羧基張力蛋白素在膀胱尿路上皮癌中的表達及其臨床意義

郭 超，張祥生

膀胱癌是泌尿系統中最常見的惡性腫瘤之一，每年以數以萬計的速度在增加［1-3］。膀胱癌患者中，發病率最高的地區為歐洲、北美，最低的地區為中非，且男性明顯多于女性［4］。 羧基張力蛋白素（CTEN）是張力蛋白（TENSIN）家族成員之一［5］。 近年來的研究發現，CTEN與多種腫瘤的侵襲性和預后有明顯的相關性，在腫瘤進展中起到關鍵作用，是一個重要的預后因素［6，7］。

該文采用免疫組織化學SP法分別對82例膀胱尿路上皮癌 （bluddar urothelial carcinoma，BUC）組織和膀胱正常組織中CTEN的表達程度進行檢測，研究CTEN的表達與BUC的病理分級、臨床分期的聯系，為進一步探討CTEN在膀胱癌發生、發展過程中的作用及臨床意義提供依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集2015年—2016年解放軍150中心醫院泌尿外科手術切除膀胱癌組織82例，所有標本均由筆者所在醫院病理科醫師復核分級并有完整的臨床資料，其中男49例，女33例；年齡32～84歲，平均54．5歲。膀胱癌組織病理分級（按WHO 2004標準）：低級別乳頭狀尿路上皮癌55例；高級別乳頭狀尿路上皮癌27例。臨床分期根據UICC 的 TNM 法進行分類：Ta～T1期 50 例，T2～T4期32例。全部病例術前均未行放、化療。72例行經膀胱尿路腫瘤電切術，10例行膀胱部分切除術。對照組15例均為正常膀胱組織。

1．2 主要試劑 兔抗人CTEN單克隆抗體購自美國Abcam公司，DAB顯色試劑盒購自上海生物技術有限公司，檸檬酸鹽緩沖液 （0．01 mol/L，PH為6．0）購自中杉金橋公司。

1．3 實驗方法

1．3．1 實驗步驟 免疫組化采用SP法。所有組織均經多聚甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，切片5 μm，脫蠟和水化后，PBS洗滌，檸檬酸鹽抗原修復液中進行抗原修復，3%過氧化氫溶液處理，PBS洗滌，正常羊血清封閉（室溫 20～30 min）；PBS 沖洗，滴加1/400稀釋的一抗（兔抗人CTEN單克隆抗體），4℃過夜；PBS沖洗，滴加二抗 （生物素標記的羊抗兔lgG），室溫孵育 20 min；PBS 沖洗，DAB 顯色，蘇木素復染，1%鹽酸乙醇浸洗2 s，流水沖洗2 min，脫水，封片。顯微鏡下觀察。

1.3.2 判斷標準 陽性染色為細胞核或細胞質存在不均質棕色顆粒。使用半定量積分法分析實驗結果，隨機觀察切片中的5個高倍視野（400倍），每個視野下計算著色細胞總數并觀察染色質的染色深度。以染色強度和陽性細胞數這兩方面進行評估。染色強度：不著色或顯示不清者記為0分、淺黃色記為1分、棕黃色記為2分、深褐色記為3分。陽性細胞數：無陽性細胞為0分，＜25%記1分，25%～50%記 2分，＞50%記 3分。兩者相乘 0分為（-），1～3分為（+），4～5 分為（++），≥6 分為（+++）。弱陽性為（+），中度陽性為（++），強陽性為（+++）。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19．0統計軟件處理，兩組間計數資料分析采用χ2檢驗。檢驗水準α=0．05。

2 結果

CTEN在正常膀胱組織、膀胱癌組織中均有表達，其中，正常膀胱組織中大部分為陰性表達，少部分為陽性表達，陽性表達率為 26．27%（4/15），主要位于細胞質中。而在BUC組中，CTEN陽性表達率為 63．41%（52/82）。其中，低級別膀胱癌陽性表達率為 54．54%（30/55），高級別膀胱癌陽性表達率為81．48%（22/27），主要位于細胞質中（圖 1）。

圖1 免疫組化檢測CTEN在正常膀胱組織中及膀胱尿路上皮癌不同病理分級中的表達情況（×400）

膀胱癌組織中CTEN的表達陽性率均較正常膀胱黏膜組織高（P＜0．05），見表 1。 并且隨著腫瘤臨床分期和病理分級的升高，CTEN的表達也升高，且免疫組化結果中染色強度變深，差異有統計學意義（P＜0．05）。CTEN的表達在不同性別和年齡間的差別無統計學意義（P＞0．05），見表 2。

表1 正常膀胱組織與BUC中CTEN表達的比較（例）

表2 BUC組織中CTEN的表達與臨床病理特征的關系（例）

3 討論

膀胱癌中超過90%是BUC，可分為非肌層浸潤性和肌層浸潤性。臨床病理研究表明，大多數非肌層浸潤性膀胱癌患者（70%～80%）普遍易復發但很少進展，而肌層浸潤性膀胱癌患者則侵襲性大，5年生存率約30%～60%［8-11］。膀胱癌的發生機制還未完全明確，因此迫切需要從根本上找出參與膀胱癌發生、發展及預后的基因或腫瘤標志物，制定準確有效的診斷和治療方法，對指導膀胱癌的臨床預后評估、治療方式的選擇有重大意義，從而進一步減少膀胱癌的發生和死亡率。

CTEN是張力蛋白（tensin）家族中繼tensin-1、tensin-2、tensin-3的第四個成員，由于其缺乏N-末端蛋白結合域，所以其較短。CTEN在人體中主要位于前列腺和胎盤組織，而在其他組織中表達低。有研究表明CTEN蛋白在很多惡性腫瘤，如：胸腺瘤、結腸癌、胃癌、肺癌等組織中都高表達［7，12-20］，被認為是一種致癌基因。另外有細胞學實驗研究表明，CTEN蛋白能夠增加細胞的運動和侵襲能力，這個是腫瘤增殖和轉移的前提條件。

為明確CTEN在膀胱癌組織中是否存在表達異常且發揮抑癌基因作用，該研究采用免疫組織化學方法檢測CTEN在膀胱癌組織及正常膀胱組織中的表達。結果顯示在膀胱癌組織中CTEN的表達與正常膀胱組織相比明顯升高，差異有統計學意義。目前也有研究結果表明，CTEN在腫瘤進展及預后方面起關鍵作用，其表達缺失一般提示腫瘤具有高侵襲性，預示患者預后不良、生存率下降。本研究結果顯示在病理分級及臨床分期更高的膀胱癌組織中CTEN的表達同樣增高，差異有統計學意義。由此可推測可能對膀胱癌的診斷和治療提供輔助參考價值，可能成為預測腫瘤預后的分子標志物和潛在治療靶點。

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