養心顆粒對易損斑塊Rho/Rho激酶信號通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影響

劉影哲,溫宇婷,張獻,王漢良,周亞濱,潘祥賓

(1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

動脈粥樣硬化是心腦血管疾病的主要病理改變,它的形成與脂質、血栓、結締組織等沉積于血管密切相關[1-2]，而脂質代謝的異常是動脈粥樣硬化發生的重要因素[3-5]，內皮細胞因受損引發的炎癥反應也同樣與之有著密切關系[6]。前期研究表明[7-8]，養心顆粒可促進血液循環、降低血液粘稠度、降低炎癥反應等，進而起到調脂、抗炎的作用。本實驗系從Rho/Rho激酶信號通路入手，研究養心顆粒對信號通路中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康家兔32只，雄性，平均體質量2.35 kg，來源于黑龍江中醫藥大學動物實驗評價中心，在通風、溫度(20～23℃)、濕度適宜的實驗室環境里分籠喂養。動物合格證號SYXK：(黑)2013-012。

1.2 實驗藥物

養心顆粒(茯苓、炙黃芪、茯神、當歸等)由黑龍江中醫藥大學附屬一院制劑室制備；法舒地爾(浙江京新藥業股份有限公司，批號:0908221)。

1.3 儀器與試劑

2.5 mm×15 mm PTCA球囊(日本TERUMO公司)；LDL-C、TC 、ET-1、TNF-α試劑盒(美國R&D生物技術公司)；中國斑點蝰蛇毒(Chinese Russell’s viper Venom,CRVV,廣州蛇毒研究所)；組胺及Ad5-p53重組載體。

2 實驗方法

2.1 建立模型

將32只家兔隨機分為空白對照組、模型對照組、養心顆粒組、法舒地爾組。空白對照組用普通飼料喂養，喂養8周，其余組采用高脂飼料喂養后給予球囊損傷頸總動脈并予P53基因轉染建立易損斑塊模型。

2.2 給藥方法

養心顆粒組及法舒地爾組分別給予0.643 g/kg、5 mg/kg灌服，連續灌服2周，等體積的蒸餾水灌服空白對照組及模型對照組。

2.3 標本采集與檢測

家兔耳緣靜脈取血，4 000 r/min進行離心5 min，取上層離心血清，根據試劑盒檢測方法檢測血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量。

2.4 統計學處理

3 結果

3.1 對血脂LDL-C 、TC指標的影響

由表1可見，與模型組比較，養心顆粒組與法舒地爾組血清LDL-C、TC含量下降，差異有統計學意義(P<0.05)；養心顆粒組與法舒地爾組比較，血清中LDL-C、TC含量差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 各組LDL-C、TC比較

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05

3.2 對血清ET-1、TNF-α指標的影響

由表2可見，與模型組比較，養心顆粒組和法舒地爾組血清中ET-1、TNF-α含量下降，差異有統計學意義(P<0.05)；養心顆粒組與法舒地爾組比較，血清中ET-1、TNF-α含量差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 各組ET-1、TNF-α比較

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05

4 討論

Rho/Rho激酶信號通路是體內普遍存在的一條信號轉導通路[9-11],它參與細胞黏附、遷移、平滑肌細胞收縮及胞質分裂等的調節,而動脈粥樣硬化的形成過程也伴有這一系列細胞功能的參與。有研究表明，抑制Rho/Rho激酶信號通路可保護血管內皮[12-13]，其對內皮細胞(EC)骨架結構產生影響,導致EC收縮,單層通透性增加,EC屏障功能受損等[14-16]，而炎癥介質如內皮素-1、腫瘤壞死因子均能激活Rho/Rho激酶。所以我們認為動脈硬化斑塊的形成與Rho/Rho激酶信號通路的激活密切相關。

動脈粥樣硬化是動脈壁受損引發的一種慢性炎癥性疾病，它的發生始終伴有炎癥反應的參與[17-19]，并與脂質的異常沉積密切相關，研究表明[20]，主動脈TC含量與全身炎癥反應成正相關。在高血脂刺激下，動脈內皮細胞發生損傷及功能異常，脂質在內皮下沉積，逐漸出現炎性細胞浸潤，巨噬細胞介導的炎癥反應，可使LDL-C在受損的內皮管壁內膜下沉積，氧化修飾成ox LDL-C，分泌大量炎性因子，使清道夫受體吞噬ox LDL-C，轉變泡沫細胞，參與動脈粥樣硬化的形成和發展[21-22]。雖然動脈粥樣硬化的發病機制尚不確切[23-24]，但已明確TNF-α參與炎癥反應[25-26]，TNF-α可降解細胞基質，降低纖維帽功能結構，使斑塊的穩定性變差[27-28]。當TNF-α過度表達時，會對血管內皮細胞造成損害，增加血管的通透性，促使血管內斑塊的形成。又有研究發現[29], 在不同病因引起的全身炎癥反應綜合征病人血漿中ET-1含量會有不同程度增高，病理狀態下機體ET-1異常表達、釋放，出現紊亂，也參與了動脈粥樣硬化病灶形成的全過程[30]。當體內LDL-C的含量升高和炎癥反應發生時均能導致動脈粥樣硬化斑塊不穩定[31]，因此抑制體內炎癥反應和降低LDL-C含量可以有效控制疾病的發生。脂質代謝異常和炎癥反應時，很可能會激活Rho/Rho激酶信號通路，進而引發動脈粥樣硬化的發生。通過實驗研究表明，養心顆粒可降低易損斑塊Rho/Rho激酶信號通路血清中LDL-C、TC 、ET-1、TNF-α的含量，可能是通過其調節脂質代謝，抑制炎癥反應，從而抑制Rho/Rho激酶信號通路有關，為動脈粥樣硬化的治療提供了更多的線索。