ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性的Meta分析

馬如超 吳晶晶 朱曉蕓 閆波

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（coronary heart disease，CHD）是冠狀動脈粥樣硬化引起管腔狹窄或閉塞，導致心肌缺血缺氧或壞死的一類心臟病，簡稱冠心病［1］。近年來全基因組關聯分析（genome-wide association study，GWAS）分析發現CHD與基因異常表達密切相關［3］。ApoM基因是一種脂質代謝相關基因，其主要通過影響高密度相關載脂蛋白表達調節血脂水平，增加CHD的發病風險［4］。ApoM基因的多態位點rs805296（又名T-778C）與CHD發病風險的研究較多，但結果不一［5-12］。 本文對相關rs805296的病例-對照研究進行Meta分析，探討其與CHD的相關性。

資料與方法

1.檢索策略 計算機檢索 PubMed、EMbase、The Cochrane Library、中國知網學術總庫、維普數據庫和萬方數據庫，查找關于ApoM基因rs805296多態性與CHD相關的病例對照研究，檢索時限為建庫至2018年3月。檢索采用主題詞和自由詞相結合的方式進行。中文檢索詞包括冠心病、多態性、單核苷酸多態性、SNP、rs805296、T-778C；英文檢索詞包括 Single Nucleotide Polymorphisms、Polymorphism，Single Nucleotide、Nucleotide Polymorphism，Single、Nucleotide Polymorphisms， Single、 Polymorphisms，Single Nucleotide、 Single Nucleotide Polymorphisms、SNPs、mutation、 variants、 variant、atherogenesis、atherosclerosis、atherosclerosis、myocardial Infarction、infarction，myocardial、 infarctions，myocardial、 myocardial infarctions、 cardiovascular stroke、 cardiovascular strokes、 stroke，cardiovascular、 strokes，cardiovascular、heart attack、heart attacks、 myocardial infarct、infarct，myocardial、infarcts，myocardial、 myocardial infarcts、coronary diseases、diseases，coronary、coronary heart disease、coronary heart diseases、disease，coronary heart、diseases，coronary heart、heart disease，coronary、heart diseases，coronary、Apolipoproteins M。 以PubMed為例，具體檢索策略見圖1。

2.納入與排除標準 ①研究類型：病例-對照研究。②研究對象：病例組為經臨床診斷明確的CHD患者；對照組為非CHD者。③暴露因素：ApoM基因rs805296多態性。④結局指標：CHD發病風險。⑤文獻納入與排除標準：納入標準：①研究類型均為病例對照試驗；②研究對象資料完整，病例組為診斷明確的CHD患者，對照組無CHD病史；③各研究均研究ApoM基因rs805296多態性。排除標準：①病例組診斷不明確，對照組無代表性；②無法獲取相關有效數據的文獻或原始數據不完整；③綜述、病例報道、評論、信件及重復發表文獻；④研究未報告結果。

3.文獻篩選、資料提取及質量評價 由2位研究者根據納入與排除標準獨立篩選文獻、提取資料，如果不能達成統一意見則與第三名研究者討論決定。資料提取內容包括：①作者信息、發表年份；②研究類型；③人群的基本特征；④基因檢測方法；⑤病例組與對照組中基因頻率及基因型分布情況；⑥哈迪-溫伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。

（2）采用 NOS 量表（Newcastle-Ottawa Scale）評價納入研究的偏倚風險［13］，其通過研究對象的選擇、組間可比性及暴露因素3個方面共8個條目對納入研究進行評分，滿分為9分，0～4分為低質量研究，4～6分為中等質量研究，6～9分為高質量研究［14］。

4.統計學分析 基于遺傳模型進行Meta分析：①等位基因模型Cvs．T；②顯性模型（CC+CT）vs．TT；③隱性模型 CCvs．（CT+TT）；④雜合子模型TCvs．TT；⑤純合子模型CCvs．TT。效應量分析選用比值比（Odds ratios，OR）及95%CI作為二分類指標統計量。通過Q檢驗和I2進行異質性分析，當結果一致性良好或異質性低時，采用固定效應模型，反之則采用隨機效應模型［15］。發表偏倚采用Egger＇s檢驗進行判斷。以P＜0.05為差異有統計學意義［16］。其中敏感性分析和發表性偏倚采用 Stata 12.0軟件，其余分析均采用RevMan5.3。

結 果

1.文獻檢索結果 如圖 1所示，共納入8項［5-12］研究，6 篇中文，2 篇英文，病例組1 675 例，對照組1 735例。檢索流程圖如圖1。

2.質量評價 納入的研究參考NOS標準進行質量評價，結果顯示：各個研究樣本量充足，CHD診斷明確，對納入的研究基線特征均進行合理的檢驗，病例組與對照組可比性良好，對照組符合H-W平衡，納入研究的文獻質量良好。納入研究的基本特征及偏倚風險評價結果見表1。

3.Meta分析結果（1）整體分析：采用 Rev-Man5.3軟件對納入的研究進行合并效應量后提示：ApoM基因rs805296多態性在等位基因模型（Cvs．T：OR＝1.76，95%CI：1.50 ～2.06，P＝0.00，圖 2）、顯性模型（CC+CTvs．TT：OR＝1.85，95%CI：1.56～2.20，P＝0.00，圖3）、隱性模型［CCvs．CT+TT：OR＝1.92，95%CI：1.08 ～3.40，P＝0.03，圖 4）、雜合子模型［TCvs．TT：OR＝ 1.83，95%CI：1.53 ～2.19，P＝0.00，圖5）、純合子模型（CCvs．TT：OR＝2.15，95%CI：1.21 ～3.81，P＝0.009 ，圖6）中，該多態性與CHD存在相關性。

圖1 PubMed檢索策略

表1 納入研究的基線特征（±s）

表1 納入研究的基線特征（±s）

納入研究 方法 研究人數（病例/對照）年齡/歲 性別（男/女） 基因型（病例/對照）病例 對照 病例 對照 TT TC CC HWE平衡NOS評分王馨等［5］（2013） PCR-RFLP 46/60 51 ±6 53 ±9 37/9 49/11 29/51 16/9 1/0 是 5馬莉萍等［6］（2011） PCR-RFLP 46/56 51.4±5.3 51.7±6.5 / / 28/47 17/9 1/0 是 5張效林等［7］（2012） PCR-RFLP 675/636 56.4±9.9 55.8±10.4 372/303 354/282 530/556 135/74 10/6 是 6張效林等［8］（2013） PCR-RFLP 238/236 57.3±8.6 56.2±9.4 138/100 136/100 176/230 58/31 4/2 是 6黃健等［9］（2013） PCR-RFLP 220/195 63.8 ±11.1 57.9 ±10.1 122/98 92/103 145/150 66/41 9/4 是 6焦國慶等［10］（2008） PCR-RFLP 118/225 61.8±11.4 60.4 ±12.7 89/29 152/73 86/194 29/31 3/0 是 8 Zheng Lu等［12］（2014） PCR 測序 206/209 61.86 ±9.2 60.39 ±9.06 165/41 157/52 165/170 39/35 2/4 是 7 Zheng Lu 等［11］ （2009） RTPCR 126/118 62.5 ±9.4 63.0 ±10.8 98/28 88/30 99/100 25/18 2/0 是 7

圖2 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性Meta分析（C vs．T）

圖3 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性Meta分析（CC+CT vs．TT）

圖4 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性Meta分析（CC vs．CT+TT）

圖5 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性Meta分析（TC vs．TT）

圖6 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性Meta分析（CC vs．TT）

圖7 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性的敏感性分析（C vs．T）；圖8 ApoM基因rs805296多態性與冠心病相關性的漏斗圖（C vs．T）

（2）敏感性分析：采用 Stata12.0軟件，對異質性較大的遺傳模型進行敏感性分析，按質量評價標準將納入的文獻逐步剔除后重新采用固定效應模型和隨機效應模型進行分析，提示與之前結果相似，證明本研究的結果穩定、可靠。見圖7。

（3）發表偏倚分析：采用Egger回歸法驗證 Meta分析是否存在發表性偏倚，結果提示：CHD在所有比較模型中均無發表性偏倚（P＞0.05），結果屬實可信（圖8，表2）。

表2 發表偏倚檢驗結果

討 論

隨著對CHD危險因素、發病機制的逐步認識，CHD的診療取得了一定的成果，但CHD的發病率、病死率仍在逐年增加［17］。GWAS分析發現，CHD與遺傳易感性存在著明顯的相關性［3］，其中脂質代謝基因對CHD的發生發展起重要作用［18］，因而CHD遺傳關聯研究已成為CHD研究的一個新方向。ApoM是一種高密度脂蛋白相關載脂蛋白，參與膽固醇的逆向轉運［19］。ApoM的表達受其基因的調控，目前已有多項研究表明ApoM基因與糖尿病、CHD、血脂異常、風濕性關節炎等疾病有關［20，21］。ApoM基因位于6號染色體，其過表達可增加血漿HDL-C水平，促進前β-HDL生成，從而預防動脈粥樣硬化的發生發展［22］。ApoM基因的表達調控受其上游的作用原件如啟動子、增強子、沉默子等影響，多項研究發現ApoM基因啟動區rs805296多態性與CHD存在相關性。因而本文共納入8篇符合標準的相關文獻，分析兩者的相關性，分析后發現在五種模型中的C等位基因是CHD發病的危險因素，可能是該多態位點影響了ApoM基因的表達調控，進而影響了HDL-C的轉運，促進CHD發生發展。

本研究的局限性：本研究納入的研究均為病例對照研究，論據的論證強度可能不足；本文納入的研究樣本量相對較小，可能缺乏代表性，引起假陽性結果；本文的納入的研究均為中國漢族人群，不能代表其他民族人群，代表性可能不強；CHD的調控并非單一基因作用的結果，本文僅納入ApoM基因單個核苷酸多態性，未考慮其他相關基因的影響；CHD的發病是環境跟基因共同作用的結果，本文只考慮基因作用的影響，未考慮其他環境因素的影響。

綜上所述，本研究結果初步推定ApoM基因rs805296多態性與CHD的發病有關，其C等位基因是CHD潛在危險因素，未來需要進一步開展大樣本、多中心、多民族的的高質量研究來進一步佐證其在CHD發病中的作用。