TK1和HIF-1α在甲狀腺癌中的表達及其相互關系

郭 晶，趙王成

甲狀腺癌為臨床常見內分泌腫瘤，其發病率有逐年增長趨勢[1]，為全球范圍內備受關注的惡性腫瘤之一。其病理類型以甲狀腺乳頭狀癌最為常見，臨床多采用病理學聯合影像學檢查對甲狀腺癌進行診斷，但這些檢查方法較為繁雜，且缺乏特異性檢測指標，因而其早期準確診斷率仍不高[2]。近年來，在惡性腫瘤診斷中，細胞增殖標志物的應用日益增多，胸苷激酶1（TK1）屬于一種與細胞增殖緊密相關的細胞質激酶，其水平高低可較好反映多種惡性腫瘤細胞增殖程度[3]。缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）是普遍存在于人和哺乳動物細胞內的缺氧應答調控因子[4]，研究證實其在甲狀腺腫瘤中存在明顯上調[5]。但有關TK1在甲狀腺癌中的表達及與HIF-1α的關系研究尚未見報道，為此本課題探討了TK1在甲狀腺癌中的表達及與HIF-1α表達的關系。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選取2014年3月～2017年1月醫院收治的80例甲狀腺癌患者的癌組織（研究組）和同期收治的40例甲狀腺腫患者的組織（對照組）為研究樣本，均經組織病理活檢確診。研究組中，男47 例，女 33 例，年齡 35～68(51.26±5.33)歲，均于醫院腫瘤外科行手術切除術治療；對照組中，男27例，女 13 例，年齡 38～68(52.58±5.31)歲。兩組上述基線資料比較無顯著差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 排除標準 合并其他類型惡性腫瘤者；妊娠期和哺乳期婦女；合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙。

1.3 主要試劑與設備 TK1診斷試劑盒和CSI-1型化學發光數字成像分析儀（深圳華瑞同康生物技術有限公司）；兔抗人HIF-1α多克隆抗體（Abcam公司），免疫組化試劑盒、DAB試劑盒和二抗（北京中杉金橋公司），RIPA裂解液和cDNA試劑盒、SYBR Green熒光染料（溫州長豐生物科技有限公司）。

1.4 標本取材與處理 組織標本用10%甲醛固定、石蠟包埋、切片，行免疫組化檢測。

1.5 檢測指標

1.5.1 TK1 免疫組化SP法檢測標本TK1表達情況，操作嚴格按試劑盒說明書進行，由醫院專業病理醫師在高倍鏡下觀察結果，TK1表達于細胞質中，表現為棕黃色顆粒狀物為TK1陽性。

1.5.2 HIF-1α 兩組標本蠟塊均行4 μm的切片，68℃烤片2 h，二甲苯浸泡，采用PBS洗滌后滴加3%雙氧水，EDTA緩沖液95℃煮沸抗原修復，密閉后滴加一抗 50～100 μl(濃度 1：100)4 ℃過夜，37 ℃復溫 1 h， 滴加 40～50 μl二抗，37 ℃孵育 1 h，DAB 顯色2 min，蘇木精復染30 s，梯度乙醇脫水和透明后封片鏡檢，細胞核或細胞質內有棕黃色細顆粒為HIF-1α陽性表達。

1.6 臨床資料收集 采集納入患者性別、年齡、腫瘤直徑、中央區淋巴結轉移、臨床分期、分化程度等資料。

1.7 統計學方法 應用SPSS19.0軟件分析，計數資料以例和百分率表示，采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，行t檢驗；等級資料比較采用Z檢驗；相關性采用Spearman法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TK1和HIF-1α陽性率比較 研究組TK1和HIF-1α陽性率均明顯高于對照組（P＜0.01，表 1）。

表1兩組TK1和HIF-1α陽性率比較

2.2 TK1和HIF-1α陽性表達與甲狀腺癌病理因素的關系 TK1陽性表達甲狀腺癌者TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3+T4的構成比明顯高于TK1陰性表達者（P＜0.05），而HIF-1α陽性表達者的淋巴結轉移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的構成比明顯高于 HIF-1α 陰性表達者（P＜ 0.05），見表 2、3。

2.3 甲狀腺癌組織中TK1與HIF-1α的分析 相關性分析顯示，甲狀腺癌組織中HIF-1α表達與TK1表達呈明顯正相關（r=0.451，P＜ 0.01）。

表2TK1陽性表達與甲狀腺癌病理因素的關系（例）

3 討論

甲狀腺癌腫瘤病灶生長較為緩慢，但癌瘤早期易發生頸部淋巴結或遠處轉移，因而患者預后不良，且病死率高，目前其早期準確診斷率不高[6]。相關研究表明，在惡性腫瘤轉移中缺氧發揮著重要作用[7]。HIF屬于一種有轉錄活性的核蛋白，有刺激血管生成、腫瘤轉移等活性，HIF-1α為最常見類型。既往研究證實，HIF-1α在乳腺癌和宮頸癌等患者中存在高表達[8-9]。TK1是胸苷激酶在細胞質內存在的重要形式之一，在細胞DNA合成以及細胞增殖發揮著重要作用，劉京生等[10]研究表明，TK1在尿路上皮癌組織中存在高表達；薄維波等[11]研究則表明，血清TK1可作為原發性肝癌診療和預后效果評估的一項潛在指標。

本研究發現，研究組TK1和HIF-1α陽性率明顯高于對照組，表明甲狀腺癌組織中，TK1和HIF-1α表達水平升高，與任若冰等[13]和宋秋艷等[14]的結果一致。本研究還發現，TK1陽性表達甲狀腺癌者TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3+T4的構成比明顯高于TK1陰性表達者（P＜0.05），而HIF-1α陽性表達者的淋巴結轉移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的構成比明顯高于HIF-1α陰性表達者（P＜0.05），提示TK1和HIF-1α陽性表達與甲狀腺癌的腫瘤分期和轉移有關，與劉艷梅等[15]的結果一致。這是因為在實體瘤發生和發展各個階段，HIF-1α通過調節不同靶基因發揮重要作用，主要包括血管生成和細胞增殖及腫瘤干細胞分化等多個方面。

表3HIF-1a陽性表達與甲狀腺癌病理因素的關系（例）

TK1是嘧啶補救途徑中一種細胞周期依賴性酶，與DNA合成有關，在增殖細胞中高表達[12]。本研究進一步分析發現，甲狀腺癌組織中HIF-1α表達水平與TK1表達水平呈明顯正相關，提示TK1可能對HIF-1α表達有正調控作用，但其機制尚不明確，有待今后進一步深入研究。

綜上所述，TK1和HIF-1α在甲狀腺癌組織中的表達明顯上調，TK1可能對HIF-1α表達有正調控作用，聯合檢測TK1和HIF-1α對甲狀腺癌早期診治方案的制定有重要臨床意義。