16SrRNA對于燒傷膿毒血癥患者機體免疫調(diào)控的作用研究

李明華，劉冬梅，劉進輝

吉林省人民醫(yī)院燒傷整形科，吉林長春 130021

膿毒癥是因一類感染因素導致的全身炎性反應綜合征，同時伴有機體會出現(xiàn)多器官功能障礙，研究指出[1]，在美國每年約有60多萬膿毒癥患者，且在ICU致死率高達30%～50%，其醫(yī)療費用較高，盡管如此膿毒癥的發(fā)病率及其相關的死亡率還在逐年增高。燒傷后的患者更容易出現(xiàn)膿毒癥，且燒傷患者的皮膚屏障作用被破壞，且需要長時間住院治療，危及患者的生命，目前分子生物學已經(jīng)成為了膿毒癥治療研究的熱點，在臨床上尋找一種特異性的遺傳基因位點作為膿毒癥的預防與治療的靶點勢在必行[2]，miRNA是一類重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因，參與了多種疾病的形成，其能夠通過轉(zhuǎn)錄后水平對炎癥因子和介質(zhì)的表達產(chǎn)生影響，目前研究較多的要屬16SrRNA，在該研究從2015年1月—2016年12月該院燒傷整形科收治的燒傷膿毒血癥患者50例，就16SrRNA對于燒傷膿毒血癥患者機體免疫調(diào)控的作用研究作如下分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院重癥監(jiān)護室收治的燒傷膿毒癥患者50例作為該次實驗的觀察組，其均符合美國胸外科醫(yī)師協(xié)會在1999年所提出的關于膿毒癥的診斷標準[3]，均為燒傷后患者，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準進行分組，所有研究對象均知情簽署了知情同意書，根據(jù)慢性健康狀況評分系統(tǒng)（APACHEⅡ），將其分為輕度18例，中19例，重度13例，其中男30例，女20例，年齡22～78歲，平均（53.5±15.7）歲，選取同時期于該院門診健康體檢者25名作為對照組，其中男14名，女11名，年齡 25～77 歲，平均（55.3±11.3）歲，兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法

確診后2 h內(nèi)抽取患者的靜脈血6 mL，采用肝素抗凝2 mL以備流式細胞儀檢測，2 mL用于檢測16SrRNA表達水平，剩余的2 mL應用于炎性細胞因子（TNF-ɑ、IL-10）的檢測，采用全自動生化分析儀檢測WBC水平，采用流式細胞儀方法檢測CD4+CD25+Treg細胞表達水平，采用實時定量PCR技術測定16SrRNA表達水平：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血漿中的TNF-ɑ及IL-10表達水平，所有操作需嚴格根據(jù)說明書進行，對所有患者進行全身性感染相關性器官功能衰竭評分（SOFA評分）。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計量資料用（±s）表示，采用 t檢驗，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用 χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組 16SrRNA、WBC、TNF-ɑ以及 IL-10水平比較

觀察組的16SrRNA水平明顯低于對照組，WBC、TNF-ɑ以及IL-10水平均明顯高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，見表1。

表1 兩組 16SrRNA、WBC、TNF-ɑ以及IL-10水平比較（±s）

表1 兩組 16SrRNA、WBC、TNF-ɑ以及IL-10水平比較（±s）

組別WBC（×109/L）16SrRNA(×109/L)TNF-ɑ（pg/mL）IL-10（pg/mL）觀察組（n=50）對照組（n=25）t值P值11.19±1.24 6.79±1.83 29.164<0.05 1.06±0.13 1.86±0.28 5.064<0.05 154.15±6.38 45.29±4.99 33.135<0.05 128.95±5.27 37.39±4.29 4.882<0.05

2.2 燒傷膿毒血癥患者的16SrRNA與WBC、TNF-ɑ以、IL-10以及SOFA評分的關系

燒傷膿毒血癥患者的16SrRNA與血清TNF-ɑ以、IL-10以及SOFA評分之間呈負相關關系 （r=-0.624,-0.439,-0.519，P<0.05），與 WBC 水平呈正相關關系（P>0.05），見表 2。

表2 16SrRNA與WBC、TNF-ɑ以、IL-10以及SOFA評分的線性關系

2.3 不同病情嚴重度患者外周血Treg系列表達以及16SrRNA表達

燒傷膿毒癥患者外周血Treg表達率以及16Sr-RNA表達均明顯高于健康對照組，且隨著疾病嚴重度升高而逐漸升高，輕、中、重度實驗組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表 3、圖 1。

表3 不同病情嚴重度患者外周血Treg系列表達了以及16SrRNA表達情況（±s）

表3 不同病情嚴重度患者外周血Treg系列表達了以及16SrRNA表達情況（±s）

注：與輕度組相比，aP<0.05，與中度組相比，bP<0.05，與對照組相比，cP<0.05。

病情嚴重度 Treg（%） 16SrRNA（×109/L）輕度（n=18）中度（n=19）重度（n=13）對照組（n=25）（2.63±0.79）c（2.89±0.88）ac（3.02±1.22）abc 1.29±0.15（1.33±0.13）c（1.78±0.02）ac（2.15±0.04）abc 1.06±0.13

圖1 不同病情嚴重度患者外周血16SrRNA表達情況

2.4 死亡以及存活患者的Treg、16SrRNA、IL-10水平比較

死亡患者均出現(xiàn)于重度燒傷膿毒癥患者之中，死亡組的Treg、16SrRNA、IL-10水平均明顯高于健康存活組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表4、圖2。

表4 死亡以及存活患者的Treg、16SrRNA、IL-10水平比較（±s）

表4 死亡以及存活患者的Treg、16SrRNA、IL-10水平比較（±s）

組別 Treg（%）16SrRNA（×109/L）IL-10（pg/mL）存活組死亡組t值P值2.89±1.05 3.45±0.55 3.457<0.05 0.43±0.06 0.96±0.18 4.672<0.05 51.88±5.75 65.28±13.88 5.839<0.05

圖2 存活組以及對照組的16SrRNA表達情況

3 討論

嚴重燒傷不僅會引起組織損傷，還會導致全身器官的連鎖反應或，燒傷后的機體免疫功能紊亂是引起機體全身性病理生理反應異常的重要機制，主要為炎癥反應過強以及細胞以免應答減弱，能夠使得嚴重燒傷患者出現(xiàn)全身炎癥反應綜合征(SIRS)，并對病原體更加易感[4]，燒傷后出現(xiàn)的缺血缺氧反應會導致機體內(nèi)皮細胞發(fā)生缺氧性損害，導致全身多器官功能受損，同時燒傷患者的機體免疫功能紊亂，容易出現(xiàn)創(chuàng)面侵襲性感染，腸黏膜屏障功能受損又引起細菌移位，進而誘發(fā)膿毒癥，當機體出現(xiàn)膿毒癥時，會導致大量的細胞因子以及炎性介質(zhì)被釋放，機體出現(xiàn)自身免疫性損傷，加重全身炎癥反應綜合征（SIRS），膿毒癥是重癥患者死亡的主要原因的病死率高達占30%～70%，近年來G+菌數(shù)量和真菌引起的膿毒癥也呈上升趨勢[5]，目前大多數(shù)的研究認為[6]，SIRS屬于性癥休克等發(fā)展到多臟器功能衰竭綜合征的一個必經(jīng)階段，其在這個過程中機體所釋放出的大量炎癥因子起到重要的作用，而其中miRNA對于炎性因子的釋放起到重要的調(diào)控作用，近些年來16SrRNA也成為了人們研究的熱點。主要對人膿毒癥相關miRNAs參與免疫炎癥反應過程，對膿毒癥的發(fā)病機制、診斷、治療及預后評估給以提示[7]。

16SrRNA對于膿毒癥相關的免疫炎癥反應的調(diào)控可以通過其轉(zhuǎn)錄水平對炎性因子和信號轉(zhuǎn)導通路造成影響，例如抗原呈遞TLR信號等，從而引起免疫失衡。作為一類重要的抗炎因子，IL-10以及腫瘤壞死因子-ɑ(TNF-ɑ)的表達水平與膿毒血癥患者死亡有一定的危險因素，IL-10水平可以對膿毒癥患者的病情嚴重程度以及機體的免疫作出一定的反應，早期膿毒癥患者體內(nèi)16SrRNA升高是因細菌在免疫反應中被吞噬，是對感染有益[8]，TNF-α/IL-10比值較高，雖然能夠介導免疫功能，但其效能較低，但反復的刺激導致機體產(chǎn)生大量的炎性介質(zhì)，進體內(nèi)促炎細胞因子抗體和效應性T細胞形成，但是過量的表達又將引起機體釋放過多的促炎因子，使得機體免疫細胞被過度活化，Treg在胸腺成熟后進入外周淋巴組織內(nèi)可以增殖，起到不同免疫調(diào)節(jié)機制，在臨床和實驗膿毒血癥研究中發(fā)現(xiàn)Treg的含量是增加[9]。16SrRNA能夠?qū)reg細胞起到作用，參與免疫抑制。伴隨著疾病不斷進展，16SrRNA對Treg的增殖能力調(diào)節(jié)作用也逐漸增強，抗炎反應則相反表現(xiàn)為失控性增強，抗炎反應占據(jù)主導，機體出現(xiàn)免疫性麻痹，有可能進展位休克，危及生命。

通過該次研究結(jié)果可以看出，膿毒癥患者外周血Treg 表達水平（154.15±6.38）pg/mL，明顯高于正常對照組（45.29±4.99）pg/mL（P<0.05），組間比較差異有統(tǒng)計學差異，說明膿毒癥發(fā)生后機體出現(xiàn)了強烈的炎性反應，Treg細胞的減少和活性的降低，使IL-10和TNF-ɑ細胞的反應活性上調(diào)，引起自身免疫性反應，但促炎反應過強則相反會導致其破壞能力加，而Treg和IL-10的代償性升高可以暫時對抗炎癥反應，保護機體，該研究中死亡組的16SrRNA為 （0.96±0.18）×109/L，其表達水平明顯高于存活組（0.43±0.06）×109/L（P<0.05），其說明16SrRNA的表達水平與患者預后有一定聯(lián)系，水平越高預后則越差。同時死亡組Treg及IL-10 表達分別為 （3.45±0.55）%，（65.28±13.88）pg/mL，高于存活組（2.89±1.05）%，（51.88±5.75）pg/mL，隨病情加重逐漸升高（P<0.05），說明16SrRNA與Treg的過度表達都將會對膿毒癥的發(fā)生發(fā)展造成影響。

采用國際通用SOFA(Sequential Organ Failure Assessment)評分系統(tǒng)，評分是一個動態(tài)觀察疾病的進展的過程，在評價單個器官功能時其分數(shù)越高，膿毒癥病情越重，預后越差，SOFA評分有助于對患者的全身多器官功能進行描述，該研究過程中發(fā)現(xiàn)，患者SOFA評分與外周血16SrRNA表達水平呈負相關關系 （P<0.05），死亡組膿毒癥患者外周血16SrRNA表達水平明顯高于存活組外周血表達水平，與黃立鋒等[10]研究表明膿毒血癥存活組SOFA評分（7.22±0.23）分，明顯低于研究表明膿毒血癥死亡組（11.43±0.57）分與該文研究結(jié)果一致，具有可比性，說明SOFA評分與與外周血16SrRNA表達水平對于預后評估有著重要的價值。同時與疾病嚴重程度有著顯著相關性，與TNF-和IL-10呈負相關，但與WBC無明顯相關（P>0.05）。

因此，16SrRNA的表達能夠反應出機體的炎癥狀態(tài)，16SrRNA表達可用于膿毒癥,診斷、同時對于病情的評估及預后做出前瞻性的判斷，而且其不受應用抗生素后WBC下降，出現(xiàn)假性的感染被控制，而干擾對疾病的進一步診斷治療。

綜上所述，16SrRNA的表達水平測定不僅能夠反映出機體的炎癥水平，同時在一定程度上也有助于評價疾病的預后及其嚴重度，但是目前對于miRNA在膿毒癥方面的研究尚少，對于其具體的調(diào)控機制還需要進一步大樣量的研究，從而幫助我們深入了解16SrRNA的免疫調(diào)控作，但是我們相信在不久的將來miRNA可能成為診斷和治療膿毒癥的新靶點。

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