大方縣引進(jìn)能繁母牛發(fā)生焦蟲病防治對(duì)策

萬(wàn)廷友 肖拉拉 吳位珩 徐景峨 楊莉 劉鏡 孫啟躍 蒲魯琴 廖梅

（1，貴州省大方縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 551600；2，貴州省畜牧獸醫(yī)研究所 550005；3，貴州省畜禽遺傳資源管理站 550001）

牛焦蟲病是由蜱為媒介傳播的一種蟲媒傳染病，焦蟲寄生于牛的紅細(xì)胞內(nèi)。主要臨床癥狀是高熱貧血或黃疸，反芻停止，泌乳停止，食欲減退，消瘦，嚴(yán)重者則造成死亡[1]。牛焦蟲病在貴州省的流行已有40多年的歷史，這是由于貴州屬于高原地帶，多山地灌叢，氣候多溫暖潮濕，適宜傳播媒介蜱的生長(zhǎng)發(fā)育，因此，牛焦蟲病分布于全省各地州市縣，凡是引進(jìn)純種牛、雜交牛和本地?；旌巷曫B(yǎng)放牧的場(chǎng)所，極容易發(fā)生和流行此病，如不及時(shí)治療其發(fā)病死亡率則占發(fā)病數(shù)50%～100%[2]。大方縣2016年8月至2017年6月間，通過(guò)恒大集團(tuán)大方扶貧公司引進(jìn)的西門塔爾能繁母牛陸續(xù)發(fā)病，由于當(dāng)?shù)孬F醫(yī)缺乏經(jīng)驗(yàn)，不能及時(shí)準(zhǔn)確診斷該病，按常規(guī)方法采用抗生素治療，效果不佳，導(dǎo)致部分病牛死亡。筆者及時(shí)與貴州省畜牧獸醫(yī)研究所相關(guān)專家進(jìn)行會(huì)診，并無(wú)菌采集病料 （血涂片、全血、病死牛肝、肺、脾、心、腎、淋巴結(jié)等）送至貴州省畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病研究室進(jìn)行檢測(cè)，確診為牛焦蟲病，嚴(yán)重的病牛系繼發(fā)牛出敗而死亡。現(xiàn)將具體情況匯報(bào)如下。

1 發(fā)病情況

2016年8 月至2017年6月間，大方縣通過(guò)恒大集團(tuán)大方扶貧公司陸續(xù)引進(jìn)1～3歲西門塔爾能繁母牛，通過(guò)隔離觀察后發(fā)放給貧困農(nóng)戶飼養(yǎng)，每戶養(yǎng)牛1～3頭，截止2017年6月12日共計(jì)發(fā)放扶貧牛1604頭，在農(nóng)戶飼養(yǎng)過(guò)程中不同程度發(fā)生焦蟲病，波及全縣27個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn) （辦事處），發(fā)病133頭，發(fā)病率為8.29% （133/1604）死亡57頭，死亡率為3.55% （57/1604）。

2 臨床及剖檢癥狀

2.1 臨床癥狀

病牛出現(xiàn)體溫升高達(dá)40～41.5℃，呈稽留熱。病牛精神沉郁，采食下降，反芻減少，眼結(jié)膜蒼白，貧血，喘氣，消瘦，拉茶色尿，怕累，大部分病牛出現(xiàn)啃土等異嗜現(xiàn)象。后期病牛流涎，食欲廢絕，反芻停止，后軀無(wú)力，臥地不起，倒地后3d左右死亡。同時(shí)在病牛體上采集到微小牛蜱。

2.2 剖檢癥狀

病牛脾臟脾髓變軟，呈暗紅色，白脾髓大呈顆粒狀突出表面；心肌柔軟，呈黃紅色，心臟表面彌漫性出血，心內(nèi)膜點(diǎn)狀出血；膀胱內(nèi)充盈大量紅色尿液，黏膜有出血點(diǎn)；氣管內(nèi)有泡沫狀液體，肺臟切開輕微擠壓可見帶氣泡的分泌物；血液稀薄。

3 病樣的采集

無(wú)菌采集死亡牛的肝、肺、脾、心、腎、淋巴結(jié)等組織，冷藏置于保鮮箱中；無(wú)菌采集病牛的耳尖靜脈血，制成血涂片，待自然干燥后，置于玻片盒中；微小牛蜱置于無(wú)菌小玻璃瓶中，一并送至貴州省畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病研究室。

4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

（1）血涂片染色、鏡檢，將自然干燥的血涂片，經(jīng)甲醇固定5min，用姬姆薩染液染色40～50min，沖洗，干燥，用40×10倍和100×10倍光學(xué)顯微鏡鏡檢。

姬姆薩染色液的配制：取姬姆薩染料0.6g，加于甘油50ml中，置55～60℃水浴中1.5～2h后，加入甲醇50ml，靜置1d以上，濾過(guò)即成儲(chǔ)存之姬姆薩染色原液。臨染色前，于每毫升蒸餾水中加入上述原液一滴，即成姬姆薩染色液。應(yīng)當(dāng)注意，所用蒸餾水必須為中性或微堿性，若蒸餾水偏酸，可用于每10ml加入1%碳酸鉀一滴，使其變成微堿性。

鏡檢可見，持續(xù)高熱的病牛血液中大部分的紅細(xì)胞正常形態(tài)被破壞，紅細(xì)胞內(nèi)有梨型、環(huán)形、逗點(diǎn)形、桿狀形蟲體，有些牛血涂片混合有附紅細(xì)胞體感染，鏡檢可見紅細(xì)胞邊緣不整齊，呈菜花狀或星狀狀，癥狀嚴(yán)重的病牛，80%以上紅細(xì)胞被感染 （見圖1）。

（2）采集到的微小牛蜱，取腹腔血涂片，自然干燥后，按上述方法染色鏡檢，可見紅細(xì)胞內(nèi)有梨型、環(huán)形、逗點(diǎn)形、桿狀形蟲體。

（3）將采集的病料組織接種于10%犢牛血清肉湯培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，可見肉湯均勻渾濁，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于10%犢牛血清固體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，可見灰白色、露珠狀、針尖大小的菌落，美藍(lán)染色鏡檢可見典型的兩極著色，革蘭氏染色為陰性的小桿狀細(xì)菌。

（4） PCR診斷：采用建立的牛出敗病原 （多殺性巴氏桿菌(Pm)）PCR診斷方法對(duì)和純培養(yǎng)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果可見在585bp出現(xiàn)目標(biāo)帶 （見圖2），判斷為陽(yáng)性。引物的序列為：Pm1 5′-TGCTCTATCCGCTATTTACCCAG-3′； Pm2 5′-TCCCACCACATCAAATCCCG-3′。

5 結(jié)論

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀 （高熱稽留熱、眼結(jié)膜蒼白，貧血，拉茶色尿等）、剖檢癥狀及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診為焦蟲病感染，嚴(yán)重后繼發(fā)牛出敗感染，導(dǎo)致牛死亡。

6 防治對(duì)策

6.1 消滅中間宿主

采用化學(xué)滅蜱、生物防治滅蜱、免疫學(xué)預(yù)防方法滅蜱等綜合措施，可控制微小牛蜱對(duì)牛的侵?jǐn)_，這也是防治牛焦蟲病的基礎(chǔ)。消滅牛身體上寄生蜱和圈舍內(nèi)外的蜱，可采取人工捉蜱或體表噴灑藥物的方法，用2.5%敵殺死油乳劑按1：200～l：250倍稀釋，每隔15d噴霧牛體1次，或1.5%～2%敵百蟲溶液，每7天噴霧1次，還有如殘殺威、溴氰菊酯、氯氰菊酯、驅(qū)蜱靈等按說(shuō)明書劑量使用。對(duì)圈舍內(nèi)墻面、縫隙應(yīng)定期噴灑藥物滅蜱，用藥時(shí)謹(jǐn)防人畜中毒；另外，結(jié)合人工種草、深翻土地、改良土壤等措施破壞蜱的生存條件，以消滅外界環(huán)境中的蜱；給感染微小牛蜱的牛注射大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素的長(zhǎng)效制劑來(lái)控制或消滅蜱。

6.2 定期進(jìn)行藥物預(yù)防

由于大方縣屬于高原地帶，多山地灌叢，氣候多溫暖潮濕，適宜傳播媒介蜱的生長(zhǎng)發(fā)育，因此，引進(jìn)純種牛、雜交牛和本地牛混合飼養(yǎng)放牧的場(chǎng)所，極容易發(fā)生和流行此病，除積極滅蜱外，在引進(jìn)牛應(yīng)激階段過(guò)后，在發(fā)病季節(jié)前 （5月前）采用三氮脒、青蒿素按治療量的一半預(yù)防焦蟲病，一次用藥可預(yù)防2個(gè)月左右。在老疫區(qū)一般應(yīng)進(jìn)行2～3次預(yù)防。同時(shí)，在引進(jìn)牛后，應(yīng)及時(shí)接種牛出敗疫苗。

6.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

5～9月是蜱的活動(dòng)高峰期，牛群應(yīng)避免到大量滋生蜱的牧地放牧。不從疫區(qū)引進(jìn)牛，引進(jìn)牛應(yīng)作隔離檢疫，對(duì)發(fā)病的牛進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)血液紅細(xì)胞內(nèi)有蟲體的應(yīng)及時(shí)治療，病愈牛有帶蟲免疫現(xiàn)象，當(dāng)營(yíng)養(yǎng)不良、過(guò)度使役、環(huán)境氣候突變等原因，可使病反復(fù)發(fā)作，遭受重復(fù)感染。因此，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激，提高機(jī)體抵抗力，才能有效降低本病的發(fā)生。

6.4 早期診斷

圖1 牛血涂片焦蟲顯微攝影

圖2 PCR擴(kuò)增結(jié)果

對(duì)臨床疑似病例 （如5～9月有發(fā)熱現(xiàn)象的牛）進(jìn)行涂片鏡檢，通過(guò)早期診斷結(jié)果對(duì)陽(yáng)性牛場(chǎng)采取防治措施，有助于降低本病的發(fā)病率與死亡率。對(duì)零星發(fā)生該病農(nóng)戶的牛采取有效防治，以防該病流行，最大限度降低農(nóng)戶損失。

6.5 治療

三氮脒深部肌肉注射，重癥病牛首次加腎上腺素，同時(shí)注射磺胺間甲氧嘧啶鈉控制繼發(fā)感染，連用3d。并采用中藥輔助治療：大蒜200g、灶心土100g、血余炭50g、土酒曲20g、山楂50g、厚樸50g搗碎加水調(diào)勻灌服。采用該方法治愈發(fā)病牛67頭。