宮頸炎患者HPV感染與外周血T淋巴細胞亞群的相關性分析

陳羽，侯海靜

高危型人類乳頭狀病毒（HPV）持續感染是誘發宮頸癌的重要原因之一，宮頸癌患者中有99.8%的病例為 HPV陽性。臨床調查結果顯示，HPV的感染和清除與年齡密切相關，育齡期婦女多為暫時性感染，大部分人群無需治療，可自然消退；而圍絕經期婦女多為持續性感染，引發宮頸癌的概率大大增加[1-2]。進一步研究發現，隨著年齡的增加，婦女雌激素水平降低，內分泌功能和免疫功能呈衰退趨勢，對HPV的抵御能力和清除能力變弱可能是導致HPV持續感染的重要原因[3]。也有研究指出，宮頸炎患者生殖道微生態環境紊亂、免疫系統功能失調也增加了HPV的持續感染風險[4]。本研究旨在分析宮頸炎患者HPV感染及高危型HPV E6、E7mRNA表達與外周血T淋巴細胞亞群的關系，從而進一步觀察HPV感染與女性的細胞免疫功能是否存在相關性。現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集2014年12月至2016年12月收治的897例宮頸炎患者；年齡 27～ 61歲，平均（43.5±6.8）歲。納入標準：月經規律自愿簽署知情同意書。排除標準：妊娠期與哺乳期、長期抗生素與激素用藥史、腫瘤或癌癥、傳染性疾病、肝腎功能不全、合并有兩種及以上的高危型HPV感染者。

1.2研究方法

1.2.1HPV分型檢測 于月經干凈后3～5 d取樣，取樣前3 d禁止性生活。采用專用宮腔采樣刷取材，收集宮頸口及宮頸上皮脫落細胞，置于專用取樣瓶中（含細胞保存液）。采用21種HPV分型檢測試劑盒測定患者HPV感染情況，嚴格按照試劑盒說明書的步驟進行操作，測定原理為PCR反向點雜交技術。21種HPV分別為高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68）和低危型（6、11、42、43、44、81）。

1.2.2HPVE6/E7mRNA檢測 高危型HPV感染者測定E6/E7mRNA，取樣與樣本保存方法與HPV分型檢測取材方法一致，充分搖勻后3000 r/min離心10 m in，獲得上清液。采用HPVE6/E7mRNA檢測試劑盒測定上清液E6/E7mRNA，檢測原理為熒光定量雜交捕獲法。

1.2.3T淋巴細胞亞群檢測 患者均于治療前取空腹肘靜脈血2 m l，采用人T淋巴細胞亞群測定試劑盒（XY-1002，上海信裕生物技術有限公司）測定CD3+、CD4+、CD8+細胞的數量，取血后不凍存，直接測定。將所得血液直接與抗體混勻，室溫避光孵育20 m in，加入紅細胞裂解液，室溫避光孵育10 m in，2000 r/m in離心10 m in，棄上清。所得細胞以PBS洗液清洗并重懸，即可上機檢測。

2　結果

2.1HPV感染的整體檢測結果 本研究共檢出高危型 HPV感染 222例（24.7%）、低危型 HPV感染 284例（31.7%）及非HPV感染391例（43.6%）。207例高危型 HPV分型情況如表1所示，高危型HPV的E6/E7mRNA陽性率為25.2%（56例）。

2.2HPV感染與T淋巴細胞亞群的關系 高危型HPV感染組的CD4+細胞計數和CD4+/CD8+低于低危型HPV感染組和非HPV感染組，CD8+細胞計數高于低危型HPV感染組和非HPV感染組；低危型HPV感染組的CD4+細胞計數和CD4+/CD8+低于非HPV感染組，CD8+細胞計數低于非HPV感染組，組間差異均有統計學意義（均＜0.05）。見表2。

2.3HPV E6/E7mRNA與T淋巴細胞亞群的關系 高危型HPV感染者根據HPV E6/E7mRNA測定結果分為 E6/E7mRNA陽性和 E6/E7mRNA陰性兩組，E6/E7mRNA陽性組CD4+細胞計數和 CD4+/CD8+低于 E6/E7mRNA 陰性組，CD8+細胞計數高于E6/E7mRNA陰性組，差異均有統計學意義（均＜0.05）。見表 3。

3　討論

因宮頸炎患者陰道清潔度差、生殖道微生態失衡和免疫系統功能紊亂[5-6]，其HPV感染風險高于健康人群。謝建萍等[7]發現高危型HPV感染患者陰道微生態有異于其他宮頸炎患者，其衣原體、解脲脲原體和細菌感染率均呈現出偏高趨勢。賀冬生等[8]對生殖道感染患者的陰道分泌物病原菌和陰道清潔度的分析結果顯示兩者與HPV感染均無明顯相關性，并指出陰道菌群可能僅通過影響免疫系統功能而間接影響HPV感染率，并非其直接影響因素。

在T淋巴細胞亞群中，CD4+T細胞也稱輔助性T細胞，是抗菌抗病毒抗腫瘤的主力軍；CD8+細胞也稱抑制性T細胞，能夠抑制CD4+細胞的功能，從而防止免疫系統功能亢進引發的自我損傷。臨床上一般以CD4+/CD8+衡量細胞免疫功能的整體免疫活性，CD4+/CD8+升高代表細胞免疫功能的升高，而CD4+/CD8+降低代表細胞免疫功能受到抑制[9-10]。本研究結果顯示，高危型HPV感染者患者的細胞免疫功能明顯低于低危型 HPV感染者，低危型HPV感染者的細胞免疫功能明顯低于非HPV感染者；這證實HPV感染與T淋巴細胞亞群之間存在密切關系。但究竟是HPV感染降低了細胞免疫功能還是細胞免疫功能偏低增加了HPV感染風險尚不明確。既往研究指出，T淋巴細胞在抗感染過程中起主要作用，健康人群T淋巴細胞能夠正常發揮抗原呈遞和免疫監視功能，當細胞免疫功能下降時抗病毒能力減弱，感染風險增加[11]。而細菌、病毒等微生物的長期定植也可以通過自身機制增加CD8+細胞的分泌，抑制機體的抗感染功能[12-13]。因此本研究認為HPV感染與T淋巴細胞亞群之間的關系相互影響，互為因果；但具體是否如此還需要更加嚴謹的研究加以驗證。

表1　高危型HPV的分型 例（%）

表2　HPV感染與T淋巴細胞亞群的關系

表3　HPV E6/E7mRNA與T淋巴細胞亞群的關系

HPV E6/E7已被證實為病毒癌基因，可誘導生物體重要的抑癌基因pRb和p53發生降解，從而增加宮頸癌的發病風險[14-15]。長期感染者高危型HPV的E6/E7基因可能與宿主DNA發生整合，整合后宮腔局部E6/E7mRNA過表達和高危型HPV感染同時存在，加速了腫瘤細胞的形成與惡性增殖。越來越多的研究指出，E6/E7mRNA可較HPV-DNA更加準確地反映體內病毒復制情況，對宮頸癌的診斷和病情預測價值高于 HPVDNA[16]。本研究發現E6/E7 mRNA陽性的高危型HPV感染患者細胞免疫功能進一步降低，證實HPV感染類型和高危型HPV的E6/E7mRNA表達均與T淋巴細胞亞群功能有關，應引起重視。

參考文獻：