PDCD5通過Wnt/β-catenin通路抑制腎細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移及其機(jī)制研究

劉宏峰，張彩虹，張秀芳，趙培慶

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PDCD5通過Wnt/β-catenin通路抑制腎細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移及其機(jī)制研究

劉宏峰，張彩虹，張秀芳，趙培慶

255036 山東省淄博市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科

探討腎細(xì)胞癌（RCC）患者 PDCD5 的表達(dá)水平及其參與調(diào)控 RCC 侵襲與轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制。

利用免疫組化檢測 RCC 標(biāo)本與癌旁組織中 PDCD5 的蛋白表達(dá)水平，同時(shí)分析 PDCD5 與疾病分期、預(yù)后的相關(guān)性；利用 transwell 及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測 PDCD5 對腎癌細(xì)胞系 A498 侵襲與轉(zhuǎn)移的影響；利用 Western blot 檢測 A498 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 PDCD5 后 MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin 及 Wnt/β-catenin 通路的變化。

①與癌旁組織相比，RCC 標(biāo)本中 PDCD5 明顯下調(diào)（< 0.001），且與疾病分期及預(yù)后正相關(guān)；②PDCD5 明顯抑制了腎癌細(xì)胞系 A498 的轉(zhuǎn)移與侵襲能力（< 0.01）；③PDCD5 通過抑制 A498 細(xì)胞系中 MMP2、MMP9 及 N-cadherin 的表達(dá)水平，增強(qiáng) E-cadherin 的表達(dá)水平調(diào)控 EMT 轉(zhuǎn)化，同時(shí) Wnt/β-catenin 通路關(guān)鍵蛋白下調(diào)。

PDCD5 通過調(diào)控 Wnt/β-catenin 通路影響腎細(xì)胞癌 EMT 轉(zhuǎn)化，負(fù)性調(diào)控了 RCC 病人的侵襲與轉(zhuǎn)移進(jìn)程。

癌，腎細(xì)胞；腫瘤侵潤； 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化； 程序化細(xì)胞死亡因子 5； Wnt/β-catenin 通路

程序化細(xì)胞死亡因子 5（programmed cell death 5，PDCD5/TFAR19）是一種與凋亡密切相關(guān)的基因，于 1999 年從人類白血病細(xì)胞株 TF-1 細(xì)胞中克隆出來[1]。PDCD5 蛋白表達(dá)在多種細(xì)胞系中，其在乳腺癌[2]、胃癌[3]及肝細(xì)胞癌[4]等腫瘤中表達(dá)下調(diào)，表明其在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在腎透明細(xì)胞癌中，PDCD5 可通過維持 p53 的穩(wěn)定而起到抑癌的作用[5]。更為重要的是國內(nèi)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，PDCD5 較正常對照在腎細(xì)胞癌中表達(dá)明顯下調(diào)；同時(shí)其陽性表達(dá)率與腎細(xì)胞癌的臨床分期及 TNM 分期呈明顯正相關(guān)性，表明 PDCD5 可能在腎細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6]。但到目前為止還沒有文獻(xiàn)報(bào)道PDCD5 在腎癌侵襲與轉(zhuǎn)移中的確切機(jī)制。

腎癌中最常見的病理類型為腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC），25% ~ 30% 的腎細(xì)胞癌患者診斷時(shí)已經(jīng)處于中晚期[7]。RCC 是一種異質(zhì)性疾病，具有不同的臨床、分子和病理特征。雖然早期手術(shù)治療可以治愈，但已有轉(zhuǎn)移的患者往往療效極差。高劑量白細(xì)胞介素 2 和干擾素-α 是早期的主要治療方案，但治療反應(yīng)率僅為 10% ~ 15%，且中位生存期僅為 10 ~ 12 個(gè)月[8]。近年來機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)腎癌最常見的遺傳病因是由 VHL 基因突變引起，約 50% 的 VHL 綜合征患者將發(fā)展為腎癌，這種基因突變直接導(dǎo)致了腎癌中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和血小板衍生生長因子（PDGF）的高度表達(dá)，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞不斷增生。阿昔替尼等靶向藥物可有效抑制 VEGF 和 PDGF 的信號傳導(dǎo)通路，抑制腎癌的進(jìn)展，但在臨床應(yīng)用中也存在耐藥問題[9]。因此，闡明 RCC 轉(zhuǎn)移與侵襲新機(jī)制及新分子，將對 RCC 的轉(zhuǎn)移與治療產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。基于以上理論基礎(chǔ)，本研究旨在探討 PDCD5 如何影響 RCC 侵襲轉(zhuǎn)移及其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 Transwell 試劑盒購自Corning 公司；WB 抗體 PDCD5、MMP2、MMP9、Wnt1 及 β-catenin 購自美國 Abcam 公司；E-cadherin、N-cadherin 購自 CST 公司；MEM-EBSS 培養(yǎng)基購自澳大利亞 Gibco 公司；多功能酶標(biāo)儀為美國 Thermofisher 公司產(chǎn)品；PDCD5 慢病毒載體由上海吉?jiǎng)P基因構(gòu)建；人腎癌細(xì)胞系 A498 購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所。

1.1.2 病例來源 皆來自淄博市中心醫(yī)院泌尿外科且經(jīng)病理確證為腎細(xì)胞癌患者，其中 I、II 期患者 35 例，III、IV 期 20 例。分析不同分期患者樣本中 PDCD5 的表達(dá)水平，并根據(jù)其表達(dá)水平分析生存期并繪制 Kaplan-Meier 曲線。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) A498 于含10% 胎牛血清的 MEM-EBSS 培養(yǎng)基中，置于 37 ℃、5% CO2溫箱中培養(yǎng)。

1.2.2 免疫組化檢測 PDCD5 水平 60 ℃烤片 30 min，常規(guī)脫蠟水化；抗原修復(fù)以 1 mmol/L Tris-EDTA（pH 8.0）微波修復(fù)抗原，冷卻至室溫，三羥甲基氨基甲烷（Tris）鹽緩沖液沖洗，PBS 洗3 次，每次洗 5 min；然后用 3%H2O2-甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶，室溫 10 min，PBS 洗 3 次，每次洗 5 min；滴加一抗：PDCD5（1:200），4 ℃冰箱過夜；用 0.1% Tween-20 PBS 洗 3 次，每次洗5 min；滴加聚合物輔助劑，室溫孵育 15 min；用 0.1% Tween-20 PBS 洗3 次，每次洗 5 min；滴加辣根酶標(biāo)記抗山羊 IgG 多聚體，室溫孵育 15 min；0.1% Tween-20 PBS 洗 3 次，每次洗 5 min；DAB 顯色 5 ~ 10 min，蒸餾水洗終止顯色；蘇木素復(fù)染、水洗、分化后充分水洗返藍(lán)；常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片，置光學(xué)顯微鏡下觀察（× 100）。

1.2.3 Transwell 實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)前轉(zhuǎn)染含 PDCD5 慢病毒載體及空載體對照；實(shí)驗(yàn)采用8.0 μm 膜的小室，上室先用 50 mg/L Matrigel 基質(zhì)膠 1:8 的稀釋液包被、風(fēng)干，并加入無血清培養(yǎng)液，37 ℃，30 min；制備細(xì)胞懸液前細(xì)胞血清饑餓 24 h，然后消化細(xì)胞，用 PBS 洗 1 ~ 2 遍，用含 BSA 的無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞密度至合適范圍；取細(xì)胞懸液 200 μl 加入 transwell 小室中；下室加入 500 μl 含 10% FBS 的培養(yǎng)基，每組設(shè) 3 個(gè)平行復(fù)孔。24 h 后 0.1% 結(jié)晶紫染色，200 倍正置光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察、拍照并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染含 PDCD5 慢病毒載體及空載體對照后，常規(guī)種 6 孔板，每組 3 孔重復(fù)。待細(xì)胞融合度達(dá) 80% 后，用無菌槍頭盡量垂直于背面劃痕，用 PBS 洗細(xì)胞培養(yǎng)孔 3 次，去除漂浮細(xì)胞后，加入無血清培養(yǎng)基，放入 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h，拍照并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.5 蛋白印跡實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染含 PDCD5 慢病毒載體及空載體對照后，RIPA 蛋白裂解液提取兩組細(xì)胞總蛋白，酶標(biāo)儀進(jìn)行蛋白定量，最后分別與 PDCD5、MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Wnt1 及 β-catenin 抗體進(jìn)行孵育，以 β-actin 為內(nèi)參進(jìn)行比照分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 Graphpad Prism5.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)采用檢驗(yàn)進(jìn)行分析，單變量分析對數(shù)秩檢驗(yàn)分析腎癌患者生存率，以< 0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RCC 患者 PDCD5 表達(dá)量明顯下調(diào)且與生存期正相關(guān)

如圖 1A、B 所示，RCC 患者 PDCD5 表達(dá)量較癌旁對照明顯下調(diào)，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（< 0.001）；同時(shí)患者按 TNM 分期分為兩組，A 組為 I、II 期患者共計(jì) 35 例，B 組為 III、IV 期患者共計(jì) 20 例。分析結(jié)果如圖 1C 所示，A 組 PDCD5 表達(dá)量明顯高于 B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（< 0.01），該結(jié)果提示 PDCD5 可能參與了 RCC 的轉(zhuǎn)移與侵襲過程。為更進(jìn)一步探討 PDCD5 在 RCC 中的意義，收集了 35 例 RCC 患者 3 年總體生存率數(shù)據(jù)（其中 PDCD5 高表達(dá)組 15 例，低表達(dá)組 20 例），基于 Logrank 對數(shù)秩檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析，檢驗(yàn)兩組終點(diǎn)的差異有無顯著性，結(jié)果如圖 1D 所示，表明 PDCD5 表達(dá)水平與生存率存在正相關(guān)（< 0.05），該結(jié)果進(jìn)一步提示 PDCD5 可能參與 RCC 的轉(zhuǎn)移過程。

2.2 PDCD5 明顯抑制了腎癌細(xì)胞系 A498 的轉(zhuǎn)移與侵襲能力

轉(zhuǎn)染 PDCD5 慢病毒 48 h 后熒光顯微鏡觀測 GFP 表達(dá)量達(dá) 80% 以上，表明轉(zhuǎn)染目的蛋白成功，結(jié)果如圖 2A 所示。Transwell 實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá) PDCD5 組較空載體組其侵襲能力顯著下降（< 0.01），表明 PDCD5 對 RCC 細(xì)胞侵襲具有明顯抑制作用。同時(shí)，采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染 PDCD5 后 A498 細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力，結(jié)果如圖 2B 所示，發(fā)現(xiàn)其對細(xì)胞遷移也具有明顯抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（< 0.01）。

圖 1 RCC 患者PDCD5 表達(dá)明顯下調(diào)且與疾病分期、生存期正相關(guān)[A：腎細(xì)胞癌組織中 PDCD5 表達(dá)較癌旁組織明顯降低；B：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明腎細(xì)胞癌組織與癌旁組織中 PDCD5 表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）；C：I、II 期患者（35 例）較 III、IV 期患者（20 例）PDCD5 表達(dá)明顯上調(diào)（P < 0.01）；D：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明35 例 RCC 患者（PDCD5 高表達(dá)組 15 例，低表達(dá)組 20 例）3 年總體生存率與 PDCD5 表達(dá)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P < 0.05）]

Figure 1 The levels of PDCD5 in RCC were significantly down-regulated and positively correlated with disease stage and survival rate [A: The expression of PDCD5 in renal cell carcinoma tissues was significantly lower than that in paracancerous tissues; B: Statistical analysis showed that the expression of PDCD5 in renal cell carcinoma tissues was decreased compared to paracancerous tissues (< 0.001); C: The expression of PDCD5 was increased in patients withstage I and II compared to stage III and IV (< 0.01); D: The 3-year overall survival was significantly higher in patients with PDCD5 high expression than the PDCD5 low expression (< 0.05)]

2.3 PDCD5 明顯抑制 A498 細(xì)胞系中 MMP2、MMP9、N-cadherin、Wnt1 及 β-catenin 的表達(dá)水平，增強(qiáng) E-cadherin 的表達(dá)水平

結(jié)果如圖 3A 所示，過表達(dá) PDCD5 組較正常對照組，A498 細(xì)胞中 MMP2、MMP9 及N-cadherin表達(dá)量明顯下降，但 E-cadherin 表達(dá)量則上調(diào)。該結(jié)果提示 PDCD5 可通過降低 MMP2、MMP9、N-cadherin 表達(dá)及上調(diào) E-cadherin 表達(dá)，抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），從而使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與侵襲能力下降。同時(shí)，Wnt/β-catenin 通路中關(guān)鍵分子 Wnt1 及 β-catenin 表達(dá)下調(diào)，提示 PDCD5 通過下調(diào) Wnt/β-catenin 通路影響 EMT 轉(zhuǎn)化，進(jìn)而導(dǎo)致 RCC 轉(zhuǎn)移侵襲下降。

3 討論

腎細(xì)胞癌（RCC）約占所有腎癌的 85%，雖然 RCC 可以完全通過手術(shù)切除，但復(fù)發(fā)率較高。最近數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明美國近一年新發(fā)病例約 6.3 萬例，死亡約 1.4 萬人[10]，轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)是導(dǎo)致病人高死亡率的重要原因之一。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和乙酰肝素酶主要降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）和基底膜（BM），在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)中起關(guān)鍵性作用[11]，MMP家族是一類鋅依賴性內(nèi)肽酶，它們可以消化幾乎所有組織的 BM 和 ECM，如膠原蛋白、蛋白聚糖、層黏連蛋白及纖連蛋白等；上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在維持癌細(xì)胞干性（CSC）方面起決定性作用，也被認(rèn)為是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)中的重要事件[12]。因此針對 MMPs 及 EMT 轉(zhuǎn)化的靶向分子一般在腫瘤轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)中起抑制性生物學(xué)作用。

圖 2 PDCD5 抑制腎癌細(xì)胞系 A498 的轉(zhuǎn)移與侵襲能力[A：Transwell 結(jié)果提示腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 A498 轉(zhuǎn)染 PDCD5 后細(xì)胞遷移率明顯低于對照組（P < 0.01）；B：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 A498 轉(zhuǎn)染 PDCD5 后，劃痕寬度較對照組明顯增寬（P < 0.01）]

Figure 2 PDCD5 significantly inhibited the metastasis and invasion of renal cancer cell line A498 [A: Transwell results showed that the cell migration rate of A498 cells transfected with PDCD5 was significantly lower than that of the control group (< 0.01); B: Cell scratch assay showed that the scratch width of A498 cells transfected with PDCD5 was wider than that of the control group (< 0.01)]

圖 3 PDCD5 抑制A498 細(xì)胞系中MMP2、MMP9、N-cadherin、Wnt1 及β-catenin 的表達(dá)，增強(qiáng)E-cadherin 的表達(dá)

（A：蛋白印跡實(shí)驗(yàn)提示腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 A498 轉(zhuǎn)染 PDCD5 后MMP2、MMP9、N-cadherin 表達(dá)量明顯低于對照組，E-cadherin 表達(dá)量則高于對照；B：蛋白印跡實(shí)驗(yàn)提示腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 A498 轉(zhuǎn)染 PDCD5 后 Wnt1 及β-catenin 表達(dá)量明顯低于對照組）

Figure 3 PDCD5 inhibited the expression of MMP2, MMP9, N-cadherin, Wnt1, β-catenin and enhanced the expression of E-cadherin in A498 cells line (A: Western blot showed that the expression of MMP2, MMP9 and N-cadherin in A498 cells transfected with PDCD5 was significantly lower than that of the control group, while the expression of E-cadherin was higher than that of the control group; B: Western blot indicated that the Wnt1 and β-catenin expression in A498 cells transfected with PDCD5 was significantly lower than that of the control group)

國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn) PDCD5 在 RCC 中的表達(dá)與腎細(xì)胞癌的臨床分期及 TNM 分期呈正相關(guān)，提示 PDCD5 可能在 RCC 的浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6]。基于以上理論，我們首先檢測了 RCC 標(biāo)本中 PDCD5 表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織較癌旁對照組明顯下調(diào)；同時(shí)發(fā)現(xiàn) I、II 期患者 PDCD5 表達(dá)量明顯高于 III、IV 期患者，該結(jié)果更進(jìn)一步提示 PDCD5 可能參與了 RCC 的轉(zhuǎn)移與侵襲過程。為深入探討 PDCD5 在 RCC 中的意義，我們跟蹤收集了35 例 RCC 患者 3 年總體生存率數(shù)據(jù)，結(jié)果表明 PDCD5 表達(dá)與生存率也存在正相關(guān)性，腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響 RCC 患者生存的最重要因素之一[13]，該結(jié)果表明 PDCD5 參與了 RCC 的轉(zhuǎn)移過程。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá) PDCD5 可顯著降低 RCC 細(xì)胞系的侵襲轉(zhuǎn)移能力，表明 PDCD5 對 RCC 細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移具有明顯抑制作用。為進(jìn)一步在機(jī)制上闡述 PDCD5 影響 RCC 侵襲轉(zhuǎn)移能力，我們通過 Western blot 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染 PDCD5 組 A498 細(xì)胞中 MMP2、MMP9 及 N-cadherin 表達(dá)量明顯下調(diào)，而 E-cadherin 則上調(diào)。該結(jié)果提示 PDCD5 可通過降低 MMP2、MMP9、N-cadherin 表達(dá)及上調(diào) E-cadherin，抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與侵襲能力下降。在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中，腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，伴隨上皮標(biāo)志物 E-cadherin 下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)記物 N-cadherin 和波形蛋白上調(diào)[14]。本研究中 PDCD5 下調(diào) N-cadherin 及上調(diào) E-cadherin，表明 PDCD5 可以調(diào)控 RCC 細(xì)胞的 EMT 水平，但具體的調(diào)控機(jī)制尚待闡明。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）在癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮重要作用[15]，我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá) PDCD5 可以下調(diào) MMP-2 和MMP-9，后者是 Wnt/β-catenin 信號的下游因素[16]，同時(shí)蛋白印跡結(jié)果也證實(shí)轉(zhuǎn)染 PDCD5 后 Wnt1 及 β-catenin 下調(diào)，該結(jié)果也提示 PDCD5 可能抑制 β-catenin 信號通路，下調(diào) MMP-2 和 MMP-9，進(jìn)而影響 RCC 的轉(zhuǎn)移與侵襲過程。

通過檢測 RCC 病人腫瘤組織中PDCD5 的表達(dá)水平，不僅可以更進(jìn)一步闡釋PDCD5 參與 RCC 轉(zhuǎn)移與侵襲的機(jī)制，更可能為 RCC 轉(zhuǎn)移的臨床診斷指標(biāo)找到可能的新型標(biāo)志分子，在 RCC 的預(yù)后判斷中發(fā)揮重要作用。同時(shí)，通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)與初期的機(jī)制研究，我們初步探討了PDCD5 參與 RCC 轉(zhuǎn)移與侵襲的過程，為 RCC 的臨床靶向治療提供了理論與實(shí)踐可能。

[1] Wang W, Song XW, Zhao CH. Roles of programmed cell death protein 5 in inflammation and cancer (Review). Int J Oncol, 2016, 49(5):1801-1806.

[2] Chinnaiyan AM, Rubin MA. Gene-expression profiles in hereditary breast cancer. Adv Anat Pathol, 2002, 9(1):1-6.

[3] Yang YH, Zhao M, Li WM, et al. Expression of programmed cell death 5 gene involves in regulation of apoptosis in gastric tumor cells. Apoptosis, 2006, 11(6):993-1001.

[4] Fu DZ, Cheng Y, He H, et al. PDCD5 expression predicts a favorable outcome in patients with hepatocellular carcinoma. Int J Oncol, 2013, 43(3):821-830.

[5] Essers PB, Klasson TD, Pereboom TC, et al. The von hippel-lindau tumor suppressor regulates programmed cell death 5-mediated degradation of Mdm2. Oncogene, 2015, 34(6):771-779.

[6] Tan WL, Xiong L, Zheng SB, et al. Relationship between programmed cell death 5 protein expression and prognosis of renal clear cell carcinoma. J South Med Univ, 2006, 26(9):1316-1318. (in Chinese)譚萬龍, 熊林, 鄭少斌, 等. 腎透明細(xì)胞癌PDCD5表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 26(9):1316-1318.

[7] Mendiratta P, Rini BI, Ornstein MC. Emerging immunotherapy in advanced renal cell carcinoma. Urol Oncol, 2017, 35(12):687-693.

[8] Sánchez-Gastaldo A, Kempf E, González Del Alba A, et al. Systemic treatment of renal cell cancer: a comprehensive review. Cancer Treat Rev, 2017, 60:77-89.

[9] Duran I, Lambea J, Maroto P, et al. Resistance to targeted therapies in renal cancer: The importance of changing the mechanism of action. Target Oncol, 2017, 12(1):19-35.

[10] Buonerba C, Di Lorenzo G, Sonpavde G. Combination therapy for metastatic renal cell carcinoma. Ann Transl Med, 2016, 4(5):100.

[11] Grünert S, Jechlinger M, Beug H. Diverse cellular and molecular mechanisms contribute to epithelial plasticity and metastasis. Nat Rev Mol Cell Biol, 2003, 4(8):657-665.

[12] Mikami S, Oya M, Mizuno R, et al. Recent advances in renal cell carcinoma from a pathological point of view. Pathol Int, 2016, 66(9): 481-490.

[13] Choueiri TK, Motzer RJ. Systemic therapy for metastatic renal-cell carcinoma. N Engl J Med, 2017, 376(4):354-366.

[14] Nürnberger J, Bacallao RL, Phillips CL. Inversin forms a complex with catenins and N-cadherin in polarized epithelial cells. Mol Biol Cell, 2002, 13(9):3096-3106.

[15] Brown GT, Murray GI. Current mechanistic insights into the roles of matrix metalloproteinases in tumour invasion and metastasis. J Pathol, 2015, 237(3):273-281.

[16] Neth P, Ries C, Karow M, et al. The Wnt signal transduction pathway in stem cells and cancer cells: influence on cellular invasion. Stem Cell Rev, 2007, 3(1):18-29.

Inhibitory effect of PDCD5 on invasion and metastasis of renal cell carcinoma through Wnt/β-catenin pathway and its underlying mechanisms

LIU Hong-feng, ZHANG Cai-hong, ZHANG Xiu-fang, ZHAO Pei-qing

Author Affiliation:Department of Clinical Laboratory, Zibo Central Hospital, Shandong 255036, China

To investigate the expression of PDCD5 levels in patients with renal cell carcinoma (RCC) and its possible mechanisms of invasion and metastasis.

The expression levels of PDCD5 in RCC patient and adjacent tissues were detected by immunohistochemistry. The relationship between PDCD5 and disease stage or prognosis was analyzed, respectively. The transwell and scratch experiments were used to detect the effect of PDCD5 on invasion and metastasis of renal cancer cell line A498. The levels of MMP2, MMP9, E-cadherin, N-cadherin and Wnt/β-catenin pathway in A498 cell transfected with PDCD5 were detected by Western blot.

① Compared to the adjacent tissues, PDCD5 expression in RCC was significantly down-regulated (< 0.001), and was positively correlated with disease stage and prognosis. ②PDCD5 significantly inhibited the metastasis and invasion in renal cancer cell line A498 (< 0.01). ③PDCD5 regulated the expression of MMP-2, MMP9, N-cadherin and the key protein in Wnt/β-catenin pathway in A498 cell line and enhanced the expression of E-cadherin.

PDCD5 regulates the invasion and metastasis by regulating the EMT through Wnt/β-catenin pathway in renal cell carcinoma.

Carcinoma, renal cell; Neoplasm invasiveness; Epithelial-mesenchymal transition; Programmed cell death 5; Wnt/β-catenin pathway

ZHAO Pei-qing, Email: bzjzzpq@163.com

山東省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（ZR2015HM031、ZR2014HM042）；山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃（2016WSA03022）

趙培慶，Email：bzjzzpq@163.com

2018-01-10

10.3969/j.issn.1673-713X.2018.03.007