發情前期和發情期格力犬的血清孕酮水平及其適配期的凍精人工授精

郝志明,雷 磊

(天津農學院動物科學系,天津 西青 300384)

母犬的配種失敗的原因有很多,其中配種時間把握不準是最重要的原因。母犬的發情排卵表現差異很大,有的母犬在發情前期僅有少量血性分泌物排出,甚至不排出,這種情況下很難準確估計排卵時間;有的母犬在整個發情前期都表現出“偏尾”并接受公犬交配;有的則直至排卵后都不愿意接受交配;有的母犬在發情前期開始后的第12天排卵,有的可早至第5天排卵,有的則可晚至第25天排卵。所有這些原因常常使母犬錯失最佳的配種時間,導致懷孕失敗。

近些年的研究表明,犬的卵泡在發育期間就能產生孕酮,且其水平與LH峰和排卵緊密相關,可以準確判斷排卵時間,能確定最佳配種時間[1-5]。一般認為,排卵前LH峰時血清孕酮濃度為1～2.5 ng/mL[2]或2～4 ng/mL[1],排卵時血清孕酮濃度則為4～10 ng/mL[3]或4 ～7.5 ng/mL[5];也即孕酮水平達到1～2.5 ng/mL或 2～4 ng/mL時,母犬處在排卵前LH峰期,孕酮濃度為4～10 ng/mL或4～7.5 ng/mL時,母犬處在排卵期。因此可以通過測定孕酮水平來確定母犬的生殖狀態所處的時期,是LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期還是適配期。為了更好地指導生產實踐,本文就天津帝豪犬業利用血清孕酮水平測定進行輸精指導的工作進行了總結,以期更準確地了解處于發情前期和發情期母犬的血清孕酮水平及各期間的間隔時間的變化規律,更好地指導排卵鑒定和配種工作。

1　材料與方法

1.1試驗動物 來天津帝豪犬業進行人工授精的格力犬,年齡1～10歲,共61只。

1.2孕酮測定儀 法國梅里埃公司生產的mini-VIDAS全自動熒光免疫分析儀。

1.3測定方法

1.3.1打開mini-VIDAS全自動熒光免疫分析儀電源開關,預熱;冰箱冷藏室取出梅里埃專用孕酮測定試劑條和SPR放室溫0.5 h以上。

1.3.2犬只前肢正中靜脈采血,放入離心機3 000 r/min離心10 min。

1.3.3將梅里埃專用孕酮測定試劑條和SPR放入儀器,吸取200 μL血清加入孕酮測定試劑條的加樣孔中。

1.3.4按壓運行和倉位即開始測定 約50 min后,自動打印測定結果。

1.4生殖狀態分期 按照孕酮水平,將發情前期和發情期分為LH峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期和適配期,其孕酮水平分別為 ＜1.0 ng/mL、1.0 ～2.5 ng/mL、2.5 ～4.0 ng/mL、4.0 ～7.0 ng/mL、7.0 ～10.0 ng/mL、10.0 ～20.0 ng/mL 和20.0 ～30 ng/mL。

1.5凍精人工授精 凍精解凍后,用可視化過子宮頸人工授精技術將其注入子宮腔內,所用輸精設備為森達牌過子宮頸人工授精系統,具體方法見犬可視化過0子宮頸人工授精技術[6]。

1.6結果統計 測定結果除按發情天數進行統計外,為了確定孕酮測定的間隔時間,本文還對各個時期的平均間隔時間和間隔時間的范圍進行了統計。

2　試驗結果

2.1發情前期和發情期格力犬血清孕酮水平變化規律 從圖1可以看出,隨著發情天數的增加,格力犬血清孕酮水平在逐漸增加,且增加的速度越來越快,總的來說,在前14 d孕酮水平的增加較為緩慢,但在第15天和第16天,孕酮水平的升高顯著加快,第16天時血清孕酮水平平均達到24 ng/mL以上。

圖1　發情前期和發情期格力犬血清孕酮水平變化

2.2至適配期所需要的平均時間和范圍 從表1可以看出,在正常情況下,處在LH峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期的格力犬距離適配期的平均時間分別為 2.08、3.26、4.88、7.16 h和 10.00 h,其時間范圍分別是 1 ～3 d、2 ～5 d、3～7 d、4～13 d和7～14 d。 LH 峰期距離排卵前半期的平均時間為 3.90 d(7.16 ～3.26=3.90),距離排卵后半期的平均時間則為5.08 d(7.16～2.08=5.08)。

表1　至適配期(20～30 ng/mL)所需的平均時間和范圍

2.3凍精過子宮頸人工授精的產仔率 見表2。

表2　適配期格力犬凍精過子宮頸人工授精的產仔率

本試驗對64只處在適配期的母格力犬進行了凍精的過子宮頸人工授精,結果有56只犬懷孕產仔,產仔率達87.5%。血清孕酮水平20～25 ng/mL和26～30 ng/mL相比,孕酮水平為26～30 ng/mL時產仔率更高,達90.0%,見表2。

3　討論

3.1犬卵泡的孕酮產生 在家畜,排卵后的卵泡組織黃體化后轉變成為黃體組織,并形成黃體,才開始產生孕酮。但犬則不同,犬的卵泡在雌激素分泌達到最大前的發情前期,就開始了緩慢的黃體化,之后在LH峰期的作用下,才開始廣泛而快速的黃體化[1-2],因此,犬在發情前期,血清孕酮水平就開始增加,LH峰后期孕酮水平則開始較快的增加,排卵完成后,血清孕酮水平則以更快的速度增加。與此相似,從本研究的血清孕酮水平來看,格力犬孕酮的產生也是在LH峰后期加快,排卵后更快的方式進行的。綜上所述,LH峰期和排卵與孕酮水平是緊密相關的,這也正是孕酮水平測定能夠準確預測發情母犬排卵的科學依據。

3.2犬血清孕酮水平和配種時間的關系 大多數人認為,在犬LH峰后期48小時出現排卵,排出的卵子在輸卵管繼續發育48～72 h才能夠成熟[1、3],另外成熟的卵子維持受精能力的時間可達2～3 d[1],因此配種的時間應該是LH峰后期的4～6 d,或排卵后的2～4 d。至于孕酮與LH峰期和排卵的關系,不同的報道有一些差異。LH峰期時,Concannon P W等的報道認為血清孕酮水平為1～2.5 ng/mL[2],趙興緒認為血清孕酮水平為2～4 ng/mL[1],Hase M則認為血清孕酮濃度大于2 ng/mL[4];而排卵時,Janice L C認為血清孕酮濃度為4～10 ng/mL[3],Lee B C等則認為為4 ～7.5 ng/mL[5]。

3.3犬凍精過子宮頸人工授精的產仔率 許多研究顯示,無論是新鮮精液還是低溫保存精液,子宮內輸精明顯優于陰道內輸精[7-11]。在冷凍精液,子宮內人工授精的產仔率明顯優于陰道內輸精。Thomassen R等和Linde-Forsberg C的試驗表明,冷凍精液人工授精的產子率可達80% ～85%[7-8]。Wilson M S的結果則顯示,在發情母犬來源不詳的情況下,非手術法宮內人工授精的受胎率可達83.3%和平均7.5只的產仔數[12]。本試驗的產仔率則略高,平均達87.5%。