CCT2和Galectin-3在胰腺良惡性病變中的表達及其臨床意義

劉光耀

胰腺癌是目前治療效果最差的惡性腫瘤之一，亟需一種早期診療新方法[1]。人含TCP1伴侶蛋白亞基2(chaperonin containing TCP1 subunit 2，CCT2)是熱休克蛋白60在真核細胞中的一個亞型，參與多種細胞的代謝，在許多惡性腫瘤組織中高表達，和腫瘤的發生、發展及預后緊密相關[2-5]。半乳糖凝集素3(Galectin-3)為一種β半乳糖苷結合蛋白，參與細胞諸多的生理功能。多項研究發現Galectin-3與惡性腫瘤關系密切[6-9]。本研究檢測胰腺導管腺癌組織、癌旁組織、良性病變及正常胰腺組織CCT2和Galectin-3的表達，分析其臨床病理學意義，探討其與胰腺導管腺癌患者預后的關系。

資料與方法

一、一般資料

收集2002年1月至2012年12月間中南大學湘雅第二醫院肝膽外科和湘雅第三醫院普外科行胰腺導管腺癌手術切除的140例患者資料，通過電話或信件回訪及登門回訪，剔除失訪、術前和術后行輔助化療者，共106例納入本研究。同期收集距癌組織≥2 cm處癌旁組織35例、胰腺良性病變組織55例(慢性胰腺炎20例、腺瘤20例、上皮內瘤變15例)、正常胰腺組織13例作為對照。記錄胰腺導管腺癌患者的性別、年齡及腫瘤最大徑、分化程度、TNM分期、有無淋巴結轉移和周圍組織浸潤。隨訪2年，生存時間>2年者作為刪失病例納入統計。

二、CCT2和Galectin-3蛋白表達檢測

采用EnVision免疫組織化學法檢測CCT2和Galectin-3蛋白表達。兔抗人CCT2和Galectin-3多克隆抗體購自美國Abgent 公司，EnVisionTM檢測試劑盒購自美國Dako實驗室，嚴格按說明書操作。以一抗試劑盒中乳腺癌陽性切片作為染色的陽性對照,以磷酸鹽緩沖液(pH7.4)替代一抗作為染色的陰性對照。細胞質和(或)細胞膜中出現黃色至棕黃色顆粒定為CCT2和Galectin-3陽性細胞。隨機觀察10個高倍鏡視野的陽性細胞,根據染色強度給予0～3分(無，0分；弱，1分；中，2分；強，3分)，根據陽性細胞占總細胞數的百分比給予0～4分(<5%，0分；5%～10%，1分；11%～20%，2分；21%～50%，3分；>50%，4分)，兩者之和為總評分。總評分值0～2分為陰性，≥3分為陽性。

三、統計學處理

采用SPPSS13.0統計軟件行數據分析。計數數據以百分率表示，各變量組間比較采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法；單因素生存分析采用Kaplan-Meier法，生存期差別采用Log-Rank時序檢驗；多因素分析采用Cox比例風險模型。P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、胰腺良惡性病變及正常胰腺組織CCT2和Galectin-3蛋白表達

106例胰腺導管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達率分別為54.7%(58例)和50.9%(54例)，35例癌旁組織CCT2、Galectin-3陽性表達率分別為25.7%(9例)和28.6%(10例)，55例胰腺良性病變組織CCT2、Galectin-3陽性表達率分別為23.6%(13例)和20.0%(11例)， 13例正常胰腺組織均無CCT2、Galectin-3表達(圖1、2)。胰腺導管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達率顯著高于癌旁、慢性胰腺炎、腺瘤、上皮內瘤變及正常胰腺組織，差異均有統計學意義(P值均<0.05)。癌旁組織和良性病變組織CCT2、Galectin-3陽性表達的導管上皮均呈輕至重度非典型增生或Ⅱ、Ⅲ級上皮內瘤變。

圖1 腺癌(1A)、腺瘤(1B)、慢性胰腺炎(1C)組織CCT2蛋白表達(免疫組化染色 ×200)

圖2 腺癌(2A)、癌旁(2B)、上皮內瘤變(2C)組織Galectin-3蛋白表達(免疫組化染色 ×200)

良性病例中慢性胰腺炎、腺瘤及上皮內瘤變的CCT2陽性表達率分別為20.0%(4/20)、25.0%(5/20)和26.7%(4/15)；Galectin-3陽性表達率分別為15.0%(3/20)、25.0%(5/20)和20.0%(3/15)，組間差異均無統計學意義。

二、胰腺導管腺癌組織CCT2和Galectin-3表達與臨床病理參數的關系

淋巴結轉移及TNMⅢ+Ⅳ期的胰腺導管腺癌患者的CCT2、Galactin-3陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移及TNMⅠ+Ⅱ期患者，周圍組織器官浸潤的胰腺導管腺癌CCT2陽性表達率顯著高于未浸潤周圍組織器官者，低分化腺癌Galactin-3陽性表達率顯著高于高分化者，差異均有統計學意義；而患者年齡、性別及腫瘤最大徑與CCT2、Galectin-3陽性表達無明顯相關性(表1)。

58例胰腺導管腺癌CCT2陽性中40例Galectin-3陽性，48例CCT2陰性中39例Galectin-3陰性，CCT2與Galectin-3表達顯著相關(χ2=16.646，P=0.000)。

三、影響胰腺導管腺癌患者生存因素的單因素及多因素分析

106例胰腺導管腺癌患者的生存期為2～24個月，平均(9.4±0.7)個月，術后1、2年生存率分別為 27.3%(29例)、 2.8%(3例)。腫瘤分化程度低、腫瘤直徑大、TNM分期晚、有淋巴結轉移及周圍組織浸潤、CCT2及Galactin-3 陽性患者的平均生存期均顯著短于分化程度高、腫瘤直徑小、TNM分期早、無淋巴結轉移及周圍組織浸潤、CCT2及Galactin-3陰性患者，差異均有統計學意義(表2，圖3)。Cox多因素分析結果顯示，腫瘤分化程度低、腫瘤最大徑≥5 cm、TNMⅢ或Ⅳ期、有淋巴結轉移及周圍組織浸潤、CCT2和Galectin-3表達陽性為影響患者預后的獨立危險因素(表3)。

討 論

近些年胰腺癌發生率逐年升高，大多數患者確診時已到晚期。目前臨床上常用的腫瘤標志物敏感性和特異性均不能滿足早期胰腺癌的診斷，因此亟需尋找一種新的腫瘤標志物[1]。CCT2作為一種分子伴侶，參與多種細胞代謝，在蛋白質合成中參與多種蛋白(如肌動蛋白和微管蛋白)的折疊以及真核細胞中蛋白質的裝配[10]。近年研究發現，CCT2在肝細胞癌、結腸癌、肝外膽管癌、膽囊癌、胃癌表達水平明顯高于其良性病變，而正常組織表達陰性。進一步的研究發現，CCT2的表達水平與腫瘤的分化程度、進展、轉移及預后密切相關[2-5]。Galectin-3主要存在于細胞質中，參與腫瘤發生和發展的各個方面，包括促進腫瘤細胞的增殖、黏附、分化、轉移及新生血管生成等[6-9]。惡性腫瘤患者血清Galectin-3水平明顯升高，且發生轉移患者的血清Galectin-3水平又往往高于未發生轉移者[11]。

表1 胰腺導管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達與臨床病理參數的關系

表2 影響胰腺導管腺癌患者生存的單因素分析

圖3 CCT2陽性與陰性(3A)、Galectin-3陽性與陰性(3B)患者的生存曲線

表3 影響胰腺導管腺癌患者預后的多因素分析

本研究結果顯示，胰腺癌組織CCT2、Galactin-3高表達，其表達量顯著高于匹配的癌旁組織、胰腺良性病變和正常胰腺組織。胰腺癌組織CCT2、Galactin-3表達量與腫瘤的分化、浸潤、轉移密切相關，且癌旁組織和良性病變CCT2、Galectin-3陽性表達的導管上皮均呈輕至重度非典型增生或Ⅱ、Ⅲ級上皮內瘤變，提示CCT2和Galectin-3可能參與了胰腺腺瘤從輕度非典型增生到惡變這一過程。此外，CCT2和Galectin-3表達陽性與患者術后生存期呈負相關，是胰腺癌患者預后的獨立危險因素。

然而，CCT2和Galectin-3的特異性不強，尚不能作為胰腺癌的特異性腫瘤標志物，但是否可以作為監測腫瘤的進展或轉移、判斷手術或化療藥物療效的指標有待進一步研究。