箭葉淫羊藿適宜采收期的研究△

任龍飛，董誠明，蘇秀紅*，杜真輝

(1.河南中醫藥大學，河南 鄭州 450000；2.呼吸疾病河南省協同創新中心，河南 鄭州 450000)

淫羊藿是小檗科淫羊藿屬EpimediumLinn.植物，始載于《神農本草經》[1]，列為中品，應用歷史較長，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效。中國的淫羊藿屬植物有55種，形成藥材商品的有15種，其中有7種為主要應用品種[2]。2015版《中華人民共和國藥典》[3]收載做為淫羊藿藥材的有：淫羊藿E.brevicomuMaxim.、箭葉淫羊藿E.sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿E.pubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿E.koreanumNakai.。

采收是中藥生產過程中的重要環節，是中醫臨床安全有效用藥的前提采收時期影響中藥質量和產量，開展中藥適時采收期的研究具有重要意義和應用價值。目前關于箭葉淫羊藿化學成分、質量控制、炮制工藝、提取工藝、藥理作用等的研究較多，但是關于箭葉淫羊藿采收期的研究較少。筆者研究不同采收期對箭葉淫羊藿產量及品質的影響，旨在探尋箭葉淫羊藿的適宜采收期，為其合理采收，安全用藥奠定基礎。

1 材料

1.1 材料

箭葉淫羊藿采集于河南省駐馬店市平輿縣種植基地。經河南中醫藥大學董誠明教授鑒定為小檗科淫羊藿屬箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim。自2016年3月30日起，每月采集一次地上部分測定生物量，每次采收4 m2，10月30日采集最后一次，去除莖和葉柄后，烘干打粉備用。

1.2 試劑與儀器

Waters e2695 高效液相色譜(沃特世科技(上海)有限公司)，朝霍定A(批號：MUST-16042902)、朝霍定B(批號：MUST-16042902)、朝霍定C(批號：MUST-16042902)、淫羊藿苷(批號MUST-16042902)成都曼思特生物科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C，淫羊藿苷的測定

2.1.1 對照品的制備 分別精密稱取朝藿定A、B、C和淫羊藿苷對照品適量，加甲醇配制成每1 mL含朝藿定A 230 μg、朝藿定B 598 μg、朝藿定C 654 μg、淫羊藿苷4044 μg的混合對照品溶液，置于4 ℃冰箱保存。

供試品溶液的制備 精密稱量過60目篩的淫羊藿藥材粉末1 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密量取20 mL 50%乙醇加入，稱定重量，超聲(200 W，40 KHZ)20 min，用50%乙醇補足重量，過濾，取續濾液，用于測定朝藿定A、B和淫羊藿苷。另取供試品溶液0.5 mL，用甲醇稀釋至50 mL，過濾，取續濾液用于測定朝藿定C。

2.1.2 色譜條件 色譜柱Unitary C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(25∶75)，柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：270 nm，進樣量10 μL。

2.1.3 線性關系考察 將上述混合對照品溶液稀釋成6個不同的濃度，按2.1.2項下色譜條件測定。以進樣濃度(μg·mL-1)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得到朝藿定A、B、C和淫羊藿苷的回歸方程分別為：Y=1.754 2×106X-7.479 4×104(r=0.999 1)，線性范圍為0.132～2.300 μg；Y=1.995 8×106X-1.717 1×105(r=0.999 4 )，線性范圍為0.204～5.980 μg；Y=2.107 2×106X-2.318 4×105(r=0.999 3)，線性范圍為0.082～6.54 μg；Y=2.205 8×106X+4.452×105(r=0.999 2)，線性范圍為0.202～40.44 μg。標準品和樣品測定圖譜見圖1，含量測定結果見表1。

2.1.4 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液，連續進樣6次，分別計算4個黃酮類成分峰面積的RSD值在0.75%～1.77%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 重復性試驗 稱取同一樣品5份，按照2.1.2項下方法制備供試品溶液，進行測定，計算各黃酮類成分的質量分數RSD在1.18%～2.45%，表明方法重復性良好。

注：a.標準品；b.樣品圖；1.朝藿定A；2.朝藿定B；3.朝藿定C；4.淫羊藿苷。圖1 箭葉淫羊藿HPLC

表1 不同采收期各指標的測定結果

注：不同小寫字母表示差異顯著性具有統計學意義(P<0.05)。

2.1.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進行測定，計算4個黃酮類成分的峰面積RSD值在0.75%～1.38%，表明供試品溶液在24 h穩定性良好。

2.1.7 加樣回收試驗 精密稱取精密稱取已知含量的同一批藥材粉末0.5 g，共6份，置于具塞錐形瓶中，加入稀釋過的對照品溶液，按照2.1.2項下方法測定，計算回收率。朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C，淫羊藿苷的平均回收率分別為：98.16%、98.06%、99.69%、98.43%，RSD值均<3%。

2.2 數據結果采用DPS 9.0新復極差法進行單因素分析。

2.3 不同采收期測定結果比較

由表1可知，3月30日采收的淫羊藿葉片中四種黃酮類成分均顯著高于其它各組，但是產量最低。隨著栽培時間的增加，產量逐漸增加，到8月31日產量達到最大值，之后有所下降。但是8月31日的含量并不高，因此需要對數據進行進一步的分析，對產量和質量進行綜合評價，來確定適宜采收期。

2.4 數據分析

對以上數據選擇產量與四種黃酮類成分之和相乘的數據進行評價，即OD=產量×(朝藿定A含量+朝藿定B含量+朝藿定C含量+淫羊藿苷含量)，結果如表2。

根據產量和含量相乘的結果來看，適宜采收日期依次為8月31日>7月30日>9月30日>10月30日>6月30日>5月31日>4月30日>3月30日，8月31日前后為適宜采收日期，3月30日采收效果最差。

3 討論與結論

前期實驗對不同采收期的箭葉淫羊藿做了質量檢查，其水分、灰分、浸出物含量均符合中國藥典規定。淫羊藿苷不得少于0.50%也完全符合藥典規定，值得注意的是本實驗測得的朝藿定C含量遠高于其它黃酮成分。

朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C和淫羊藿苷均表現為3月30日生長初期最高，但其大部分是植株的嫩葉，產量最低并不適宜采收。4月份其含量顯著降低，可能與開花結果，消耗較多養分有關，張祖榮[4]研究了開花結果對牡丹丹皮產量及質量的影響，結果表明摘蕾處理組丹皮產量及質量顯著高于自然開花組。5月份，6月份箭葉淫羊藿葉片尚未完全展開，葉片的生物產量小，折干率低，也不適宜采收。箭葉淫羊藿的產量在8月份顯著高于其他月份，含量與7、9、10月份差別不大，最終確定8月份為最適宜采收時期。

采收期的確定要結合產量和含量，目前關于淫羊藿的采收期，潘丕克[5]發現不同品種、不同栽培地的淫羊藿采收期也不相同。于俊林[6]通過測定朝鮮淫羊藿不同采收期的淫羊藿苷和總黃酮含量，表明8月份采收最好；張崇喜[7]研究朝鮮淫羊藿，綜合考慮淫羊藿苷和黃酮含量，選擇9月中旬為最佳采收期；何順志[8]研究不同生長期黔產天平山淫羊藿和粗毛淫羊藿葉片中淫羊藿苷和總黃酮的含量，確定4～5月的果期為最佳采收期，文中雖然提到結合產量和質量綜合考慮確定采收期，但未見其產量數據。結合黃酮含量和產量，對各個采收期的箭葉淫羊藿進行綜合評價，篩選出適宜采收時期為8月31日前后。但是關于箭葉淫羊藿適宜采收量，還有待進一步研究，因為在基地中發現，采收量的多少會影響下一年的分枝數。