結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA的表達及意義

趙璐,杜小明,張艷苓,孫國平

(1安徽醫科大學第一附屬醫院，合肥230022；2皖北煤電集團總醫院)

結腸癌是常見的消化系統腫瘤，在我國，結腸癌發病率位居所有惡性腫瘤的第六位，據統計，我國每年約有27萬新發病例，13萬死亡病例[1]。近年來，在結腸癌的早期診斷、根治手術、放療、化療及免疫治療等方面，均取得較大進展，然而，結腸癌患者的治療效果和預后并未得到顯著改善，侵襲和復發是導致結腸癌患者高病死率的主要原因[2]，臨床亟需尋找新的有效治療靶標。流行病學統計結果顯示，炎癥性腸病(IBD)患者罹患結腸癌的概率是同齡健康者的2～5倍[3]，導致IBD癌變的危險因素主要有結腸癌家族史、年齡、原發性硬化性膽管炎及腸道炎癥等，IBD患者接受抗炎治療可顯著降低罹患結腸癌的概率，腸道慢性炎癥是誘導結腸癌發生的獨立危險因素[4]。半胱氨酰白三烯(CysLTs)及其G蛋白偶聯受體(CysLTR-1和CysLTR-2)共同參與炎癥反應。有研究證實，CysLTR-1在乳腺癌[5]和膠質細胞瘤[6]等惡性腫瘤組織中表達增加，目前，有關CysLTR-1在結腸癌中表達及意義的研究甚少。2014年1～12月，我們檢測了結腸癌患者癌組織中CysLTR-1表達，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1～12月行切除手術的結腸癌患者作為研究對象，納入標準：術前未接受抗腫瘤治療；術后經病理檢查診斷為原發性結腸癌；具備完整的病例資料；患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準：合并其他惡性腫瘤；嚴重肝腎功能不全；合并全身感染等。共收集70例符合上述納入標準和排除標準的結腸癌患者，術中切除癌組織和癌旁正常組織(距離癌組織>5 cm)，生理鹽水沖洗后，立即置于液氮中保存。患者男40例、女30例，<60歲者32例，≥60歲者38例；腫瘤直徑<5 cm者42例，≥5 cm者28例；腫瘤低分化者36例，中高分化者34例；無淋巴結轉移者37例，有淋巴結轉移者33例；TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者36例，Ⅲ～Ⅳ期者34例。本研究獲得醫院倫理委員會審核批準。患者出院后，通過電話、電子通訊與復診相結合的手段對患者進行隨訪(截止隨訪時間2018年1月)。

1.2 結腸癌患者癌組織中CysLTR-1 mRNA表達檢測 采用Real-time PCR法。取出液氮保存的組織樣本，每份組織各切取約20 mg，TRIzol試劑提取組織樣本中總RNA，參照逆轉錄試劑盒的反應體系和反應條件(37 ℃ 15 min；85 ℃ 5 s)，將RNA反轉錄為cDNA，并置于-20 ℃冰箱中保存備用。參照Real-time PCR反應體系和反應條件(預熱95 ℃ 30 s；變性95 ℃ 10 s；退火60 ℃ 1 min；延伸72 ℃ 10 min，共35個循環；4 ℃ 30 min)，進行Real-time PCR反應，內參GAPDH正向引物：5′-GCTCCTCTATGTATGTCGTGA-3′，反向引物：5′-ACCTCCGGCCATGGTGTCTGA-3′；CysLTR-1正向引物：5′-GCACCATTGCTTTGTATCTCAACC-3′,反向引物：5′-ATACCTAACGACACATACCAACC-3′。2-ΔΔCT法計算結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA相對表達量。

2 結果

2.1 結腸癌及癌旁組織中CysLTR-1 mRNA表達比較 結腸癌、癌旁正常組織中CysLTR-1 mRNA相對表達量分別為4.16±1.22、1.26±0.31，二者比較，差異有統計學意義(t=19.275，P=0.000)。

2.2 結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA表達與患者臨床病理特征的關系 結腸癌組織中，以CysLTR-1 mRNA相對表達量的平均值為界限，將結腸癌患者分為CysLTR-1高表達組和CysLTR-1低表達組，≥平均值為CysLTR-1高表達組(36例)，<平均值為CysLTR-1低表達組(34例)。結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA表達與患者性別、年齡均不相關(P均>0.05)，與腫瘤大小、腫瘤分化程度、淋巴結轉移和TNM分期有關(P均<0.05)，見表1。

表1 CysLTR-1 mRNA表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系[例(%)]

2.3 結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA表達對患者預后的影響 CysLTR-1高表達、低表達者術后3年總生存率分別為30.56%(11/36)、55.89%(19/34)，二者比較，差異有統計學意義(χ2=4.580，P=0.032)。CysLTR-1高表達、低表達者的中位生存時間分別為23.47、27.53個月，二者比較，差異有統計學意義(χ2=3.876，P=0.049)。

3 討論

結腸癌是惡性程度較高的消化系統腫瘤，是結腸黏膜上皮細胞在遺傳、環境等多因素共同誘導下的結果，結腸癌是導致腫瘤相關死亡的主要原因[7]。據統計，結腸癌患者的5年總生存率僅30%～50%[8]，預后不佳。化療及靶向治療在結腸癌綜合治療方案中占重要地位，是提高結腸癌患者治療效率的關鍵，因此尋找新的靶向治療靶標分子，對提高結腸癌患者生存率、改善患者預后均有積極意義。

越來越多的研究關注炎癥因子在結腸癌腫瘤形成及惡性進展中的功能，其中白三烯(LTs)和前列腺素是近年來的研究熱點[9]。研究證實，LTs及其受體參與促進了多種腫瘤形成，是一種新近發現的致瘤機制[11]。CysLTs屬于LTs，是由花生四烯酸和5-脂氧合酶代謝途徑產生的一系列強效炎癥介質，包括白三烯C4(LTC4)、白三烯D4(LTD4)和白三烯E4(LTE4)。CysLTs與其受體(CysLTR-1和CysLTR-2)相互作用，在炎癥反應、細胞遷移[11]等過程中發揮生物學效應，如CysLTs在過敏性鼻炎中表達增加，CysLTR-1拮抗劑(如孟魯斯特)能有效抑制CysLTs與CysLTR-1結合，可有效減輕過敏性鼻炎引起的不適癥狀[12]。Savari等[13]證實，CysLTs及其受體是連接炎癥與結腸癌的重要橋梁。

本研究結果顯示，CysLTR-1 mRNA在結腸癌組織中的相對表達量高于癌旁正常組織，差異有統計學意義，由此推測，CysLTR-1在結腸上皮細胞癌變過程中可能發揮促進作用。另外，本研究結果發現，在腫瘤直徑較大的腫瘤組織中，CysLTR-1呈較高表達狀態，提示CysLTR-1可能促進結腸癌細胞增殖。低分化腫瘤組織中，CysLTR-1表達水平較高，有淋巴結轉移和較高TNM分期的腫瘤組織中，CysLTR-1表達較高，以上結果提示CysLTR-1與其配體在結腸癌細胞去分化、侵襲轉移等惡性進展過程中發揮促進作用，是導致結腸癌患者病情進展的正向調控因子。

Csandl等[14]證實，CysLTR與腫瘤多藥耐藥性關系緊密，CysLTR拮抗劑可增強腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，改善患者預后。本研究結果發現，CysLTR-1高表達者的術后3年總生存率較低、中位生存時間較短，由此推測，CysLTR-1高表達可能預示結腸癌患者較低的生存率和較短的生存時間，監測結腸癌組織中CysLTR-1表達，有助于預測結腸癌患者預后情況。

綜上所述，結腸癌組織中CysLTR-1 mRNA呈高表達，監測術后結腸癌組織中CysLTR-1表達，有助于對患者進行病情進展和預后評估。