TLRs及其傳導通路在慢性鼻竇炎鼻息肉組織中的表達及意義

馬科 張明欣

慢性鼻竇炎并鼻息肉主要為源自篩竇、上頷竇及中鼻甲附近區域的發炎反應，然其詳細的病因及發生機制仍不清楚[1]。顯微鏡下可見以嗜酸性球為主的鼻竇黏膜發炎細胞浸潤，先前研究顯示此現象受到趨化嗜酸性球的細胞激素表現所調控，故推測鼻息肉的形成可能與微生物感染、過敏原刺激及宿主本身的免疫反應有關[2-3]。血液嗜酸性球濃度也被發現與組織嗜酸性球的浸潤程度、鼻息肉的大小，鼻竇計算機斷層攝影的嚴重性及術后再發息肉中活化的嗜酸性球數量有關[4-5]。因此慢性鼻竇炎患者組織及血液中的嗜酸性球及其相關細胞激素的濃度也可作為評估臨床癥狀、治療效果、預后以及研究其病理發生機制的依據[6]。采用免疫組織化學技術檢測60例鼻竇炎鼻息肉黏膜組織中Toll樣受體2(toll-like receptor 2，TLR2)和Toll樣受體4(toll-like receptor 4，TLR4)蛋白的表達和分布，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年2月到2018年4月收治的60例鼻竇炎鼻息肉患者為研究組，按照臨床分型分期標準：Ⅰ型16例，其中1期5例，2期7例，3期4例；Ⅱ型30例，其中1期5例，2期12例，3期13例；Ⅲ型14例。Ⅰ型取自炎性黏膜，Ⅱ型和Ⅲ型均取自息肉組織。同期選取20例正常篩竇黏膜組織進行對照。所有入組患者均簽署知情同意書，本研究已通過醫院倫理委員會的批準。

1.2 方法 采用免疫組化SABC法。石蠟切片常規脫蠟、水化，抗原修復，3%過氧化氫溶液阻斷內源性過氧化物酶，分別滴加兔抗人TLR2、TLR4多克隆抗體，TLR2、TLR4多克隆抗體，SABC檢驗試劑盒均購自武漢博士德生物有限公司。按試劑盒說明行免疫組織化學染色，以細胞膜和胞漿出現棕黃色顆粒為陽性染色。

1.3 觀察指標 以圖像分析軟件進行圖像分析處理，計算累計光密度值。研究組Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型鼻竇炎鼻息肉患者以及對照組各組間TLR2和TLR4表達程度的差異。

1.4 統計學處理 采用SPSS 24.0統計軟件包進行統計學處理。不同分型的累計光密度值計量資料用()表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料用率表示，組間比較用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 TLR2、TLR4免疫反應 TLR2、TLR4主要表達在鼻腔黏膜上皮細胞、固有層炎性細胞及黏膜下層腺體的胞漿和胞膜上(圖1)。

圖1 TLR2、TLR4免疫反應

2.2 TLR2在各組的表達 各組鼻腔黏膜組織中均有TLR2的表達。各型各期均較對照組高，并且隨著分型的升高其表達也隨之增加，差異具有統計學意義(P＜0.05)；但Ⅰ型和Ⅱ型各期之間差異無統計學意義(表1)。

表1 TLR2在各組的表達()

表1 TLR2在各組的表達()

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2.3 TLR4在各組的表達 各組鼻腔黏膜組織中均有TLR4的表達。各型各期均較對照組高，并且隨著分型的升高其表達也隨之增加，差異具有統計學意義(P＜0.05)；但Ⅰ型和Ⅱ型各期之間差異無統計學意義(表2)。

表2 TLR4在各組的表達()

表2 TLR4在各組的表達()

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3 討論

鼻竇炎的主要癥狀包括顏面疼痛或壓力感，鼻塞、膿性鼻涕、嗅覺減退或喪失等；次要癥狀則包括頭痛、發燒、口臭、疲倦、牙痛、咳嗽及耳部癥狀等[7-8]。鼻竇口鼻道綜合體是上頷竇、前篩竇、額竇開口與固有鼻腔的交會處，竇口阻塞正是慢性鼻竇炎形成過程中的關鍵性變化[9-10]。一般而言鼻竇開口要維持正常運作，必須靠健全的黏膜分泌，及上皮纖毛正常的運動，兩者皆為外來致病微生物無法入侵黏膜的重要因素[11-12]。慢性鼻竇炎常來自于急性鼻竇炎的治療不足，造成鼻腔黏膜的腫脹，且當鼻竇開口漸漸阻塞后，鼻竇空腔中的氧氣會被鼻竇黏膜吸收[13]，形成缺氧狀態及超氧化物生成，導致纖毛運動不良，因而鼻竇內黏液滯積、黏膜增厚、發炎細胞浸潤及血管通透性增加，使細菌更易滋生[14-15]。慢性鼻竇炎患者鼻黏膜會對前述致病菌及鼻腔中正常情況下共存而無致病的數種霉菌產生免疫發炎反應，分泌免疫蛋白以對抗或消滅霉菌[16-17]，但同時也破壞黏膜的防御機制，引起續發性的細菌感染以致慢性鼻竇炎的生成[18]。

Toll樣受體(TLRs)通過識別病原相關分子模式(PAMPs)激活信號轉導途徑級聯反應，誘導I-IFNs、促炎性細胞因子、趨化因子、MHC分子和共刺激分子等一系列抗病原因子的分泌與表達以及DCs的成熟，激發機體的天然免疫反應并介導建立獲得性免疫反應[19]。然而，近年來隨著對TLRs研究的不斷深入，發現TLRs及其多態性或免疫缺陷也與許多疾病密切相關。TLRs不僅在機體的免疫防御中扮演著重要的角色，還在疾病的發生發展中發揮著重要作用，為安全、高效藥物與疫苗的合理設計和開發提供依據[20]。通過本研究表明，TLR2、TLR4主要表達在鼻腔黏膜上皮細胞、固有層炎性細胞及黏膜下層腺體的胞漿和胞膜上。慢性鼻竇炎鼻息肉各型各期均較對照組高；并且隨著分型的升高，TLR2、TLR4的表達量也隨之增加，差異具有統計學意義。因此，TLR2和TLR4在鼻竇炎鼻息肉中的表達可能與鼻竇炎鼻息肉的發病機制存在著一定的相互關聯，TLRs在該機制中可能扮演重要角色。