谷氨酰胺對壞死性小腸結腸炎預防機制的研究

孟陽（通訊作者） 施高陽 王丹 胥飛 朱玲玲

（1鹽城市第一人民醫院兒科 江蘇 鹽城 224000）

（2揚州市蘇北人民醫院新生兒科 江蘇 揚州 225000）

新生兒壞死性小腸結腸炎首次報道于1964年，多見于早產兒，是新生兒重癥監護病房病死率極高的腸道急癥[1]。近年來學者們嘗試尋找合適的NEC動物模型，研究NEC的發病機制，進一步探索其防治藥物及藥理作用。本研究主要致力于建立新生鼠壞死性小腸結腸炎模型，并探索谷氨酰胺對其是否存在預防作用。具體研究如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

采用清潔級、2日齡的健康wistar新生鼠60只，體重3～5 g，由揚州大學比較醫學中心提供，隨機分成三組：空白對照組（A）、模型組（B）、谷氨酰胺組（C）各20只。

1.2 實驗方法

A組喂養于母鼠旁。C組：0.3g·Kg-1·天-1谷氨酰胺灌胃，持續五天；B組C組：于實驗第六天起每只5mg·Kg-1·天-1LPS灌胃，持續三天；C組和B組新生鼠均代鼠乳人工喂養，代鼠乳配制參照Flores[2]方法。LPS灌胃結束后第2、6、12、24h，各時間點隨機抽取5只斷頸法處死后，留取回盲部近端腸管，進行H-E染色，留作病理標本，觀察組織形態學變化。

2.結果

2.1 腸組織損傷的程度

B組和C組各時間點腸組織平均損傷評分均高于A組，病理損傷評分高峰在6時。C組腸組織損傷評分在2、6、12h與B組比較P值均＜0.05；B組腸組織損傷評分在2、6、12、24h與A組比較P值均＜0.05；C組腸組織損傷評分在2、6h與A組比P值均＜0.05。

表 各組新生鼠腸組織損傷病理評分 （±sD）

表 各組新生鼠腸組織損傷病理評分 （±sD）

注a：與A組相比P＜0.05；b：與B組相比P＜0.05；c：與A組相比P＜0.001。

組別 2h 6h 12h 24h A 組 0.53±0.51 0.4±0.55 0.6±0.55 0.4±0.55 B 組 2.25±0.5c 3±0.82c 2.75±0.96a 1.4±0.42a C 組 1.38±0.48ba 1.6±0.55ba 1.4±0.89b 0.8±0.45

2.2 H-E染色后A、B、C組腸組織病理改變（HE×200）

A組：腸上皮和絨毛結構完整；B組2h腸上皮細胞變性，腸黏膜下層和固有層分離，絨毛萎縮、結構脫落；C組2h腸黏膜下層和固有層輕微分離，絨毛頂端脫落；B組6h腸上皮結構基本消失，黏膜下層和肌層重度水腫，絨毛結構崩解分離；C組6h腸黏膜下層和固有腫脹，絨毛斷裂、缺失；B組12h腸上皮結構較前修復，絨毛結構不清，C組12h輕微腸黏膜下層水腫，絨毛結構始修復；B組24h腸黏膜下層和基層水腫，絨毛結構始修復；C組24h腸上皮結構基本完整，絨毛結構清楚。

3.討論

1974年Barlow等首次綜合采用配方乳人工喂養聯合缺氧成功建立新生大鼠NEC模型。近年來，國內學者通過人工喂養聯合接種腸道細菌造模，發現其與人類NEC病理改變十分相似，且建立方法較為廉價、方便，較好重復[2]。本實驗對象為出生48小時的新生鼠，采用人工喂養+LPS灌胃的方法建立NEC模型。實驗中B組新生鼠于操作后逐漸精神萎靡、體毛雜亂，嚴重者驚厥，腹部青紫、血便，甚至死亡，且剖腹見胃潴留明顯，腸管擴張、水腫，血性滲出物增多，嚴重者見腸片狀出血、壞死。進一步鏡檢后發現，B組腸組織上皮被炎性細胞浸潤，固有層充血，絨毛逐漸萎縮、結構塌陷、進而崩解；其實驗中表現和病理形態學改變與人類NEC類似。同時B組腸組織損傷在2、6、12、24h與A組比較P值均＜0.05，證實其統計學意義，提示造模成功[3]。

GLn多年來被認為是非必須氨基酸，但近年來國內外學者通過大量動物實驗和臨床研究證實，Gln能維持腸結構完整性，應激狀態下更為明顯。其作為條件必需氨基酸，通過修復機體組織細胞供能，進而調節免疫。本實驗發現H-E染色后B、C組大鼠腸組織病理改變在2、6、12h有明顯不同，C組腸組織損傷輕且修復較B組快，統計C組腸道病理損傷評分在2、6、12h與B組比較P值均＜0.05，具有統計學意義，揭示Gln可能具備減輕并修復腸黏膜屏障的功效，接下來需進一步從免疫和炎癥因子表達層面探索Gln對NEC的保護機制，為臨床防治NEC的工作提供寬闊思路。