不同標(biāo)本巨細(xì)胞病毒 DNA 檢測(cè)在新生兒巨細(xì)胞感染中的應(yīng)用

付 慧

(河南省兒童醫(yī)院，河南 鄭州 450003)

巨細(xì)胞病毒(HCMV)是導(dǎo)致患者出現(xiàn)巨細(xì)胞病毒感染的主要原因，主要分為先天性感染和后天性感染。孕婦在妊娠期間出現(xiàn)巨細(xì)胞感染時(shí)，其臨床體征及癥狀并不明顯，為隱匿性感染，少數(shù)會(huì)出現(xiàn)死胎、早產(chǎn)、流產(chǎn)以及胎兒發(fā)育遲緩[1]。新生兒免疫機(jī)制并不成熟，在出現(xiàn)巨細(xì)胞感染后，會(huì)增加腦膜腦炎、肺炎、智力下降、肝炎以及先天性耳聾等的發(fā)生概率[2]。因此，加強(qiáng)新生兒巨細(xì)胞感染患者的早期診斷和治療十分必要。本研究對(duì)不同標(biāo)本巨細(xì)胞病毒DNA 檢測(cè)在新生兒巨細(xì)胞感染中的應(yīng)用價(jià)值作一分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料 選取新生兒巨細(xì)胞感染患者50例，時(shí)間為2016年7月20日至2017年5月30日，年齡0～28 d，采集其尿液、淋巴細(xì)胞、母乳中的相關(guān)標(biāo)本進(jìn)行巨細(xì)胞病毒DNA檢測(cè)，同時(shí)對(duì)其血清標(biāo)本進(jìn)行巨細(xì)胞病毒的IgM檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 淋巴細(xì)胞HCMV-DNA檢測(cè) 采用FQ-PCR法(熒光定量PCR法)進(jìn)行檢測(cè)，將EDTA抗凝全血 1 mL加于含有生理鹽水1 mL的離心管中，之后輕搖混勻，將混合液沿試管壁加于含淋巴細(xì)胞分離液1 mL的試管中，不能混勻、震蕩，以2000 r/min的速度離心20 min，之后取淋巴細(xì)胞層再次進(jìn)行離心處理(12 000 r/min，時(shí)間為5 min)，取沉淀物，將DNA提取液50 μg加入沉淀物中，并打勻，離心數(shù)秒，100 ℃保溫10 min，離心處理(12 000 r/min，時(shí)間為5 min)，取2 μL上清進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.2 尿液HCMV-DNA檢測(cè) 采用FQ-PCR法(熒光定量PCR法)進(jìn)行檢測(cè)，充分混勻尿液樣本，將100 μL樣本加于含DNA濃縮液100 μL離心管中，充分混勻，并進(jìn)行離心處理(12 000 r/min，時(shí)間10 min)，將沉淀物加于DNA提取液20 μL中充分打勻，離心數(shù)秒，100 ℃保溫10 min，離心處理(12 000 r/min，時(shí)間5 min)，取2 μL上清進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.3 乳汁HCMV-DNA檢測(cè) 采用FQ-PCR法(熒光定量PCR法)進(jìn)行檢測(cè)，將1 mL乳汁加于離心管中，進(jìn)行離心處理(12 000 r/min，時(shí)間為5 min)，將沉淀物加于DNA提取液50 μL中充分打勻，離心數(shù)秒，100 ℃保溫10 min，離心處理(12 000 r/min，時(shí)間為5 min)，取2 μL上清進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.2.4 血清HCMV-IgM檢測(cè) 采用化學(xué)免疫發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，采集其靜脈血，加于促凝管中，血液樣本在凝固后進(jìn)行離心處理，取上清液進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)不同標(biāo)本HCMV-DNA的檢測(cè)結(jié)果以及血清的HCMV-IgM檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察分析。其中HCMV-DNA的增長(zhǎng)曲線(xiàn)為S型，且定量結(jié)果>500 copies/mL則為陽(yáng)性，其余為陰性；HCMV-IgM≥18 U/mL為陽(yáng)性，<18 U/mL為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)處理 研究數(shù)據(jù)均錄入SPSS 22.00軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，不同標(biāo)本HCMV-DNA以及血清的HCMV-IgM檢測(cè)陽(yáng)性情況等計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著性高于尿液、淋巴細(xì)胞、母乳細(xì)胞的HCMV-DNA以及血清HCMV-IgM的陽(yáng)性率，尿液標(biāo)本中HCMV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率顯著性高于淋巴細(xì)胞、母乳細(xì)胞的HCMV-DNA以及血清HCMV-IgM的陽(yáng)性率(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 各項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性情況比較

注：1)與聯(lián)合檢測(cè)比較P<0.05；2)與尿液HCMV-DNA比較P<0.05

3 討 論

HCMV是常見(jiàn)的先天性感染病毒，人體在受到HCMV感染后的3～5 d后會(huì)出現(xiàn)IgM抗體，其抗體的陽(yáng)性是對(duì)其感染進(jìn)行早期診斷的主要指標(biāo)，表明患者處于活動(dòng)性的感染狀態(tài)，但是IgM抗體釋放量的多少會(huì)受到患者的免疫反應(yīng)狀態(tài)、HCMV感染量等多種因素的影響，使得臨床以IgM抗體作為患者疾病診斷的指標(biāo)存在一定的局限性[3]。

HCMV是DNA病毒(雙鏈)的一種，屬于皰疹病毒屬，對(duì)組織培養(yǎng)細(xì)胞或宿主有著較為明顯的特異性。HCMV可以在人體的平滑肌、上皮、內(nèi)皮等多種細(xì)胞中存在，其主要的靶器官包括胰、腎、肺、肝等[4]。巨細(xì)胞感染患者的唯一傳染源是CMV，病毒可以從患者的宮頸、尿液、乳汁、血液、精液、陰道分泌物等多個(gè)部位排出，傳染性較高。

HCMV感染具有多部位、間歇性排毒的特點(diǎn)，不同患者的個(gè)體差異以及感染部位存在一定的差異性，且其不同標(biāo)本對(duì)病毒的釋放量也存在一定的差異，因此，臨床為新生兒巨細(xì)胞感染患者實(shí)施檢測(cè)時(shí)，應(yīng)將尿液、淋巴細(xì)胞的HCMV-DNA與其血清HCMV-IgM進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，若受到相關(guān)條件的限制不能聯(lián)合進(jìn)行檢測(cè)，則應(yīng)首選尿液HCMV-DNA檢測(cè)，以提高患者的疾病檢出率，為臨床治療提供依據(jù)。