芻議姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P—gp ATP酶活性的關系研究

王煉詞

【摘要】姜黃素是目前受世界各國科學家非常關注的一個藥物，也是世界各國花大量人力財力來開發和研究的一個藥物。中國人從古代就開始使用中藥姜黃來治療各種疾病。本文主要從三個方面進行分析了姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關系研究。

【關鍵詞】姜黃素 肝癌多藥耐藥性 P-gp ATP酶活性 研究

一、姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關系研究的重要意義

惡性腫瘤是危害人類健康最嚴重的一類疾病，尋找高效低毒的抗腫瘤藥物對提高化學治療水平具有重要意義。

姜黃素是從姜黃中提取的一種植物多酚，以往研究表明姜黃素具有多種藥理活性，如抗炎、抗病毒、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等。據臨床實踐發現，姜黃素是有效的抗突變劑，也是抗促癌劑。以前的研究在姜黃素抗腫瘤轉移方面側重于對血道轉移的腫瘤細胞的研究，但尚未見對小鼠腹水型肝癌細胞淋巴道轉移影響的報道。本篇文章主要從姜黃素逆轉肝癌多藥耐藥性與P-gpATP酶活性的關系研究進行了探討分析，同時對姜黃素抗腫瘤作用機理進行初步的探討。因此，此處研究既有理論意義，又有潛在的應用價值，同時也為開發價格低廉、高效低毒的天然抗腫瘤藥物提供了可靠的理論依據。

二、姜黃素的主要功效以及藥用價值

（1）姜黃素與癌癥之間的關系。姜黃素可以有效治療大多數癌癥及其它炎性誘發的疾病。經調查研究發現，姜黃素能阻斷結腸癌蛋白質一一皮層蛋白。皮層蛋白對于癌細胞運動是必需的蛋白質，它經常在癌癥中過度表達，從而促使癌細胞轉移到身體其他器官。姜黃素是姜黃的活性成分，已被科學研究用于許多類型癌癥的治療。

姜黃素已被證明具有癌化學預防作用，能扭轉，抑制或阻止癌癥發展的能力。新的研究發現了姜黃素阻止結腸癌細胞轉移的機制之一。姜黃素與沙利度胺合璧殺死癌細胞。

（2）姜黃素與神經系統疾病的關系。姜黃素類似物可有效抵御阿爾茲海默氏癥，能夠防治帕金森氏病，姜黃素或可開發成治療老年癡呆癥藥物。含姜黃素藥物有助中風病患腦細胞再生，姜黃素有助延長壽命，利用姜黃發現延長壽命及控制老化的現象。

（3）姜黃素在臨床實踐中的藥用價值。姜黃素也有重要的經濟價值和廣泛的藥理作用：第一，姜黃素針對降血脂、抗氧化、抗發炎、抗動脈粥樣硬化等具有顯著的效果。第二，2004年時發現姜黃素能抑制HIV-1整合酶活性用于艾滋病的臨床試驗。第三，抗癌是姜黃素的主要藥理活性之一，其抑制腫瘤的作用已在許多動物實驗中得到反復證實，其具體抗癌機制已成為近期研究熱點。

三、姜黃素聯合FAP對于P-gp ATP酶活性的影響

研究姜黃素聯合FAP對于P-gp ATP酶活性的影響，進一步探討MJ聯合FAP對肝癌多藥耐藥的逆轉作用及其機制。該研究對進一步揭示肝癌發病的分子機制、設計合理的治療藥物及判斷預后，提高我國肝癌的治療水平具有重要意義。

（1）細胞株與動物。H22肝癌細胞株由本實驗室保存，H22/FAP肝癌多藥耐藥細胞株由本實驗室模擬臨床FAP方案，采用藥物ADR、CDDP、5-FU濃度梯度遞增誘導法誘導而成。

（2） MTT法檢測姜黃素、VER對H22/FAP的最大無毒劑量。抽取小鼠H22/FAP腹水瘤細胞，PBS洗2次，采用Ficoll -H ypaqie不連續密度梯度法，圓2000r/min，20min水平離心后收集Ficoll- Hypaqie液和細胞懸液間的腫瘤細胞。PBS洗1次，0.4%臺盼藍染色，計活細胞率（藍染率

（3）耐藥倍數的測定和計算。用MTT法測定肝癌H22/FAP細胞對ADR、CDDP、5-FU的耐藥倍數。分別抽取H22肝癌敏感小鼠和H22/FAP肝癌多藥耐藥小鼠的腹水瘤細胞，按方法2處理制得H22和H22/FAP腫瘤細胞并培養細胞，然后依實驗要求加入不同濃度測試藥物ADR、CDDP、5-FU，另設不加藥的空白對照組，繼續培養48h后，加入MTT和DMSO，490nm和630nm雙波長下測定吸光度（ OD），并計算耐藥倍數。細胞生長抑制率%=（對照組吸光度平均值一加藥組吸光度平均值）/對照組吸光度平均值×100%；求出IC50；RI=A/B，A為化療藥物對H22/FAP瘤細胞的IC50值；B為化療藥物對H22瘤細胞的IC50值。

（4）質膜的制備。BALB/c小鼠腹腔接種H22/FAP細胞（每只0.2ml，1×108/L），隨機分成9組，每組10只：①NS組；②FAP+姜黃素（20mg/Kg）組；③FAP+姜黃素（10mg/Kg）組；④FAP+姜黃素（5mg/Kg）組；⑤FAP+姜黃素（2.5mg/Kg）組；⑥FAP+VER（ 3.Omg/Kg）組；（0FAP+ VER（1.5mg/Kg）組；⑧FAP+VER（o.75mg/Kg）組；⑨FAP+VER（0.375mg/Kg）組；尾靜脈注射給藥，FAP給藥方案同“1.4”，7d后抽取腹水瘤，按照MTT法中的步驟制取腫瘤細胞，加入6ml裂解液，在4℃下孵育20min后，4000g下離心10min，收集上清，100000g下離心1h，取沉淀，加入含0.25mol/l蔗糖的裂解液，備用。

（5）P-gp ATP酶活性的測定。每只實驗小鼠取20μg質膜，加入以下試劑（mmol/l）：Tris-HCL 50μl（ pH6.8），二硫蘇糖醇2μl，Mgcl25μl，毒毛花苷圓2μl（清除Na+，K+-ATP酶活性），依他酸2μl（清除Ca2+- ATP酶活性），疊氮化鈉5（清除線粒體ATP酶活性），然后加入Mg-ATP反應開始。加入Iml定磷試劑，37℃下反應30min，以分光光度計測定720nm下吸光度（OD）值。

四、結論

發現不同濃度姜黃素對p-gp ATP酶的活性有影響！到目前為止，體外實驗研究證明姜黃素能逆轉人類癌癥耐藥細胞多藥耐藥性，但對于逆轉肝癌多藥耐藥的體內研究，尤其通過影響P-gpATP酶活性的體內研究比較少見。據臨床實踐觀察發現，肝癌患者更易對多柔比星、順鉑、5-氟尿嘧啶產生耐藥，通過建立BLAB/c小鼠肝癌多藥耐藥的模型，研究姜黃素聯合FAP對P-gp ATP酶活性的影響，深入探討MJ聯合FAP對肝癌多藥耐藥的逆轉作用及其機制。

參考文獻：

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