壯腰健身丸質量標準研究△

沈敏，趙雯，劉敏，任琦，付輝政

(江西省藥品檢驗檢測研究院，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029)

壯腰健身丸收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十四冊[1]，系由女貞子(酒蒸)、黃精、熟地黃、金櫻子、狗脊、制何首烏、千斤拔七味藥材組成，具有壯腰健身的功效。用于腰酸腿軟，頭暈耳鳴，眼花心悸，陽萎遺精等癥。壯腰健身丸標準僅有性狀、顯微鑒別、檢查項目，難以有效控制產品質量，目前未見有關壯腰健身丸質量控制方面的報道。為了有效地控制該產品的質量，保證其安全性和有效性，本實驗采用TLC 法對壯腰健身丸中熟地黃[2-3]、制何首烏[2，4-5]進行定性鑒別研究，并運用HPLC 同時測定其中特女貞苷的量[2，6-8]，為該制劑的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AD高效液相色譜儀，四元泵、自動進樣器、柱溫箱、PAD檢測器、LC solution工作站;電子天平：Sartorius BT 25 S十萬分之一天平。

1.2 試藥

壯腰健身丸樣品由江西半邊天藥業有限公司(批號：160302、160603)和江西九華藥業有限公司(批號：20160701)提供；熟地黃對照藥材(批號：121196-201406)、制何首烏對照藥材(批號：121454-201405)、特女貞苷對照品(批號：111926-201001，含量為94.4%)均購自中國食品藥品檢定研究院。硅膠G 板(青島海洋化工廠分廠)；乙腈、甲醇為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 熟地黃薄層色譜鑒別

取本品5 g，剪碎，加等量硅藻土，研勻，加水100 mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對照藥材4 g，加水60 mL，煎煮30 min，用脫脂棉濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。取缺少熟地黃藥材的陰性處方樣品5 g，并按供試品溶液的制備方法同法操作，制得陰性對照液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2，4-二硝基苯肼乙醇試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。且陰性對照在該位置上無相同顏色的斑點，無干擾。見圖1。

注：1.熟地黃對照藥材；2.陰性對照；3～5.供試品溶液。圖1 熟地黃薄層色譜鑒別

2.2 制何首烏薄層色譜鑒別

取本品6 g，剪碎，加等量硅藻土，研勻，加乙醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇3 mL使溶解，作為供試品溶液。另取制何首烏對照藥材0.25 g，同法制成作為對照藥材溶液。取缺少制何首烏藥材的陰性處方樣品6 g，并按供試品溶液的制備方法同法操作，制得陰性對照液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。且陰性對照在該位置上無相同顏色的熒光斑點，無干擾。見圖2。

注：1.制何首烏對照藥材；2～4.供試品溶液；5.陰性對照。圖2 制何首烏薄層色譜鑒別

3 特女貞苷的HPLC含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀水溶液(25∶75)；檢測波長：224 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下，特女貞苷與其他組分的色譜峰分離度良好。色譜圖見圖3。

注：A.特女貞苷對照品溶液；B.壯腰健身丸供試品溶液；C.缺女貞子(酒制)陰性對照溶液。圖3 壯腰健身丸HPLC含量測定色譜圖

3.2 對照品溶液的制備

取特女貞苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成50 μg·mL-1的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的本品，剪碎，取約3 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液濾過，取續濾液，即得。

3.4 線性關系的考察

3.5 精密度試驗

精密吸取按3.2項下方法制備的對照品溶液10 μL，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積。結果特女貞苷峰面積的RSD為0.3% (n= 6)，表明儀器精密度良好。

3.6 重復性試驗

取同一批壯腰健身丸樣品6份，每份約3 g，精密稱定，按3.3項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進行分析測定，特女貞苷的含量的平均值為0.883 5 mg·g-1，RSD為1.6%，表明該方法有良好的重復性。

3.7 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、7、14、21、28、35 h進樣測定，測得特女貞苷峰面積的RSD為0.4%(n= 6)，說明供試品溶液在35 h內穩定。

3.8 回收率試驗

采用加樣回收法，精密稱取已知含量(特女貞苷含量為0.883 5 mg·g-1)的壯腰健身丸樣品6份，每份約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份精密加入含特女貞苷 0.026 9 mg·mL-1的對照品溶液50 mL，按3.3項下方法制備供試溶液，在上述色譜條件下進行分析測定，計算回收率。結果特女貞苷的平均回收率為98.0% (n=6)，RSD為0.5%。見表1。

3.9 耐用性試驗

取本品照3.1項下方法試驗，分別用A：Inertsil ODS-SP C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、B：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、C：Thermo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)3種品牌的色譜柱按3.1項下的色譜條件對其進行測定，含量測定結果無明顯差別。

3.10 樣品測定

分別取不同批號的壯腰健身丸3批，每個樣品取3份，按3.3項下方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μL，在上述色譜條件下進樣分析，測定峰面積，用外標法計算出特女貞苷的含量，測定結果見表2。

4 討論

4.1 薄層色譜條件的選擇

本實驗選擇的薄層色譜條件下，熟地黃、制何首烏供試品色譜與對照藥材相應的位置上，顯相同的顏色斑點，陰性對照無干擾。

4.2 測定波長的選擇

采用PDA檢測器對特女貞苷對照品色譜峰進行光譜掃描，結果特女貞苷在224 nm波長處有最大吸收，由于224 nm雜峰對目標峰干擾少且穩定，故選擇224 nm作為檢測波長。

4.3 提取方法的選擇

比較了甲醇加熱回流提取，甲醇超聲提取兩種提取法，結果表明超聲提取法提取效率大于加熱回流提取法。實驗過程中比較了提取溶劑倍量(25、50、100 mL)、提取時間(30、45、60、90 min)及提取溶劑(50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇)，結果表明，提取溶劑量為50 mL、提取時間為60 min和提取溶劑為甲醇時能將特女貞苷完全提取，作為最終提取方法。

4.4 色譜條件的優化

本實驗通過摸索乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液、甲醇-甲酸水溶液和甲醇-磷酸二氫鉀水溶液按一定比例混合作為流動相，考察其分離度，結果以甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀水溶液(25∶75)為流動相，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃的色譜條件下供試品中特女貞苷與其他共存組分峰能達到良好的分離。

本實驗建立了壯腰健身丸中特女貞苷的HPLC 含量測定方法，并對方中主要藥味熟地黃、制何首烏進行了TLC 定性鑒別。實驗結果表明，所建立的方法操作簡便、結果可靠、重復性好。