小板聚集時取PPP 200μL調零，然后分別取PRP 190μL，加入誘導劑 ADP（終濃度5μmol/L）10μL，測定血小板5 min最大聚集率，血小板聚集測定均在4 h內完成。

1.5.3 復方丹參片對血瘀模型大鼠凝血時間和纖維蛋白原含量的測定：取貧血小板血漿（PPP），采用全自動血凝儀測定凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）、活化部分凝血酶原時間（APTT）[5]和纖維蛋白原含量，操作嚴格按照試劑盒說明進行。

1.5.4 復方丹參片對血瘀模型大鼠血液黏度及血漿的測定：從上述血瘀模型大鼠腹主動脈取的血中取1 m L，注入含有3.2% 枸櫞酸鈉抗凝（抗凝劑與血液比例為1∶9）的試管中，充分混勻，取血0.8 mL測量全血黏度，取上述貧血小板血漿（PPP）0.8 m L測量血漿黏度[6]。

1.5.5 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞變形、聚集的測定：從上述血瘀模型大鼠腹主動脈取的血中取2 m L，注入含有3.2% 枸櫞酸鈉抗凝（抗凝劑與血液比例為1∶9）的試管中，充分混勻，分別取血0.8 m L，用紅細胞變形聚集測試儀測定紅細胞的變形和聚集。

1.6 統計方法

以上測定結果采用SPSS11.5統計軟件進行組間的方差分析，考察模型組和空白組之間以及各給藥組和模型組之間的統計學差異。

2 結果

2.1 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞壓積、血小板數及最大聚集率的影響

結果見表1，復方丹參片能夠降低模型大鼠紅細胞壓積，中、小劑量組與模組相比有顯著性差異（P＜0.01），大劑量組降低幅度較小。同時復方丹參片能降低模型大鼠血漿中血小板數，降低血小板最大聚集率，抑制血小板聚集作用，與模型組相比大、中劑量均有顯著性差異（P＜0.01）。由以上結果還可以看出，血小板數的多少與血小板最大聚集率具有一定的相關性。

表1 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞壓積、血小板數及最大聚集率的影響（±s±s，n=10）Tab le 1 The effects of com pound danshon tab lets on erythrocyte deposition，p latelet coun t and m axim um aggregation rate of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

表1 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞壓積、血小板數及最大聚集率的影響（±s±s，n=10）Tab le 1 The effects of com pound danshon tab lets on erythrocyte deposition，p latelet coun t and m axim um aggregation rate of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

注：**P＜0.01 vs模型組；▲▲P＜0.01 vs空白組Note：**P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

空白780.7±80.9 34.0±2.4 38.0±14.2模型 / 900.3±87.8 55.4±8.2▲▲ 59.3±7.9▲▲阿斯匹林 0.0025 673.7±151.5** 43.9±7.6** 36.5±8.6**大劑量 0.68 696.5±112.4** 49.1±6.5 38.2±9.3**中劑量 0.34 781.4±144.3 45.4±7.3** 44.0±8.8**小劑量 0.17 832.7±113.2 43.6±7.5**/48.8±11.7

2.2 復方丹參片對血瘀模型大鼠 TT、PT、APTT和FIB的影響

結果見表2，復方丹參片能夠降低模型大鼠血漿中纖維蛋白原含量，與模型組相比大、中劑量有顯著性差異（P＜0.01），小劑量無顯著性差異（P＞0.05）。同時具有一定延長模型大鼠凝血酶原（PT）和活化部分凝血酶原（APTT）凝集時間作用，其中大劑量組延長APTT凝集時間的作用較為明顯，與模型組相比差異顯著（P＜0.01），中和小劑量無顯著性差異（P＞0.05）。復方丹參片延長凝血酶（TT）和凝血酶原（PT）凝集時間作用較小，各劑量組與模型組相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 復方丹參片對血瘀模型大鼠凝血時間的影響（±s±s，n=10）Tab le 2 The effects of com pound danshon tab lets on coagu lation tim e of b lood stasism odel rats（ ±s ±s，n=10）

表2 復方丹參片對血瘀模型大鼠凝血時間的影響（±s±s，n=10）Tab le 2 The effects of com pound danshon tab lets on coagu lation tim e of b lood stasism odel rats（ ±s ±s，n=10）

注：**P＜0.01 vs模型組；▲▲P＜0.01 vs空白組Note：**P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

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2.3 復方丹參片對血瘀模型大鼠血液黏度的影響

結果見表3，復方丹參片能降低血瘀模型大鼠全血黏度及血漿黏度，模型組與空白組相比有顯著性差異（P＜0.01），且明顯高于空白組，提示模型成立。復方丹參片的大劑量的高切和中切與模型組相比均有顯著性差異（P＜0.01），低切與模型組相比大劑量差異顯著（P＜0.05），中、小劑量對全血黏度 的影響不大。血漿黏度與模型組相比大劑量有顯著 性差異（P＜0.01），中劑量差異顯著（P＜0.05），小 劑量無顯著性差異。其中大劑量降低全血黏度及血 漿黏度的作用效果較為明顯，并具有較為明確的劑 量關系。

表3 復方丹參片對血瘀模型大鼠血液黏度的影響（±s±s，n=10）Tab le 3 The effects of com pound danshon tab lets on the b lood viscosity of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

表3 復方丹參片對血瘀模型大鼠血液黏度的影響（±s±s，n=10）Tab le 3 The effects of com pound danshon tab lets on the b lood viscosity of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs模型組；▲▲P＜0.01 vs空白組Note：*P＜0.05， **P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

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2.4 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞變形聚集的影響

結果見表4，復方丹參片能夠降低血瘀模型大鼠紅細胞聚集能力，減小聚集指數和曲線下的聚集面積，中小劑量與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05），大劑量差異不明顯。復方丹參片在一定程 度上也能增加模型大鼠紅細胞變形能力，但與模型 相比無顯著性差異。

表4 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞變形聚集的影響（±s±s，n=10）Tab le 4 The effects of com pound danshon tab lets on the deform ation and accum u lation of erythrocytes of blood stasism odel rats（±s ±s，n=10）

表4 復方丹參片對血瘀模型大鼠紅細胞變形聚集的影響（±s±s，n=10）Tab le 4 The effects of com pound danshon tab lets on the deform ation and accum u lation of erythrocytes of blood stasism odel rats（±s ±s，n=10）

注：*P＜0.05vs模型組；▲▲P＜0.01 vs空白組Note：*P＜0.05vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

0.09±0.04 16.1±8.3 0.74±0.04 363.5±28.0模型 / 0.64±0.25▲▲ 122.5±47.6▲▲ 0.69±0.05 337.7±31.4阿司匹林 0.0025 0.36±0.18* 69.8±35.9* 0.72±0.04 355.1±28.3大劑量 0.68 0.53±0.25 103.2±50.8 0.71±0.04 346.5±25.0中劑量 0.34 0.38±0.26* 73.4±53.9* 0.72±0.04 356.5±27.1小劑量 0.17 0.39±0.14* 75.3±29.9*空白/0.72±0.04 351.2±24.0

3 討論

血液流變學是研究循環血液的流動性、變形性、凝固性、黏彈性以及心血管黏滯性的科學。現代藥理研究表明，當人體患某種疾病，尤其是心血管系統疾病時，血液的流變性發生異常，從而引起全身或局部循環和微循環障礙[7]。目前臨床上血液的濃、黏、凝、聚是造成心腦血管疾病的重要原因[8]，本實驗采用的急性大鼠血瘀模型模擬人類血液流變異常改變臨床表現，考察復方丹參片活血化瘀可能的作用機理。

全血黏度主要取決于紅細胞數量的多少和性能，血漿的黏度主要取決于血漿蛋白的含量[9]。全血黏度的增高會引起紅細胞變形性降低和聚集性增高，使黏度進一步增高，使血流進一步變慢，這樣有利于血小板的黏附和聚集[10]；血漿黏度的增高會使血液的凝固性增加；最終導致心血管疾病[11]。本實驗結果表明，復方丹參片能夠降低血瘀模型大鼠全血及血漿的黏度，進一步降低紅細胞聚集，同時能夠抑制ADP誘導的血小板聚集作用，這可能是復方丹參片活血化瘀的主要作用機理。

本文研究發現復方丹參片能夠降低實驗性急性血瘀模型大鼠的全血黏度、血漿黏度、纖維蛋白原含量、紅細胞聚集、血小板數和血小板最大聚集率。此種藥理作用對于防止動脈硬化的發展，防止急性心肌梗死時的高黏狀態、并發癥以及預防及控制部分腦血管疾病的發生均有較好作用，為復方丹參片臨床作為預防和治療血瘀證、改善微循環提供了新的實驗依據。

通過本試驗發現，復方丹參片能夠明顯改善急性血瘀模型大鼠血液流變狀態，并通通過指標分析，發現復方丹參片活血化瘀的主要立足點可能是降低血液黏度和抑制血小板聚聚，如果能夠圍繞這兩項指標進一步分析，找到復方丹參片的治療作用通路及靶點，將能進一步提高復方丹參片的質量和療效。