黑色素瘤優先表達抗原在骨肉瘤組織中的表達及其臨床意義

譚平先， ，，，，， ，

(1.深圳市龍崗中心醫院脊柱、骨腫瘤科，廣東 深圳 518116；2.中山大學附屬第一醫院骨腫瘤科，廣東 廣州 510080)

腫瘤相關抗原能夠刺激并被細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T cell, CTL)識別,成為腫瘤免疫治療的靶向抗原，有著較好的臨床治療前景，1997年Ikeda等[1]發現黑色素瘤優先表達抗原(preferentially expressed antigen of melanoma，PRAME)在黑色素瘤患者中表達，并且能被CTL識別，該腫瘤抗原位于22號染色體上,由509個氨基酸編碼的抗原性蛋白,目前功能尚不清楚,其能被HLA-24識別，并遞呈給CTL。作者應用免疫組化技術檢測骨肉瘤患者治療前穿刺活檢標本中PRAME表達情況，并分析PRAME表達與患者預后關系，探討其在骨肉瘤患者中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料95例骨肉瘤術前穿刺活檢病理切片及16例術后骨纖維結構不良病理切片(陰性對照)均取自中山大學附屬第一醫院病理科病理組織標本庫，95例骨肉瘤術前穿刺活檢病理切片取自1998年至2008年間中山大學附屬第一醫院收治的骨肉瘤患者，均為所有治療發生之前進行穿刺活檢確定骨肉瘤診斷送病理檢查的標本。所有標本活檢及術后病理均確診為骨肉瘤，且患者隨訪資料齊全。95例患者均獲得了腫瘤廣泛性切除和規范的新輔助化療。

1.2方法主要試劑：羊抗人抗PRAME抗體(英國Abcam公司)，兔抗羊二抗(美國Proteintech Group公司)，羊抗人抗GAPDH抗體(美國Invitrogen公司)。具體方法：1)石蠟切片脫蠟水化，過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，抗原修復，PBS洗滌，正常血清封閉。滴加一抗，4 ℃冰箱過夜孵育。PBS洗滌，滴加生物素化的二抗，37 ℃孵育40 min。PBS洗滌。滴加SAB復合物，37 ℃孵育40 min。……