重癥腺病毒肺炎患兒T細胞亞群變化及其臨床意義的研究

鄭麗麗 許航燕 應旦紅

肺炎是兒童常見病，也是發展中國家5歲以內兒童疾病死因之首[1-2]。患兒年齡越小其自身免疫功能越低，所以重癥肺炎多見于未滿1歲的嬰兒[3]。腺病毒（Adenovirus，Adv）是導致嬰幼兒致死性肺炎的主要病原之一，它是一種DNA病毒，在1953年由Rowe等[4]首次從人腺樣體細胞分離到。已知人Adv有42個血清型，命名為腺病毒H1～H42，其中H7和H3二型是引起腺病毒性肺炎的主要病原體，所引起的肺炎常較嚴重，可以致死[5]。關于腺病毒性肺炎的免疫損害機制、重癥時機體細胞免疫功能異常的研究國內外均較少。本研究通過測

定腺病毒性肺炎患兒的T細胞亞群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值，分析重癥與非重癥患兒以及重癥患兒中急性期與恢復期上述指標的變化，希望能有助于早期識別重癥肺炎，及時干預，減輕疾病對人體的損害，避免嚴重的并發癥及后遺癥。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2013年12月至2017年12月我院按照《諸福棠實用兒科學》急性支氣管肺炎的診斷標準并進行咽拭子熒光PCR檢測Adv核酸陽性者、診斷為肺炎的60例住院患兒作為觀察對象。排除標準：（1）伴有支氣管哮喘、肺結核等其他呼吸系統疾病；（2）伴有免疫系統疾病；（3）近期服用過糖皮質激素或者免疫抑制劑、抗生素等；（4）營養不良。其中重癥肺炎32例（符合《諸福棠實用兒科學》7版重癥肺炎的診斷標準[1]：嚴重的缺氧及毒血癥，有呼吸衰竭，或發生心血管、神經和消化等系統功能障礙），男18例，女14例，年齡2個月～12歲，平均（25.1±17.6）個月；非重癥肺炎 28例，男13例，女 15例，年齡 1個月～9歲，平均（27.2±11.5）個月。兩組患兒性別、年齡比較差異均無統計學意義（均P ＞0.05）。

1.2 方法 兩組患兒均于入院時抽取靜脈血2ml送檢測定血清T細胞亞群水平，重癥肺炎組再于恢復期（住院治療1周）進行第2次檢查；同時行胸部X線、腹部B超、心電圖等檢查。兩組患兒的治療按照支氣管肺炎臨床路徑設定處理，重癥肺炎患兒供氧，部分予糖皮質激素治療。兩組患兒均未使用丙種球蛋白，無死亡病例。

1.3 T細胞亞群檢測 采用流式細胞術測定，使用美國BD公司提供的MultiTEST試劑盒，嚴格按照要求進行操作。將100μl抗凝血加20μl熒光單克隆抗體，同時作陰性對照。避光室溫作用20min，溶去紅細胞后，固定劑固定。通過MultiSET軟件分析得到上流式細胞儀測定，以陰性對照測出本底參數，調節熒光補償，設定陽性參數值，軟件將計算出陽性表達細胞比例，從而得出CD3、CD4、CD8各淋巴細胞亞群比例及計算出CD4/CD8比值。

1.4 統計學處理 應用SPSS22.0統計軟件，計量資料用表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患兒T細胞亞群水平的比較 重癥肺炎組CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值均低于非重癥肺炎組，差異均有統計學意義（P＜0.05或0.01），見表1。

表1 兩組患兒T細胞亞群水平的比較

2.2 重癥肺炎患兒急性期與恢復期T細胞亞群水平的比較 重癥肺炎患兒恢復期 CD3、CD4、CD8及 CD4/CD8比值均高于急性期，差異均有統計學意義（P＜0.05或 0.01），見表 2。

3 討論

AdV為DNA病毒，在感染機體細胞內復制的周期中，可引起細胞的溶解和死亡。在引起壞死的過程中，中性粒細胞、炎性介質也起著重要作用[6]。當AdV感染機體時，首先會激發炎癥反應，這是人體進行抵御的首要反應，會引起細胞因子和淋巴細胞亞群發生紊亂，嚴重時可導致全身炎癥反應綜合征[7]。

表2 重癥肺炎患兒急性期與恢復期T細胞亞群水平的比較

T淋巴細胞來源于骨髓，在胸腺內分化發育成熟后，移行至外周淋巴組織的T細胞區，執行特異性免疫應答，參與機體中重要的細胞免疫功能。CD4是協助發揮免疫功能的細胞，CD3為成熟的T細胞，CD8則是免疫抑制細胞，而CD4/CD8的比值則是綜合反映了機體整體的免疫狀態。當機體受感染時，淋巴細胞亞群的數量或功能發生改變，機體就會出現免疫功能紊亂，從而引起疾病的發生與發展。當CD3、CD4 T淋巴細胞受刺激后，大量增值分化成Th1、Th2淋巴細胞，具有廣泛的免疫應答正調節作用，反映機體免疫調控情況[8]。Th1介導細胞免疫過程，Th2參與體液免疫過程。CD3、CD8 T淋巴細胞為抑制/殺傷性T淋巴細胞，多表達在Ts淋巴細胞和細胞毒性T淋巴細胞（Tc細胞）上，Ts淋巴細胞對免疫應答起負調節作用，具有抑制機體免疫應答或細胞毒的功能。正常情況下CD4 T淋巴細胞與CD8 T淋巴細胞相互制約，產生適度的免疫應答，既能清除異物，又不損傷機體自身組織，使機體免疫功能處于動態平衡狀態[9]。

本研究發現，腺病毒肺炎重癥組患兒外周血CD3 T淋巴細胞、CD4輔助性T細胞和CD8 T淋巴細胞的比例較非重癥時降低，差異有統計學意義，提示AdV感染患兒機體的細胞免疫功能下降，與既往相關研究結論相符[10-12]。CD4/CD8的比值是反應輔助性T細胞與抑制性T細胞之間平衡的重要指標，正常情況下，兩者互相制約達到平衡。本研究中AdV感染時重癥組較非重癥組患兒外周血CD4/CD8的比值均顯著降低，提示AdV感染后機體存在細胞免疫功能的紊亂。在恢復期外周血CD3 T淋巴細胞、CD4/CD8 T淋巴細胞的比例較急性期有明顯回升，差異有統計學意義，提示免疫紊亂重新達到平衡。

綜上所述，AdV所致重癥肺炎發生時，患兒外周血CD3 T淋巴細胞、CD4輔助性T細胞、CD8 T淋巴細胞的比例及CD4/CD8的比值均降低,提示AdV感染患兒機體的細胞免疫功能下降，經治療后，恢復期這些指標不同程度回升，提示檢測這些指標，可能有利于重癥肺炎的治療效果判斷，為腺病毒肺炎的嚴重程度和療效判斷提供客觀監測依據。