炙甘草湯對慢性疲勞綜合征大鼠行為學免疫球蛋白和干擾素水平的影響

劉鴻杰,黎杰軒,梁延昌,李發炘,黃泓慧,劉偉成,李香香,蔡海榮

(1.廣州中醫藥大學體育健康學院,廣東 廣州 510006;2.廣州中醫藥大學佛山市中醫院,廣東 佛山 528000)

慢性疲勞綜合征(Chronic Fatigue Syndrome,CFS)是一組包括慢性反復發作的體力疲勞和腦力疲勞等為主要表現的臨床癥候群[1-2]。慢性疲勞綜合征是一種介于疾病和健康之間的一種亞健康狀態。隨著社會的發展和生活方式的升高,慢性疲勞綜合征的發病率和患病率呈現上升的趨勢。目前關于慢性疲勞綜合征的發病機制尚不明確[3],有研究表明,免疫系統中的免疫球蛋白和干擾素等細胞活性因子介導了慢性疲勞綜合征的發生和發展[4-5]。現代醫學對慢性疲勞綜合征缺乏有效的治療手段,中醫藥治療本病具有一定特色和優勢[6],可以明顯改善癥狀,提高生活質量,但是關于其作用機制尚不明確。因此,本試驗建立了慢性疲勞綜合征大鼠模型,運用炙甘草湯進行干預,觀察其對力竭游泳試驗、鼠尾懸掛試驗和血清IgA、IgG、IgM、IFN-α、IFN-β、IFN-У水平的影響,探討其防治CFS的可能機制,報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物和飼料 SD健康雄性大鼠45只,SPF級,10周齡,體重為200±10 g;基礎飼料;上述產品均由廣東省醫學實驗動物中心提供,生產許可證號為SCXK(粵)2013-0002。

1.2藥品 炙甘草湯(炙甘草15 g,生姜10 g,桂枝10 g,人參6 g,生地黃15 g,阿膠6 g,麥冬10 g,麻仁10 g,大棗15 g),由廣東康美藥業股份有限公司提供,經營許可證號為粵AA2001217;將上述中藥飲片加8倍量的水浸泡30 min后,煎煮40 min取藥液過濾另存,再加6倍量的水煎煮40 min后取液過濾,兩次藥液混合,置于100℃環境濃縮至1 mL,相當于原藥6 g,置于冰箱保存;生理鹽水(上海百特醫療用品有限公司產品,規格:10 mL/支,批號2016080)。

1.3試劑和儀器 大鼠血清 IgA、IgG、IgM、IFN-α、IFN-β、IFN-У ELLISA 試劑盒(美國 R&D Systems公司產品,上海通蔚實業有限公司提供);上海恒平AE523C電子分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司產品);TGL16D冷凍離心機(湖南邁達儀器有限公司產品);日立熒光分光光度計F-2700(廣州市儀德科學儀器有限公司產品);水合氯醛(揚州市奧鑫助劑廠產品);902-ULTS超低溫冰箱(美國Thermo(賽默飛)產品)。

1.4方法

1.4.1造模方法和分組 所有大鼠在造模前置于室溫(24℃ ±2℃)、濕度(50% ±5%)條件下給予基礎飼料適應性喂養1周,待其代謝狀態穩定后隨機分為空白對照組(15只)、模型組(15只)和炙甘草湯組(15只),每6只分籠喂養。模型組和炙甘草湯組采取慢性束縛法加冷水游泳法隔天交替進行建立慢性疲勞綜合征模型:單日進行慢性束縛法:自制束縛筒,大小以裝進大鼠但是其頭部不能自由轉動為宜,將大鼠頭向通風口鉆進束縛筒,調節其不強烈反抗,后架于木板上,每次束縛30 min,隔天進行。雙日進行冷水游泳法:制備大小190×80×80 cm的游泳池,設置水深50 cm,水溫10℃ ±1℃,每次將大鼠放入游泳8 min,隔天進行。共造模4周。造模期間所有大鼠均自由進食基礎飼料和蒸餾水。

1.4.2給藥方法 參照人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表,炙甘草湯組給予12 g/kg·d炙甘草湯灌胃,日灌胃1次。空白對照組和模型對照組給予等體積(2 mL/kg·d)的生理鹽水灌胃,給藥周期為2周。

1.4.3實驗室指標檢驗 采血前禁食不禁飲12 h,10%水合氯醛溶液(3 mL/kg·bw)經腹腔注射麻醉,經頸總動脈取血10 mL,3 000 r/min離心20 min后取血清,-70℃保存。ELISA法測定血清IgA、IgG、IgM、IFN-α、IFN-β、IFN-У 的水平。

1.4.4鼠尾懸掛試驗 將大鼠尾端倒掛距離地面1 m的板上,記錄5 min內掙扎次數(由倒掛轉位翻轉)和靜止時間[7]。

1.4.5力竭游泳時間 將大鼠置于水深50 cm,溫度25℃±1℃的泳池中進行游泳,以大鼠入水至頭部10 s不能浮出水面為力竭游泳時間[8]。

1.4.6統計學方法 應用SPSS21.0統計軟件進行統計處理,計量資料用±s表示。多組間計量資料比較采用單因素方差分析檢驗方法,兩組間計量資料比較采用LSD-t檢驗,以P＜0.05為差異有統計意義。

2　結果

2.1各組大鼠一般情況 造模開始前各組大鼠的飲水量、進食量、體重、體毛、瞇眼和精神狀態正常,無明顯差別。隨著造模的進行,模型組大鼠飲水量、進食量逐漸減少,體重下降,被毛脫落,瞇眼動作減少,出現易怒等不良應激。炙甘草湯組大鼠飲食量、進食量、體重較模型組增加,被毛脫落減少,瞇眼動作增多,易怒等情緒應激減少。

2.2各組大鼠力竭游泳時間、掙扎次數、靜止時間的檢測結果 造模4周后,模型組和炙甘草湯組大鼠的力竭游泳時間、掙扎次數明顯低于對照組,靜止時間明顯增多,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。藥物干預2周后,模型組力竭游泳時間、掙扎次數明顯低于對照組,而靜止時間明顯增多,炙甘草湯組力竭游泳時間、掙扎次數較模型組明顯升高,靜止時間明顯減少,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。 見表1。

表1　各組大鼠力竭游泳時間、掙扎次數、靜止時間的的檢測結果

2.3各組大鼠血清IgA、IgG、IgM的檢測結果 藥物干預2周后,模型組血清IgA、IgG、IgM水平明顯低于對照組,差異均具有統計學意義(P＜0.05);與模型組比較,炙甘草湯組血清IgA、IgG、IgM明顯升高,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2　各組大鼠血清IgA、IgG、IgM的檢測結果(ug/mL)

2.4各組大鼠血清 IFN-α、IFN-β、IFN-У 的檢測結果 藥物干預2周后,與對照組比較,模型組血清IFN-α水平明顯升高,IFN-β、IFN-У水平明顯降低,差異均具有統計學意義(P＜0.05);與模型組比較,炙甘草湯組IFN-α水平明顯降低,IFN-β、IFN-У水平明顯升高,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。 見表3。

表3　各組大鼠血清IgA、IgG、IgM的檢測結果(pg/mL)

3　討論

慢性疲勞綜合征主要表現為極度的體力疲勞和腦力疲勞,主要表現為低熱、肌肉酸痛、疲倦乏力、免疫學異常等癥狀,是機體的一種亞健康狀態。隨著社會的日新月異和生活節奏的加快,慢性疲勞綜合征的發病率和患病率呈現明顯上升的趨勢。目前現代醫學治療慢性疲勞綜合征主要以補充維生素和營養為主,效果一般。因此,尋找一種有效的治療手段越來越受到臨床醫生的關注。關于慢性疲勞綜合征的發病機制尚不完全明確[9],有研究顯示,免疫系統功能紊亂在慢性疲勞綜合征的發生發展過程中起到非常重要的作用,包括免疫球蛋白水平異常和抗病毒抗體水平失衡等,慢性免疫激活狀態導致細胞因子釋放增多或減少,從而擾亂神經-內分泌-免疫系統,導致CFS癥狀出現[10-11]。IgA、IgG、IgM是B細胞產生的細胞活性因子,主要介導機體非特異性免疫反應,其水平越高,表明機體的免疫功能越好,水平越低,表示免疫功能低下。有研究指出,慢性疲勞綜合征大鼠血清IgA、IgG、IgM明顯低于健康大鼠[12]。干擾素(IFN)是一種具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調節作用的細胞因子。IFN-α由白細胞產生,IFN-β由成纖維細胞分泌,IFN-У由淋巴細胞產生,三者雖然都是具有抗病毒和免疫調節作用,但是IFN-α可以影響攝食、睡眠,還可以誘導疲勞、抑郁等不良精神針狀,出現疲倦乏力、肌肉酸痛等疲勞綜合征。IFN-β具有抑制細胞增殖、刺激NK細胞的細胞毒性作用從而參與免疫調節。IFN-У是一種促細胞分裂劑,具有促進T細胞活化為Th1細胞并促進Th1的增殖,促進機體的免疫活性[13]。

關于慢性疲勞綜合征大鼠模型建立的方法主要有慢性束縛法、冷水游泳法、電刺激法、跑臺法、夾尾應激法、免疫誘導法等。慢性疲勞綜合征是一個多因素長期作用的結果,一般有負面情緒、生活刺激、精神緊張、勞累等多因素的長期影響,因此決定了CFS大鼠的造模方法是一個復合應激法。冷水游泳法不僅可以誘導大鼠疲勞,而且可以誘導絕望情緒的產生。慢性束縛法可以誘導大鼠出現抑郁、焦慮、憤怒等不良情緒,產生心理應激。本組試驗采用慢性束縛法加冷水游泳法建立慢性疲勞綜合征大鼠模型,結果提示,造模4周后模型組大鼠力竭游泳時間、掙扎次數明顯減少(P＜0.05),靜止時間明顯增多,且體重、飲水量、進食量、被毛等明顯減少,出現易怒等不良應激反應,提示慢性疲勞綜合征大鼠模型復制成功。

慢性疲勞綜合征屬于中醫學“虛勞”范疇[14],其病機總屬于氣血陰陽虧虛[15]。炙甘草出自《傷寒論》,為治療虛勞病之經典名方。方中炙甘草、生地益氣養陰,人參大補元氣,大棗、麥冬、阿膠、麻仁滋陰養血,生姜、桂枝溫陽益氣,諸藥合用,共奏益氣養血、滋陰復脈之功效。本試驗發現,造模成功后慢性疲勞綜合征大鼠給予藥物灌胃2周后,炙甘草組大鼠力竭游泳時間、掙扎次數等明顯高于模型組,靜止時間明顯減少,血清 IgA、IgG、IgM、IFN-β、IFN-У水平明顯升高,IFN-α水平明顯降低,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。表明炙甘草湯可以降低代謝綜合征大鼠血清IFN-α水平,提高IgA、IgG、IgM、IFN-β、IFN-У 水平,改善疲勞癥狀,發揮治療慢性疲勞綜合征的作用。

綜上,炙甘草湯對治療慢性疲勞綜合征是有效的,可以改善疲勞癥狀,可能與其降低血清IFN-α的表達,促進 IgA、IgG、IgM、IFN-β、IFN-У 的表達有關。

參考文獻: