維生素D缺乏的過敏性紫癜患兒外周血T細胞亞群、NK細胞計數變化

雷麗

(遵義市第一人民醫院，貴州遵義563000)

過敏性紫癜是一種免疫復合物介導的全身中小血管炎綜合征，又被稱為亨舒綜合征(HSP)[1]。臨床表現為血小板不減少性紫癜，常伴有腹痛、關節疼痛、便血、血尿、蛋白尿等癥狀，可發生于任何年齡，多見于2～8歲兒童，男性發病率高于女性，發病有一定季節性，以春秋兩季居多[2]。HSP是兒科常見病，近年來發病率逐漸升高，且易累積腎臟，危害患兒健康，給日常生活造成嚴重影響。HSP的發病原因目前尚不清楚，免疫功能失調和感染可能是其發病機制中的重要環節[3]。維生素D是一類具有生物活性的脂溶性類固醇衍生物，是體內激素的重要前體物質，其基本功能是調節鈣磷代謝[4]。隨著對維生素D研究的深入，逐漸發現維生素D與心血管疾病、自身免疫疾病及腫瘤的發生有關[5]。HSP作為一種免疫性血管炎，HSP患兒血清維生素D水平是否與細胞免疫功能有關，目前缺乏研究。本研究觀察了HSP患兒血清維生素D水平變化，以及維生素D缺乏的HSP患兒外周血T細胞亞群、NK細胞計數變化。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月～2017年1月收治的急性期過敏性紫癜患兒79例為HSP組，其中男47例、女32例，年齡(7.1±3.4)歲。納入標準：①參照《諸福棠實用兒科學》[6]中HSP的診斷標準確診；②初次發病，入院前未治療；③患兒家長自愿參加本研究。排除標準：①嚴重心肝腎功能障礙；②近期使用腎上腺皮質激素或免疫抑制劑；③免疫系統疾病，近期嚴重感染；④其他特殊病史。另選健康兒童40例為對照組，均排除過敏性紫癜、免疫系統疾病和近期免疫抑制藥物使用史，其中男22例，女18例，年齡(7.4±2.8)歲。兩組兒童性別組成和年齡相比，P均>0.05。本研究已經獲得醫院倫理委員會審查通過，入組兒童家長均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 血清25(OH)D3檢測 采集兩組兒童空腹靜脈血4 mL共兩管，其中一管靜置20 min，3 000 r/m離心15 min，采集上清液分裝至EP管中，標記后置于-80 ℃冰箱保存待測。采用化學發光法檢測兩組患者血清25(OH)D3。試劑盒購自羅氏診斷試劑公司，操作按照說明書進行。血清25(OH)D3≥30 nmol/L為正常，否則為缺乏。

1.3 外周血T細胞亞群、NK細胞計數 取HSP患兒另一管空腹靜脈血，用雙標流式細胞法檢測T細胞亞群分布，采用熒光激活細胞分離儀(FACS)進行分析，計數CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和自然殺傷細胞(NK細胞)。HSP患兒均參照《諸福棠實用兒科學》[6]中HSP的治療方法治療，進入緩解期后再次抽取空腹靜脈血4 mL，再次檢測上述指標。25(OH)D3≥30nmol/L為正常，25(OH)D3<30nmol/L為缺乏。

2 結果

HSP組、對照組兒童血清25(OH)D3水平分別為(17.63±9.21)、(31.55±12.09)ng/mL，兩組血清25(OH)D3水平相比，P<0.05。HSP組患兒血清維生素D正常36例、缺乏43例。

血清維生素D正常、缺乏的HSP患兒各亞群T細胞數目見表1。維生素D缺乏組患兒急性期外周血CD3+T細胞、CD4+T細胞、NK細胞數目均低于維生素D正常組患兒(P均<0.05)，維生素D缺乏組患兒緩解期外周血CD3+T細胞、CD4+T細胞、NK細胞數目亦均低于維生素D正常組患兒(P均<0.05)。維生素D缺乏組HSP患兒急性期、緩解期外周血CD8+T細胞數目與維生素D正常組患兒相比，P均>0.05。

表1 血清維生素D正常、缺乏的HSP患兒各亞群T細胞數目(個

注：與維生素D正常組相比，#P<0.05。

3 討論

HSP是一種免疫性血管炎，根據血管炎累及的部分分為單純性紫癜、腹型紫癜、腎型紫癜、混合型紫癜，臨床上以腹型和腎型病情較重，需要抗炎治療[8]。目前HSP尚無特異性診斷指標，根據典型臨床表現診斷本病并不困難，但因該病臨床癥狀復雜多樣，臨床中仍有較高誤診率[9]，因此尋找一種特異性指標來指導HSP的診斷和治療具有重要意義。維生素D是重要的維生素，也是體內激素的前體，食物來源的維生素D2、D3和人體通過皮膚合成的維生素D3都是沒有活性的，但是經過肝臟羥化后，生成具有較低活性的25(OH)D3，最后運至腎臟在此羥化生成具有很強生物活性的1,25(OH)D3，通過與受體結合發揮調節作用[10,11]。近年來研究發現維生素D受體廣泛表達與體內各種組織和免疫細胞中，維生素D具有調節免疫功能的作用，并且已有大量研究表明維生素D與過敏性疾病具有密切關系[12,13]。

本研究結果顯示，HSP患兒血清維生素D水平低于正常兒童，與郭佳梅等[14]的研究結果一致，提示維生素D可能參與了HSP的發病機制，維生素D可能具有防止HSP的作用。T細胞是維生素D發揮免疫調節作用的重要靶細胞，同時也是HSP發病過程中的效應細胞，通過分泌各種細胞因子調節體液免疫和機體免疫狀態[15]。CD3是成熟T細胞特有的表面標志，根據成熟T細胞表面CD分子表達差異將CD3+T細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞兩個亞群，二者的比例是反應機體免疫狀態的重要指標。HSP患兒CD3+T細胞和CD4+T細胞比例降低，患兒T細胞的分化成熟收到抑制，機體處于免疫抑制狀態，這種現象可能與機體的免疫調節代償保護有關，降低免疫功能以減輕炎癥反應，保護機體[16]。本研究結果顯示，維生素D缺乏的急性期HSP患兒細胞免疫抑制作用更加明顯，CD3+T細胞、CD4+T細胞和NK細胞數量均顯著低于維生素D正常的急性期HSP患兒；HSP患兒經治療后到緩解期，維生素D缺乏的HSP患兒CD3+T細胞、CD4+T細胞和NK細胞數量仍然維生素正常組，提示維生素D水平可能與治療效果有關，補充維生素D可能具有改善HSP患兒預后。

綜上所述，HSP患兒血清維生素D水平顯著低于正常兒童，血清維生素D水平與HSP治療前后細胞免疫功能密切相關。補充維生素D可能有助于治療HSP，但其用藥方法和效果尚有待進一步研究確認。

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