T淋巴細胞亞群和Bcl-2蛋白在食管癌組織中的表達及臨床意義

傅育卡，陳章興

食管癌是指發生于食管上皮的惡性腫瘤，約占惡性腫瘤發病率的2%[1-2]，每年20萬～40萬人死于該病，我國是食管癌高發地區且病死率更高[3-5]。腫瘤細胞的轉移是食管癌預后不良的危險因素[6-7]。腫瘤的發生、發展與免疫系統有關，2015年Vacchelli等[8]研究證實，食管癌調節性T細胞表達水平升高，且與預后有關。我國食管癌患者組織中T細胞亞群的失衡情況可能與國外患者不同。另外，Bcl-2等凋亡調控基因與癌癥的發生和發展過程關系密切，其在腫瘤細胞中的高表達可以抑制腫瘤細胞凋亡，從而促進腫瘤的進展[9-10]。Song等[11]研究顯示，順鉑等可以誘導食管癌腫瘤細胞凋亡，并降低Bcl-2蛋白水平，其殺傷食管癌腫瘤細胞的機制可能是通過下調Bcl-2蛋白而發揮作用。T細胞亞群和Bcl-2蛋白均可導致食管癌的進展，但目前國內相關研究缺乏，本研究探討了食管癌患者腫瘤組織中T細胞亞群和調Bcl-2表達水平及臨床意義?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2015年1月—2016年12月解放軍174醫院收治的食管癌80例，納入標準：①所有患者均有食管癌病理診斷；②年齡為18～75歲；③有手術適應證(腫瘤無明顯外侵，無肝腎肺等遠處轉移；臨床分期為Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期)并在我院行食管癌切除術；④同意參與本研究，并簽署知情同意書。排除標準：①肝腎等重要臟器功能不全；②冠心病、心肌梗死、卒中等重大心血管疾病；③潰瘍性結腸炎等免疫系統疾?。虎芎喜⑵渌[瘤；⑤食管結核；⑥甲狀腺功能異常；⑦胸膜粘連、肺膿腫等鄰近臟器轉移；⑧急性或慢性感染性疾病期。本組男49例，女31例；年齡：38～73(58.29±9.91)歲；臨床TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期38例，Ⅲ期30例；鱗狀細胞癌48例，腺癌32例；腫瘤細胞為高分化44例，中低分化36例；合并局部淋巴結轉移49例，食管外膜浸潤32例。

1.2研究方法 入院后完善常規實驗室檢查，擇期行食管癌切除術，術中留取食管癌腫瘤組織(距腫瘤邊緣>1 cm)為腫瘤組織組和癌旁組織(距腫瘤邊緣5 cm)為癌旁組織組。每組80例。分別使用流式細胞儀和免疫組化法檢測并比較2組T細胞亞群(CD4+T細胞、CD8+T細胞和調節性T細胞)和Bcl-2蛋白陽性率。分析腫瘤組織中T細胞亞群、Bcl-2蛋白與食管癌淋巴結轉移等臨床特征的相關性。Bcl-2陽性的標準：黃色或棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞，陽性細胞占細胞總數≥5%提示組織中的Bcl-2陽性。

2 結果

2.12組Bcl-2蛋白比較 腫瘤組織組Bcl-2蛋白陽性病例占77.5%(62/80)，癌旁組織組Bcl-2蛋白陽性病例占15.0%(12/80)；腫瘤組織組Bcl-2蛋白陽性病例高于癌旁組織組(P<0.001)。Bcl-2蛋白陽性細胞占細胞總數的百分比：腫瘤組織為15%，陽性癌旁組織為7%，陰性癌旁組織為2%。見圖1。

2.22組T淋巴細胞亞群比較 腫瘤組織組中CD4+和CD8+T細胞表達水平與癌旁組織組比較差異無統計學意義(P>0.05)，但調節性T細胞高于癌旁組織組(P<0.001)。見表1。

表1 食管癌腫瘤組織組和癌旁組織組T淋巴細胞亞群比較

2.3食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白、T細胞亞群的陽性表達與臨床病理特征的關系 合并淋巴結轉移和TNM分期為Ⅲ期的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、CD4+T細胞、調節性T細胞均高于未合并淋巴轉移和TNM分期為Ⅰ和Ⅱ期的食管癌(P<0.05)。病理類型為腺癌和磷癌的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、CD4+T細胞、CD8+T細胞和調節性T細胞比較差異均無統計學意義(P>0.05)。腫瘤細胞分化程度為中低分化和食管外浸潤的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、調節性T細胞均高于高分化和非食管外膜浸潤的食管癌(P<0.05)。見表2。

表2 食管癌腫瘤組織中Bcl-2、T淋巴細胞亞群的陽性表達與臨床病理特征的關系

2.4食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和T細胞亞群的陽性表達的相關性 Bcl-2蛋白表達陽性的食管癌調節性T細胞高于Bcl-2蛋白表達陰性的食管癌(P<0.001)。二者CD4+和CD8+T細胞比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和T淋巴細胞亞群的陽性表達的相關性

3 討論

我國食管癌的發病原因不清[12-13]，導致該類患者死亡的主要因素是腫瘤細胞的生長和轉移，主要轉移途徑包括直接擴散、淋巴結和血運轉移等[14]。研究表明，組織中調節性T細胞主要由CD4+T細胞在抑炎因子的作用下分化而成[15]。調節性T細胞在機體對腫瘤細胞殺傷中起到負調節作用，該細胞降低與多種類型的腫瘤患者病死率升高相關[16-18]。2013年Izawa等[19]研究顯示，食管癌和胃癌腫瘤組織中調節性T細胞升高的患者，H2O2誘導的細胞凋亡作用降低。Bcl-2蛋白是一種凋亡調控基因，在腫瘤細胞中的高表達與腫瘤細胞的不受限制生長有關。國外研究已證實Bcl-2蛋白在食管癌組織中高表達，與患者臨床預后惡化有關[11]。

本研究結果顯示，食管癌腫瘤組織中調節性T細胞及Bcl-2蛋白陽性率顯著增加，且合并淋巴結轉移、Ⅲ期食管癌和中低分化、食管外膜浸潤的食管癌患者Bcl-2蛋白陽性率和調節性T細胞顯著增高。提示我國食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和調節性T細胞高表達，且與淋巴結轉移、臨床TNM分期、腫瘤細胞中低分化和食管外膜浸潤有關，均是食管癌預后不良的臨床征象[20- 21]，導致患者病死率增高。在腫瘤組織中，CD4+T細胞可以分化為調節性T細胞，抑制機體對腫瘤細胞的殺傷作用，而CD8+T細胞可以分化為細胞毒性T細胞，對腫瘤細胞起殺傷作用[17, 22]。本研究結果顯示,合并淋巴結轉移和Ⅲ期食管癌CD4+T細胞水平升高，這可能是腫瘤細胞誘導CD4+T細胞織浸潤腫瘤組，進而產生大量調節性T細胞，最終介導腫瘤細胞對免疫的耐受。在其他腫瘤的研究中表明CD8+T細胞在腫瘤組織中低表達，可引起細胞毒性T細胞產生減少，對腫瘤細胞的殺傷作用降低[23-25]。本研究顯示,CD8+T細胞在腫瘤組織和癌旁組織中比較差異無統計學意義，與淋巴結轉移、TNM分期等臨床特征也無相關性。這可能與病例的選擇或不同癌癥的特性相關，尚有待進一步的臨床研究證實。

Bcl-2凋亡調控基因又稱B淋巴細胞瘤/白血病-2蛋白基因，主要作用是抑制細胞包括腫瘤細胞的凋亡。組織中低水平的Bcl-2蛋白表達對維持機體新陳代謝具有重要意義，若發生基因變異可導致Bcl-2蛋白在組織中高表達，引起細胞增殖和凋亡調控失衡，從而細胞無限制繁殖，最終誘導癌癥發生；且癌癥發生后Bcl-2蛋白在腫瘤組織中的高表達，可促進腫瘤細胞進一步繁殖，使腫瘤細胞繁殖生長加速和轉移[26-27]。文獻報道，順鉑或許可通過降低腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達水平而改善食管癌患者臨床預后[11]。本研究結果顯示，Bcl-2蛋白的陽性表達與調節性T細胞增高有關，提示Bcl-2蛋白陽性的食管癌患者免疫功能處于抑制狀態，具體機制尚不明確?？赡芘cBcl-2蛋白抑制細胞凋亡，降低線粒體氧化水平，細胞內的氧化還原電位等有關，但目前缺乏研究探討Bcl-2蛋白與食管癌患者組織中T淋巴細胞亞群的研究，尚需其他研究進一步證實。

綜上所述，食管癌腫瘤組織中T淋巴細胞亞群失衡和Bcl-2蛋白高表達，二者與腫瘤的進展相關。