胃癌細(xì)胞中NDRG2的表達(dá)及誘導(dǎo)分化研究*

常曉靜, 周歡娣, 薛曉英, 李彥格, 張歌, 楊玉, 王立文

050000 石家莊，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院 放療科

NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)是我國(guó)第四軍醫(yī)大學(xué)發(fā)現(xiàn)的一種與細(xì)胞分化相關(guān)的基因，屬于NDRG家族，該家族包括4個(gè)成員，即NDRG1～4，各成員間57%～65%的氨基酸具有同源性[1]。NDRG2基因定位于人染色體14q11.2，編碼的蛋白含357個(gè)氨基酸殘基，分子量約為41kDa，在人體多種組織中均有表達(dá)，不同程度地參與細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及分化成熟等過(guò)程[2-4]。近年的研究報(bào)道，NDRG2在多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，甚至不表達(dá)，發(fā)揮特定的抑癌作用[5-7]。目前誘導(dǎo)分化治療已成功運(yùn)用于白血病，作為一種分化相關(guān)基因，NDRG2與胃癌的關(guān)系尚缺乏研究。本研究重在探討NDRG2在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及其與細(xì)胞分化的關(guān)系，為胃癌的分化治療提供新的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

胃永生化粘膜上皮細(xì)胞GES1及6株胃癌細(xì)胞SGC7901、MGC803、MKN45、BGC823、AGS和HGC27均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物研究所。采用Invitrogen 公司的TRizol試劑提取總RNA，采用Fermentas公司的RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及 DreamTaq DNA聚合酶行2步法RT-PCR。 RPMI 1640購(gòu)自GibcoBRL公司，胎牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程公司。BCA試劑盒、ECL發(fā)光劑及TPA試劑購(gòu)自上海碧云天生物公司。Matrigel膠購(gòu)自美國(guó)BD 公司，Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Corning公司，引物由上海華大公司合成。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

人胃永生化粘膜上皮細(xì)胞GES1和胃癌細(xì)胞株SGC7901、MGC803、MKN45、BGC823、AGS和HGC27，單層貼壁生長(zhǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中， 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3 TPA處理

胃癌細(xì)胞株HGC27以5×105接種于6孔板，含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。TPA以10、50、100nmol/L培養(yǎng)3天，對(duì)照組為不加TPA的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。……