形態學、流式細胞術以及免疫組化在檢測多發性骨髓瘤患者中的應用效果

多發性骨髓瘤是一種臨床上常見的B淋巴細胞起源的漿細胞克隆性血液系統惡性腫瘤，以骨髓中惡性漿細胞發生異常聚集及增生為主要特征，好發于中老年人，目前主要的治療方法為造血干細胞移植以及化療[1-2]。由于在多發性骨髓瘤早期的臨床表現無特異性，極易發生漏診以及誤診。臨床診斷多發性骨髓瘤主要根據骨髓的形態學改變情況，有無出現溶骨性骨質破壞，血清有無表達單克隆免疫球蛋白。但部分分化情況良好的漿細胞與正常的細胞形態學難以區分，診斷較為困難[3]。本研究通過流式細胞術以及免疫組化對傳統骨髓細胞形態學診斷的60例多發性骨髓瘤患者進行細胞免疫表型分析，并比較3種檢測技術之間的差異，以期為多發性骨髓瘤的早期診斷和臨床治療效果的判斷提供更為有效且可靠的檢測方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月至2017年12月在我院進行診治的多發性骨髓瘤患者60例，均符合相關的診斷標準[4]，其中，男性39例，女性21例；年齡42～85歲，平均(61.85±6.73) 歲；臨床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期34例，Ⅲ期4例；IgA型15例，IgG型36例，不分泌型5例，輕鏈型4例。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

本研究中的所有患者均按照常規方法進行骨髓穿刺，抽取2 mL骨髓液放在肝素抗凝管中進行流式細胞學檢測，并且抽取0.2 mL骨髓液涂片進行免疫組化檢測以及形態學檢查。形態學檢查的方法如下：選擇涂片情況良好(染色清晰、制作良好、可以充分鑒定細胞質以及細胞核的形態特征)的骨髓涂片進行瑞氏-吉姆薩染色，采用顯微鏡分類計數200個有核細胞，多發性骨髓瘤的判斷標準[4]為漿細胞≥20%且出現形態異常。

流式細胞學檢測的方法如下：采用美國 BD FACSCalibur流式細胞儀，獲取20 000個細胞，標記細胞表面抗原以及細胞內抗原，對數取樣，通過 CD45/CD138設門對待檢細胞群進行設定，陽性判斷標準[4]：目的細胞群的抗原表達>10%。

免疫組化檢測的方法如下：使用直接標記法對骨髓細胞進行染色，組化染色的試劑均購自珠海貝索生物技術有限公司。陽性判斷標準[4]：在低倍鏡下選擇薄厚適中、涂片均勻、抗原表達較為顯著的位置，在高倍鏡下細胞膜、細胞核或者細胞質表現為棕黃色均勻細顆粒表示陽性表達，Kappa陽性位于胞漿，lambda陽性以及CD138陽性位于胞漿或胞膜，顯色較為淺淡或不顯色表示陰性表達。在顯微鏡鏡下計數有核細胞200個，各抗體陽性細胞所占的百分比大于10%表示陽性。

1.3 觀察指標

觀察形態學檢查、流式細胞學檢測以及免疫組化檢測的結果；觀察流式細胞學檢測以及免疫組化檢測在多發性骨髓瘤異常漿細胞抗原表達形式(Kappa、CD138、lambda、CD19、CD38、CD45)，比較二者的陽性診斷符合率；比較形態學檢查、流式細胞學檢測以及免疫組化檢測到的異常細胞群所占比例。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 形態學檢查結果

本研究中的60例多發性骨髓瘤患者均出現不同程度的免疫球蛋白增加和正色素性貧血，骨髓細胞形態學結果主要表現為異常漿細胞增生，且出現質的改變。

2.2 流式細胞學檢測結果

本研究中的60例多發性骨髓瘤患者中，CD45表達異常(55例陰性、5例部分陽性)；CD19的陰性表達率為100.00%；CD38以及CD138的陽性表達率均為100.00%，見表1。

2.3 免疫組化檢測結果

本研究中的60例多發性骨髓瘤患者中，Kappa陽性43例，CD138陽性表達率為100.00%，lambda陽性16例，見表1。

表1 流式細胞學以及免疫組化檢測在多發性骨髓瘤異常漿細胞抗原表達形式(例，%)

2.4 流式細胞學以及免疫組化檢測的陽性診斷符合率對比

流式細胞學檢測結果為陽性者55例，陽性診斷符合率為91.67%；免疫組化檢測結果為陽性者57例，陽性診斷符合率為95.00%；流式細胞學以及免疫組化檢測的陽性診斷符合率相比,無統計學差異(P>0.05)。

2.5 3種檢查方法檢測到的異常細胞群所占比例對比

形態學檢查骨髓瘤細胞所占的中位數比例為59.00%(5.00%～96.00%)，流式細胞學檢測骨髓瘤細胞所占的中位數比例為36.12%(4.00%～85.00%)，免疫組化檢測骨髓瘤細胞所占的中位數比例為34.59%(8.00%～86.00%)。形態學檢查骨髓瘤細胞所占比例明顯高于流式細胞學以及免疫組化檢測(P<0.05)，流式細胞學以及免疫組化檢測相比無明顯差異(P>0.05)。

3 討論

多發性骨髓瘤患者的臨床特征為骨髓內漿細胞發生惡性增生，分泌單克隆輕鏈或免疫球蛋白，且伴有正常免疫球蛋白降低和骨質疏松或(和)廣泛溶骨病變[5-6]。由于多發性骨髓瘤的臨床表現極具多樣化，在早期極易發生誤診。因而臨床上對于出現不能解釋的骨質疏松、腰背疼痛，反復感染以及腎功能損害的老年貧血患者，應給予高度的重視。骨髓細胞形態學檢查是臨床診斷多發性骨髓瘤的重要參考依據，通過進行骨髓穿刺涂片，對患者的骨髓細胞形態學改變情況進行觀察，可以有效鑒別以及診斷多發性骨髓瘤。由于骨髓細胞形態學檢查獲取骨髓液較為容易，細胞形態比較清楚，涂片操作簡單，臨床使用較為廣泛[7-9]。

但是由于骨髓瘤細胞與正常的漿細胞具有一定程度的相似，特別是鑒別診斷巨球蛋白血癥以及反應性漿細胞增多癥時，患者的骨髓形態表現多發性骨髓瘤極為相似，單純依靠骨髓細胞形態學特征無法做出準確的診斷。流式細胞分析儀通過對骨髓瘤相關抗原進行檢測，能對骨髓瘤的髓外浸潤以及復發等多個方面來對多發性骨髓瘤患者的預后進行全面的評估。流式細胞術檢測由于采用的為單細胞懸液，具有極佳的均一性，可以分析較多的細胞，臨床檢出率較高[10-11]。細胞免疫表型分析能為多發性骨髓瘤患者的臨床診斷提供重要的參考依據。歐洲骨髓瘤協作組推薦細胞免疫表型分型至少要使用CD38、CD45以及CD138中的一種抗體對漿細胞進行識別，CD45設門可以區分瘤細胞與有核紅細胞以及造血干細胞以外的其它骨髓有核細胞[12]。

本研究免疫組化選擇Kappa輕鏈，CD138以及lambda輕鏈單克隆抗體作為識別異常漿細胞的標志物。本研究中的60例多發性骨髓瘤患者中，Kappa陽性43例，CD138陽性表達率為100.00%，lambda陽性16例，與血清免疫固定電泳結果一致。流式細胞學檢測CD45表達異常(55例陰性、5例部分陽性)；CD19的陰性表達率為100.00%；CD38以及CD138的陽性表達率均為100.00%。本研究結果與劉艷榮[13]的研究相一致。而流式細胞學檢查沒有檢測到骨髓瘤細胞，其原因可能是瘤細胞呈灶性分布，流式細胞學檢查標本不一定采集到骨髓瘤細胞而發生漏檢。本研究結果發現，形態學檢查骨髓瘤細胞所占比例明顯高于流式細胞學以及免疫組化檢測(P<0.05)，流式細胞學以及免疫組化檢測相比無明顯差異(P>0.05)。分析其原因為，骨髓涂片會受到各種因素的影響而造成細胞分布的不均勻，使得不同計數區域的骨髓瘤細胞的所占比例具有較大的不同；在進行流式細胞術檢測的過程中，由于必須對成熟的紅細胞進行破除，而漿細胞的胞漿量較為豐富，在破除成熟的紅細胞的過程中，會不可避免地破壞少量的漿細胞，導致流式細胞術檢測的漿細胞所占比例降低。流式細胞學檢測結果為陽性者55例，陽性診斷符合率為91.67%；免疫組化檢測結果為陽性者57例，陽性診斷符合率為95.00%。提示流式細胞術以及免疫組化檢測對多發性骨髓瘤的檢測陽性率均較高，對其確診均具有檢測意義。

綜上所述，形態學、流式細胞術以及免疫組化在檢測多發性骨髓瘤患者中均具有較高的應用價值，可按照患者的具體情況，將三者聯合使用以提高臨床陽性診斷率和療效監測。