ELISA法和化學發(fā)光法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果比較

王崢

【摘要】目的：比較ELISA法和化學發(fā)光法檢測乙肝表面抗原的區(qū)別。方法：研究于2017年10月-2018年2月期間在我院收集體檢人員的血液標本采集300份，分別用ELISA法和化學發(fā)光法檢測乙肝表面抗原，對兩種檢測方法的檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果：300份血液標本，ELISA法檢測出24份陽性結(jié)果，陽性檢出率（800%），化學發(fā)光法檢測出46份陽性結(jié)果，陽性檢出率（1533%），數(shù)據(jù)顯示化學發(fā)光法陽性檢出率顯著更高，兩項試驗結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。結(jié)論：ELISA法耗時較長，干擾因素較多，敏感性低易漏診或出現(xiàn)假陽性：化學發(fā)光法所需時間短，干擾因素少，敏感性高準確率高。

【關鍵詞】 乙肝表面抗原；ELISA法；化學發(fā)光法

【中圖分類號】R249【文獻標志碼】

B【文章編號】1005-0019（2018）06-047-02

慢性乙型肝炎（乙肝）是臨床常見傳染性疾病，據(jù)相關部門統(tǒng)計的數(shù)據(jù)顯示，我國約有1億余人正在受到乙肝病情和病毒的影響，現(xiàn)階段慢性乙肝已經(jīng)成為威脅人民生命健康的殺手。所以乙肝的實驗室檢測對乙肝的預防治療非常重要[1]。乙肝表面抗原（HBsAg）屬于乙肝病毒患者病毒外殼蛋白，其本身無傳染性，但是因其常與乙肝病毒共同出現(xiàn)和存在，導致其已經(jīng)成為細胞被乙肝病毒感染的主要標志之一。HBsAg可在患者血液、精液等以及各種分泌物中存在，可在患者不注意的情況下產(chǎn)生感染反應[2]。患者感染乙肝病毒3～6個月左右，其丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高之前約2～8周，患者的血清檢驗結(jié)果可呈陽性。同時急性乙肝患者早期接受干預后，其病情可轉(zhuǎn)陰，而慢性乙肝的相應指標則繼續(xù)顯示為陽性[3]。目前我院實驗室有ELISA法和化學發(fā)光法兩種方法檢測乙肝表面抗原，通常用ELISA法進行大批量體檢，以確保每一份實驗結(jié)果的準確。現(xiàn)對這兩種方法進行比較分析。

1資料與方法

11標本選擇選擇我院2017年10月-2018年2月的體檢人員的血液標本，主要選擇高危公共場所服務人員，共300份。其中包括男193例，女107例，年齡區(qū)間20～66歲，平均年齡（428±26）歲。

12試劑和儀器ELISA法試劑為英科新創(chuàng)科技有限公司，主要儀器為酶標儀雷杜RT3000，洗板機科華360，嚴格按照說明書操作；化學發(fā)光法儀器為美國Abbott公司生產(chǎn)的i1000SR化學發(fā)光分析儀，試劑為雅培化學發(fā)光乙肝表面抗原定量檢測試劑盒。

方法：300份血液標本均于受檢者清晨空腹狀態(tài)下抽取，均為肘靜脈血樣，每個受檢者抽取5ml，將其放置于裝有抗凝劑的試管內(nèi)，后以每分鐘3000r速度進行10min離心處理，后分別進行ELISA法和化學發(fā)光法對HBsAg進行檢驗。

13結(jié)果陽性的判讀ELISA法：標本的S/CO>10為陽性，化學發(fā)光法：>005 IU/ml為陽性。確認試驗以抑制率>50%為陽性。

14統(tǒng)計學方法采用計數(shù)資料采用x2比較，若P<005則差異顯著，有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

300份血液標本經(jīng)過不同方法乙肝表面抗原檢測后，ELISA法檢測出24份陽性結(jié)果，陽性檢出率（800%），化學發(fā)光法檢測出46份陽性結(jié)果，陽性檢出率（1533%），數(shù)據(jù)顯示化學發(fā)光法陽性檢出率顯著更高，兩項試驗結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義（x2=78275，P<005）。

3討論

目前檢測乙肝檢測方法較多，應用頻率較高的檢測方法主要包括膠體金免疫層析法（GICA）、化學發(fā)光微粒子免疫檢測法（CMIA）以及酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。現(xiàn)階段我國臨床實驗室在檢測HBsAg時一般采用ELISA法，但是部分患者HBsAg標本濃度偏低，針對該類標本的檢測ELISA法的靈敏度偏低，導致漏診發(fā)生率較高，對患者，尤其是需輸血患者的臨床治療造成了一定的不良影響。GICA是以ELISA法為發(fā)展基礎建立的檢測技術(shù)，該檢測方法操作簡單，且無需特殊設備的支持即可開展良好的檢測，在HBsAg的檢測中應用較為廣泛，但是該種檢測方法也存在一定的不足之處，即該種檢測法對低濃度HBsAg標本的靈敏性相比ELISA法更低，且具有較高的假陽性和假陰性結(jié)果檢出率，導致其臨床檢測效果不穩(wěn)定。近年來國家經(jīng)濟的快速發(fā)展，帶動了醫(yī)療水平和醫(yī)學技術(shù)的進步，使得CMIA得到了良好的發(fā)展，其在HBsAg檢測中具有較高的靈敏度，有效彌補了ELISA法對低濃度HBsAg檢測率較低的問題。同時CMIA法可將HBsAg標本、生物素所標記的三氯聯(lián)吡啶釕、單克隆抗體等物質(zhì)加入到一個環(huán)境中一同進行溫育，以形成一種磁性微珠包被抗體、抗原以及發(fā)光劑的復合物質(zhì)。在儀器中存在的緩沖液處理下，磁性微粒經(jīng)過電極表面的時候，電極下方安裝的磁鐵會將其吸引住，而發(fā)光標記物則會被沖走，使得該種檢測方法的陽性檢出率得到了保證。全自動化學發(fā)光法所有的操作控制由儀器操作，具有靈敏度高，準確率高，無輻射等優(yōu)點，避免了人工操作不當?shù)挠绊懸蛩亍６鳨LISA方法其靈敏度、 重復性不及發(fā)光法，易造成漏檢和假陽性，再加上酶的純度和反應過程容易受環(huán)境因素影響，如檢測時間、血細胞、加樣量、洗板方式、血清分離等而導致結(jié)果穩(wěn)定性不好。本次研究結(jié)果顯示，ELISA法對HBsAg陽性檢出率為（800%），化學發(fā)光法對HBsAg陽性檢出率為（1533%），由此可見化學發(fā)光法在HBsAg檢測中的應用效果更好。

綜上所述，化學發(fā)光法與ELISA法均具有較高的陽性率，但化學發(fā)光法為定量檢測更敏感。化學發(fā)光方法檢測靈敏度高于ELISA，所以我院對ELISA方法檢測的低濃度臨界值標本和對于ELISA方法檢測陽性的標本均用化學發(fā)光方法進行復檢。

參考文獻

[1]熊海燕，羅業(yè)飛，劉海燕，等.酶聯(lián)免疫吸附試驗和電化學發(fā)光免疫法檢測孕婦乙型肝炎表面抗原結(jié)果的比較[J].中華流行病學雜志，2017，38（11）：1537-1540

[2]王丙國.化學發(fā)光法與ELISA法檢測乙型肝炎病毒標志物的結(jié)果比較[J].醫(yī)療裝備，2016，29（8）：45-46

[3]劉麗，何露，孔凡虹，等.應用快速孵育法優(yōu)化酶聯(lián)免疫吸附實驗過程探討——以乙型肝炎病毒表面抗原檢測為例[J].標記免疫分析與臨床，2016，23（9）：1073-1076