B3型胸腺瘤和胸腺癌中MGMT蛋白表達缺失的意義及預后分析

李 飛,宋 媛，申 遠，何 明，徐新建，岳泓旭

MGMT即O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶，是一種存在于人體中的避免烷化劑致DNA突變、癌變作用的DNA損傷修復蛋白酶[1-2]。胸腺上皮腫瘤(TET)是一種原發于前縱隔的潛在惡性腫瘤，約占前縱隔腫瘤的50%[3]。根據2015年WH0最新出版的TET組織學分類[4]中將其分為：A型、非典型A型、AB型、B1-3型、胸腺癌和混合型胸腺癌。B3型胸腺瘤和胸腺癌是TET中惡性度最高的兩類，臨床上歸為侵襲性TET，在組織學或是生物學行為上十分類似，本研究擬通過對MGMT蛋白表達水平的檢測，進而評估蛋白表達缺失與B3型胸腺瘤和胸腺癌術后生存狀態的關系?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取河北醫科大學附屬第四醫院胸外科2008年1月—2015年1月以前縱隔腫物就診并行手術切除的TET患者48例，共取得蠟塊60例，按照TET的2015年WHO組織學分類分為：B3型胸腺瘤組20例，胸腺癌組28例，瘤旁組織組12例。48例腫瘤組織中男21例，女27例；年齡32～82歲，中位年齡60.20歲；合并重癥肌無力15例。納入標準：術前均由胸部增強CT確診為前縱隔腫物且行根治性手術(胸腺腫物+前縱隔脂肪組織切除)，術后病理證實為B3型胸腺瘤或胸腺癌；患者及其家屬均知情并簽署知情同意書。排除標準：術后病理證實為胸腺增生等良性疾病、TET中非B3型和非胸腺癌的組織學分型。按照Masaoka臨床分期分為：B3型胸腺瘤組中Ⅰ/Ⅱ期12例，Ⅲ/Ⅳ期8例；胸腺癌組中Ⅰ/Ⅱ期13例，Ⅲ/Ⅳ期15例。本研究經我院倫理委員會批準同意。

1.2研究方法 免疫組化SP法檢測MGMT蛋白表達情況，兔抗人MGMT 單克隆抗體購于abcam公司，免疫組化染色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術開發公司，具體操作按說明書進行。MGMT抗體為細胞核和漿著色，在鏡下細胞核、漿棕染并且明顯強于背景者為陽性，反之為陰性。結果判定：每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數200個細胞，采用半定量積分法判斷結果[5]，陽性細胞百分率分為0～4分：陽性細胞<5%為0分，陽性細胞6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將染色強度分為0～4分：無染色0分，弱染色(淡黃色)1分，中等染色(棕黃色)2分，強染色(棕褐色) 3分。陽性細胞的百分率與陽性細胞染色強度的乘積進行評分，0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為陽性，9～12分為強陽性，將陰性與弱陽性視為陰性表達即表達缺失，陽性與強陽性視為陽性表達。

2 結果

2.1MGMT蛋白在B3型胸腺瘤、胸腺癌和瘤旁組織中的表達情況 B3型胸腺瘤和胸腺癌組織中細胞質和細胞核呈淡染色，部分區域染色不明顯；瘤旁組織切片可見細胞質和細胞核內明顯棕染。見圖1。B3型胸腺瘤組的染色強度為(1.03±0.21)分；胸腺癌組的染色強度為(0.73±0.33)分；瘤旁組織組的染色強度為(1.93±0.37)分。B3型胸腺瘤組發生MGMT蛋白表達缺失的比例為35.0%(7/20)；胸腺癌組發生MGMT蛋白表達缺失的比例為78.6%(22/28)，瘤旁組織組未見MGMT蛋白表達缺失0.0%(0/12)。胸腺癌組MGMT蛋白表達缺失高于瘤旁組織組及B3型胸腺瘤組(χ2=25.004、9.261，P=0.001、0.003)，B3型胸腺瘤組MGMT蛋白表達缺失高于瘤旁組織組(χ2=14.735，P=0.008)。

2.2MGMT蛋白表達缺失與其他臨床參數關系 MGMT蛋白表達缺失與患者性別、年齡、是否合并重癥肌無力無相關性(P>0.05)；與Masaoka分期有關，且B3型胸腺瘤組和胸腺癌組中Ⅰ/Ⅱ期的MGMT蛋白表達缺失少于II/IV期(χ2=17.244，P=0.001)。見表1。

2.3總體生存率 MGMT蛋白表達缺失的胸腺瘤和胸腺癌的5年生存率(15/28，53.6%)低于MGMT蛋白表達正常者(15/20，75.0%)，差異有統計學意義(χ2=4.242，P=0.039)。見圖2。Masaoka分期為Ⅲ/Ⅳ期的患者5年生存率(11/25，44.0%)低于Ⅰ/Ⅱ期的患者(17/23，73.9%)，差異有統計學意義(χ2=12.964，P=0.001)。見圖3。

表1 MGMT蛋白在B3型胸腺瘤、胸腺癌中表達缺失與臨床參數關系[例(%)]

圖2MGMT蛋白表達缺失情況與B3型胸腺瘤和胸腺癌預后的關系

圖3不同分期B3型胸腺瘤和胸腺癌MGMT蛋白表達缺失情況與預后的關系

3 討論

B3型胸腺瘤和胸腺癌生物學行為和組織形態學相近，多表現為浸潤性生長，侵犯包膜后可進一步侵犯周圍組織或器官，影響預后[6-8]。腫瘤標記物可提示腫瘤惡性程度和評估預后，但目前缺少一種評估TET預后的標記物。MGMT是一類DNA損傷修復蛋白，直接作用于DNA的反轉錄途徑，將O6-甲基鳥嘌呤的烷化劑基團轉移到自身的半胱氨酸殘基活性位點上，促進損傷的鳥嘌呤復原。烷化劑是一類致癌物質，MGMT蛋白表達可阻止其對人體的致癌作用，但該蛋白出現表達缺失后，正常細胞會出現生長失控導致惡變，反之，如該蛋白出現表達，則可抑制細胞凋亡[9]。MGMT蛋白大大降低了烷化劑對腫瘤細胞的損傷，臨床采用含烷化劑類方案治療侵襲性TET效果差的原因之一。本研究未對患者術后輔助化療進行隨訪是不足之處。[10-12]

B3型胸腺瘤和胸腺癌鑒別主要通過組織學檢查：B3型胸腺瘤主要由胸腺上皮細胞組成，淋巴細胞成分很少，瘤細胞呈輕中度異型性，該類腫瘤較少出現瘤內出血或液化壞死等鏡下表現。胸腺癌通常分為11個病理亞型，以鱗狀細胞癌最多見，約占TET的15%～20%[4, 13]，組織學上已失去原有的胸腺的正常結構，以腫瘤細胞占據病變主體。本研究結果顯示，采用免疫組化法檢測，胸腺癌組MGMT蛋白表達缺失比例顯著高于B3型胸腺瘤組，Masaoka分期Ⅲ/Ⅳ期MGMT蛋白缺失比例高于Ⅰ/Ⅱ期，與既往文獻基本一致，提示MGMT蛋白表達缺失與TET的惡性程度呈正相關[14]。因此，免疫組化可作為組織學的補充檢查手段，更好地區分B3型胸腺瘤和胸腺癌。重癥肌無力是TET最常見的副瘤綜合征[15]，本研究結果顯示，伴重癥肌無力的胸腺癌和B3型胸腺瘤MGMT蛋白表達缺失與不伴重癥肌無力者比較差異無統計學意義，與既往文獻一致[16-18]。Hoffacker等[16]報道，重癥肌無力的發生是T淋巴細胞異常所致，MGMT蛋白功能與T淋巴細胞無明顯相關，因此MGMT蛋白表達缺失與是否伴隨重癥肌無力的發生無明顯相關性。

既往文獻報道，B3型胸腺瘤5年生存率為80%左右[19]，胸腺癌5年生存率為35%～70%[20-22]。本研究結果顯示，B3型胸腺瘤組生存率高于胸腺癌組，基本與文獻一致。目前國內較少有文獻報道通過MGMT蛋白表達狀態比較侵襲性TET的預后，本研究提示，MGMT蛋白表達缺失的病例5年生存率低于表達正常病例。由此推斷，MGMT蛋白或許能成作為評估侵襲性TET預后的新標記物。

綜上所述，MGMT蛋白是一種有效區分的B3型胸腺瘤和胸腺癌的標記物，是病理組織學的補充檢查手段，其表達缺失提示侵襲性TET預后不佳。