膀胱癌組織前梯度蛋白2表達變化及其臨床意義

李峰，馮宇鵬，連學雄，吳文正，肖成林，趙仕佳

(廣州醫科大學附屬第二醫院，廣州 511447)

膀胱癌早期癥狀缺乏特異性，多數患者在確診時已接近中晚期，從而延誤了治療最佳時間[1,2]。手術切除是目前膀胱癌首選的治療手段，但50%～80%患者術后會發生轉移[3]。隨著生物醫學技術的快速發展，分子腫瘤標志物用于臨床早期輔助診斷惡性腫瘤成為研究熱點。前梯度蛋白2(AGR2)是非洲爪蟾蛋白XAG2的人型同系物，廣泛分布于人體組織。研究顯示，AGR2在卵巢癌、結直腸癌等惡性腫瘤組織中高表達，并參與上述惡性腫瘤的發生、發展過程[4,5]。目前，AGR2與膀胱癌相關性的研究較少。本研究分析膀胱癌組織AGR2表達變化及其與患者臨床病理參數及預后的關系，探討AGR2在膀胱癌發生、發展中的作用。

1 臨床資料

1.1 基本資料 選擇2014年1月～2015年6月廣州醫科大學附屬第二醫院收治的膀胱癌患者76例，男50例、女26例，年齡53～79(62.7±5.5)歲；單發腫瘤36例，多發腫瘤40例；腫瘤直徑1～5(2.2±0.7)cm；根據國際抗癌協會(UICC)TNM分期標準[6]：Ⅱ期41例，Ⅲ～Ⅳ期35例；組織分化程度：低分化33例，中高分化43例；有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移49例。納入標準：①原發性腫瘤，且術后病理組織活檢證實為膀胱癌；②術前未行放、化療及免疫治療；③有完整的臨床病理資料。排除標準：①妊娠期以及哺乳期的婦女；②心臟功能不全；③肝、腎障礙；④合并其他急慢性炎癥性疾病及自身免疫性疾病；⑤合并其他惡性腫瘤；⑥合并其他可能影響本研究結果的疾病。本研究獲廣州醫科大學附屬第二醫院醫學倫理委員會批準，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 膀胱癌組織AGR2表達及其與患者臨床病理參數和預后的關系 本研究統計學處理采用SPSS22.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法，中位生存時間比較采用Log-Rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

1.2.1 膀胱癌組織AGR2表達 取手術切除的膀胱癌組織及其癌旁正常組織(均經病理檢查證實)，采用免疫組化SABC法檢測AGR2表達。以AGR2陽性乳腺癌組織標本為陽性對照，磷酸緩沖液代替一抗為陰性對照。細胞質中出現黃色或者棕黃色顆粒為AGR2陽性細胞。從陽性細胞數量及著色強度兩個方面綜合評定結果[7]。陽性細胞數量：無陽性細胞計0分，有陽性細胞但比例<10%計1分，陽性細胞數量10%～<50%計2分，陽性細胞數量50%～80%計3分，陽性細胞數量>80%計4分；染色強度：無染色計0分，淺黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分。 兩項計分評分相乘結果0～3分為AGR2表達陰性，≥4分為AGR2表達陽性。結果顯示，膀胱癌組織AGR2陽性表達者34例，陰性表達者42例。膀胱癌組織及其癌旁正常組織AGR2陽性表達率分別為44.74%(34/76)、13.15%(10/76)，二者比較P<0.05。

1.2.2 膀胱癌組織AGR2表達與患者臨床病理參數的關系 腫瘤直徑≥2 cm、TNM分期Ⅲ和Ⅳ期、組織分化程低度、有淋巴結轉移者的膀胱癌組織AGR2陽性表達率分別高于腫瘤直徑<2 cm、TNM分期Ⅱ期、組織分化程度中高分化、無淋巴結轉移者(P均<0.05)。不同性別、年齡、腫瘤數量的膀胱癌患者腫瘤組織AGR2陽性表達率比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

1.2.3 膀胱癌組織AGR2表達與患者術后復發的關系 膀胱癌患者AGR2表達者術后1、2、3年分別有5、15、19例復發，術后1、2、3年復發率分別為14.71%、44.12%、55.88%；AGR2陰性表達者術后1、2、3年分別有3、7、11例復發，術后1、2、3年復發率分別為7.14%、19.05%、26.19%。AGR2陽性者術后2、3年復發率高于AGR2陰性表達者，P均<0.05；AGR2陽性表達和陰性表達者術后1年復發率比較，P>0.05。

1.2.4 膀胱癌組織AGR2表達與患者術后中位生存時間的關系 AGR2陽性與陰性表達者中位生存時間分別為30.00個月(95%CI為27.78～32.22個月)、34.00個月(95%CI為32.06～35.94個月)，二者比較P<0.05。

表1 膀胱癌組織AGR2表達與患者臨床病理參數的關系

2 討論

AGR2是位于人第7號染色體上片段長度為763 bp的基因編碼蛋白質二硫鍵異構酶家族成員，與外胚層發育、早期階段前后位的分化等密切相關[8]。研究證實，AGR2可抑制p53磷酸化及其活性，使其失去調控細胞周期的能力，最終導致細胞癌變[9]；AGR2在肺癌、乳腺癌、前列腺癌等腫瘤組織中表達上調[10～12]；特異性敲除肺癌細胞中AGR2基因可減少肺癌細胞轉移[13]；研究表明，乳腺癌組織中AGR2水平明顯升高，并與乳腺癌臨床病理特征有關，是預測患者預后的重要指標[4]；鼻咽癌病灶組織細胞中AGR2表達上調，抑制AGR2表達可減弱癌細胞的侵襲能力以及遷移能力[14]。本研究結果顯示，膀胱癌組織AGR2陽性表達率明顯高于正常膀胱組織，提示AGR2可能參與膀胱癌的發病過程。研究顯示，CD10在膀胱癌患者中表達上調參與了病情的發生、發展，CD10與AGR2密切相關，AGR2異常表達可能通過影響CD10表達而使細胞異常增殖，細胞無法正常凋亡而發生惡性改變[15]。Zhang等[16]研究顯示，胃癌TNM分期越晚、腫瘤越大、侵襲深度越深，則AGR2陽性表達率越高。劉麗娜等[7]報道，直腸癌組織中AGR2陽性表達與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移等密切相關。上述研究結果提示，AGR2與惡性腫瘤發生、發展過程密切相關，是評價病情進展的重要指標。本研究結果顯示，腫瘤直徑≥2 cm、TNM分期Ⅲ和Ⅳ期、組織分化程度低、有淋巴結轉移的膀胱癌組織中AGR2陽性表達率相對較高，提示AGR2與膀胱癌臨床病理特征有關，進一步提示AGR2可能參與了膀胱癌的發生、發展過程。本研究結果顯示，AGR2陽性膀胱癌患者術后2、3年復發率高于AGR2陰性患者，而AGR2陽性、陰性膀胱癌患者術后1年復發率無明顯統計學差異；生存分析顯示，AGR2陽性患者中位生存時間短于AGR2陰性者。提示AGR2與膀胱癌患者預后密切相關，AGR2陽性表達率越高，患者預后越差、復發率越高、生存時間越短。早期檢測膀胱癌組織中AGR2表達有助于判斷患者預后。

綜上所述，AGR2高表達可促進膀胱癌的發生、發展。檢測膀胱癌組織AGR2表達有助于判斷患者病情及預后。

參考文獻：

[1] Flaig TW,Kamat AM,Hansel D,et al. Proceedings of the 3rd annual albert institute for bladder cancer research symposium[J].Bladder Cancer,2017,3(3):211-223.

[2] Chen W,Luo K,Ke Z,et al. TBK1 promote bladder cancer cell proliferation and migration via akt signaling[J]. J Cancer,2017,8(10):1892-1899.

[3] 李嘉,陳國俊.表淺性膀胱癌術后膀胱灌注卡介苗隨機對照試驗的Meta分析[J].中國腫瘤生物治療雜志,2011,18(1):70-74.

[4] Salmans ML,Zhao F,Andersen B. The estrogen-regulated anterior gradient 2 (AGR2) protein in breast cancer: a potential drug target and biomarker[J]. Breast Cancer Res,2013,15(2):204.

[5] Valladares-Ayerbes M,Blanco-Calvo M,Reboredo M,et al. Evaluation of the adenocarcinoma-associated gene AGR2 and the intestinal stem cell marker LGR5 as biomarkers in colorectal cancer[J]. Int J Mol Sci,2012,13(4):4367-4387.

[6] Fiaux-Camous D,Chevret S,Oker N,et al. Prognostic value of the seventh AJCC/UICC TNM classification of intestinal-type ethmoid adenocarcinoma: systematic review and risk prediction model[J]. Head Neck,2017,39(4):668-678.

[7] 劉麗娜,殷云勤,張兆美,等.AGR2、Lgr5在結直腸癌中的表達及其臨床意義[J].中國現代醫生,2014,52(14):8-11,15.

[8] Ma SR,Wang WM,Huang CF,et al. Anterior nterior K "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25871396" testinal-type ethmoid adenocarcinoma: systematic review and risk prediction esenchymal transition[J]. Oncotarget,2015,6(11):8807-8821.

[9] Kim SJ,Kim DH,Kang D,et al. Expression of anterior gradient 2 is decreased with the progression of human biliary tract cancer[J]. Tohoku J Exp Med,2014,234(1):83-88.

[10] 秦芳,王洪武,周云芝,等.晚期非小細胞肺癌化療前后的血清AGR2水平變化及臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志,2016,21(11):1015-1018.

[11] Ondrouskova E,Sommerova L,Nenutil R,et al. AGR2 associates with HER2 expression predicting poor outcome in subset of estrogen receptor negative breast cancer patients[J]. Exp Mol Pathol,2017,102(2):280-283.

[12] Kani K,Malihi PD,Jiang Y,et al. Anterior gradient 2(AGR2): blood-based biomarker elevated in metastatic prostate cancerassociated with the neuroendocrine phenotype[J]. Prostate,2013,73(3):306-315.

[13] Hu R,Huffman KE,Chu M,et al. Quantitative secretomic analysis identifies extracellular protein factors that modulate the metastatic phenotype of non-small cell lung cancer[J]. J Proteome Res,2016,15(2):477-486.

[14] 李躍進,王巍巍,盧金平,等.前梯度蛋白2干擾質粒的構建及其對鼻咽癌細胞生物學功能的影響[J].中國病理生理雜志,2016,32(9):1545-1550.

[15] Atique M,Abbasi MS,Jamal S,et al. CD10 expression intensity in various grades and stages of urothelial carcinoma of urinary bladder[J]. J Coll Physicians Surg Pak,2014,24(5):351-355.

[16] Zhang J,Jin Y,Xu S,et al. AGR2 is associated with gastric cancer progression and poor survival[J]. Oncol Lett,2016,11(3):2075-2083.