青葉膽乙醇提取物的化學成分研究

王龍　郝長敏　武延生

[摘要][目的]對青葉膽乙醇提取物化學成分進行研究。[方法]利用溶劑萃取、柱層析、薄層層析、重結晶等手段，對青葉膽乙醇提取物進行化學成分分離，并通過波譜解析、顏色反應等方法對化合物進行鑒定。[結果]從青葉膽提取物中分里得到獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、1-羥基-2，3，5-三甲氧基（口山）酮、1，5，8-三羥基-3-甲氧基（口山）酮、齊墩果酸6個化合物。

[關鍵詞]青葉膽 化學成分 乙醇 提取物

近年來病毒性肝炎、肝纖維化、脂肪肝、酒精肝、藥物性肝損害及肝癌等肝類疾病已成為當今威脅人類健康的主要病因之一。分布在云南、青海、湖南等地的青葉膽可用于此類疾病的治療，青葉膽用藥以傳統中醫理論為基礎，用藥機理區別于目前臨床常用的西藥品種，并且具有我國傳統中醫藥毒副作用小的優勢。

現已有以齊墩果酸和環烯醚萜等類成分為主要活性成分的藥物投放市場，例如齊墩果酸片、獐芽菜苦苷片、肝復康片（青葉膽總苷）等。而近年來，有研究認為（口山）酮類成分具有重要的抗肝炎活性作用，因此，此類成分的研究工作為擴大青葉膽的臨床應用，以及從傳統中藥中發現作用機制新穎的保肝利膽藥物提供了重要的化學和藥理學基礎。青葉膽（口山）酮類成分的提取多以不同濃度的乙醇為溶劑，所以本文以青葉膽乙醇提取物作為研究對象，進行了一些研究工作。

一、試劑及儀器

（一）試劑

青葉膽的干燥全草購于河北安國中藥材市場，經邢臺學院化學工程與生物技術學院副教授張雪輝、武延生鑒定為龍膽科植物青葉膽（s.mileensisT.N.HoetW.I.Shi）。

100-200目層析用硅膠柱（青島海洋化工廠分廠），200-300目層析用硅膠柱（青島海洋化工廠分廠），200-300目C18反向硅膠（上海和杰科技有限公司），60-90目柱層析用聚酰胺（江蘇臨江試劑化工廠），聚酰胺薄膜（青島海洋化工廠分廠），硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠），三氯化鐵（天津化學試劑三廠），鐵氰化鉀（天津化學試劑三廠），α-萘酚（天津化學試劑二廠），實驗所用甲醇、氯仿等試劑均為分析純，水為蒸餾水。

（二）儀器

UV 1601型紫外分光光度計（日本島津公司），JOEL 300型超導核磁共振儀（日本電子公司），BruckAC 300P型超導核磁共振儀（瑞士Bruck公司），710型紅外波譜儀（美國尼高力公司），WRR型熔點儀（上海物理光學儀器）

二、實驗方法與結果

（一）提取物的制備

取青葉膽干燥全草5.0kg，粉碎成小段，分別加80%7.醇10倍、8倍、6倍回流提取3次，每次1小時，合并濾液，減壓回收乙醇，得乙醇提取物浸膏，備用。

（二）溶劑萃取

取青葉膽乙醇提取物浸膏，加水調整體積至5L，用石油醚萃取3次，每次石油醚用量為2.5L，取石油醚層，減壓濃縮，得石油醚萃取物浸膏，備用；水層繼續用氯仿萃取5次，每次氯仿用量為2.5L，取氯仿層，減壓濃縮，得到氯仿萃取物浸膏，備用；水層繼續用乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯用量為2.5L，取乙酸乙酯層，減壓濃縮，得乙酸乙酯萃取物浸膏，備用；水層繼續用水飽和正丁醇萃取3次，每次用量2.5L，取正丁醇層，減壓濃縮，得正丁醇萃取物浸膏，備用。取各部分萃取物浸膏真空干燥，粉碎，得石油醚萃取物干粉82g、氯仿萃取物干粉115g、乙酸乙酯萃取物干粉156g、正丁醇萃取物干粉128g。

（三）化學成分的分離

取石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物干粉小量，分別甲醇溶解，點于聚酰胺薄膜，以乙醇水（5：3）為展開劑，展開，噴以三氯化鐵1%：鐵氰化鉀1%（1：1）的顯色劑，檢視。結果顯示，乙酸乙酯萃取物中集中了更多種類的成分，同時其基本包含了石油醚萃取物、氯仿萃取物及正丁醇萃取物的成分，本實驗選用乙酸乙酯部分的萃取物為研究對象進行進一步分離。

取乙酸乙酯萃取物30g，加乙酸乙酯溶解拌入聚酰胺30g，真空干燥，備用。稱取聚酰胺（60-90目）500g，用95%7.醇浸泡24小時后濕法裝柱，進行柱層析，以95%7，醇洗至無色。以4%NaOH溶液2000ml洗脫，用水洗至中性后，再以3.8%HCl溶液2000ml洗脫，水洗至中性。加入拌有乙酸乙酯部分萃取物的聚酰胺，以乙醇水系統梯度洗脫，收集洗脫液，每瓶100ml。用30%7.醇2500ml洗脫，得流份120，經薄層檢視，合并相同流份得Fr1；繼續用40%7.醇5000ml洗脫，得流份21-74，經薄層檢視，合并相同流份61-70得Fr2；繼續用50%7.醇5000ml洗脫，得流份75-126，經薄層檢視，合并相同流份100-110得Fr3，繼續用60%7.醇8000ml洗脫，得流份127-220，經薄層檢視，合并流份145-158得Fr4。繼續用70%7.醇8000ml洗脫，得流份221-302，經薄層檢視，合并相同流份220-239得Fr5，合并流份250-280得Fr6。

取Fr2部分樣品，濃縮后加甲醇溶解，拌入5g硅膠，真空干燥，稱取硅膠50g，乙酸乙酯濕法裝柱，以乙酸乙酯-甲醇水（20：2：1）洗脫。收集洗脫液，經薄層檢視，得流份10-25合并為Fr2-a，流份30-40合并為Fr-b。

取Fr2-a部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，析出白色無定形粉末，得化合物1；取Fr2-b部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，析出淡黃色針狀結晶，得化合物2。

取Fr3部分樣品，濃縮后加甲醇溶解，拌入5g反向硅膠，真空干燥，稱取反向硅膠（200-300目）50g，用水濕法裝柱，分別以水、lO%7.醇、20%7.醇的順序洗脫。收集洗脫液，經薄層檢視，合并相同流份得Fr3-a，濃縮后殘渣加甲醇加熱溶解，放置，析出淡黃色柱狀結晶，濾過，重結晶，得化合物3。

取Fr4部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，得到少量黃色針狀結晶，重結晶，得化合物4。

取Fr5部分樣品，濃縮，放置，得大量黃色沉淀，濾過，用60%乙醇沖洗，得沖洗后的沉淀，經干燥后，將沉淀溶于熱甲醇，放置，析出大量黃色結晶，重結晶，得黃色片狀結晶，得到化合物5；取Fr6部分樣品，濃縮，放置，得大量白色沉淀，濾過，用60%7.醇沖洗，得沖洗后的沉淀，經干燥后，將沉淀溶于（MEOH：CHCl₂=10：3）的溶劑中，放置，析出大量白色結晶，重結晶，得白色針狀結晶，得化合物6。

（四）結構鑒定