胃癌組織中Notch1、Notch2、COX-2的表達及其與臨床病理學參數(shù)的關(guān)系

劉 敏，任 茜，李 強，葉玉偉，陳兆峰

1.蘭州大學第一醫(yī)院消化內(nèi)科，甘肅 蘭州730000；2.甘肅省胃腸病重點實驗室

在中國，胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤，每年新增36～40萬胃癌患者，死亡率占我國腫瘤死因的第二位，而甘肅省為胃癌高發(fā)區(qū)，死亡率位居全國首位[1]。環(huán)氧合酶-2(COX-2)是一種誘導型表達蛋白，催化花生四烯酸生成前列腺素，參與炎癥、腫瘤血管形成及腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等多種病理生理過程。

1 材料與方法

1.1材料收集2010年4月至2012年6月于甘肅省武威市腫瘤醫(yī)院接受胃癌根治手術(shù)的65例患者的手術(shù)切除標本，男40例，年齡(25～75)歲(中位年齡54歲)，女25例，年齡(28～76)歲(中位年齡55歲)。納入及排除標準：納入本研究患者均為武威地區(qū)常駐人口，術(shù)前均未接受過放、化療，無嚴重心、肺功能衰竭等疾病，既往無胃手術(shù)史。分別采集胃癌及其其癌旁組織，于-80 ℃長期保存。所有患者收集完整的臨床及病理資料，包括姓名、性別、年齡、病變部位、組織學類型、分化程度、浸潤深度、TNM分期及有無遠處轉(zhuǎn)移等。

1.2試劑Total RNAiso Plus、SYBP?Premix Ex TaqTM Ⅱ、PrimeScript?RT Master Mix Perfect Real Time、引物合成均來自TaKaRa公司。BCA蛋白定量試劑盒購自Bioworld公司、RIPA蛋白裂解液(強)與PMSF購自碧云天生物公司，Super ECL Plus超敏發(fā)光液購自北京普利萊公司。Anti-Notch1 intracell μLar domain antibody、Anti-Notch2 intracell μLar domain antibody 、Anti-COX-2 antibody均購自Abcam公司、Anti-GAPDH antibody購自杭州賢至生物。其余qPCR、Western blotting試劑與儀器均來自甘肅省胃腸病重點實驗室。

1.3實時熒光定量PCR核酸/蛋白定量檢測儀進行總RNA定量檢測，所提取的胃癌及其癌旁組織的OD260/OD280比值為1.8～2.2。按照5×PrimeScript RT Master Mix試劑盒說明書反轉(zhuǎn)錄為cDNA，按照SYBP?Premix Ex TaqTMⅡ說明書，應用LightCycler?480擴增儀采用兩步法進行反應。反應步驟：95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s，共40個循環(huán)。……