血清QSOX-1、GSN、AFP聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

宋曉婷，國嬌，譚順順，黃天壬，何雨，張春燕

(1 廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，南寧530021；2 柳州市人民醫院；3 廣西醫科大學第一附屬醫院)

目前臨床對原發性肝癌的早期篩查主要通過檢測血清腫瘤標志物。甲胎蛋白(AFP)是最經典的血清腫瘤標志物之一，但其診斷原發性肝癌的敏感性為60%左右，且特異性有限[1]。因此，尋找敏感、特異的原發性肝癌血清腫瘤標志物一直是近年研究熱點。本課題組前期應用同位素標記相對和絕對定量、液相色譜串聯質譜等蛋白質組學技術，對廣西壯族自治區原發性肝癌高發地區的高危人群進行動態定量差異蛋白質組學分析，篩選出了兩種差異性蛋白，即巰基氧化酶1(QSOX-1)、凝溶膠蛋白(GSN)[2]。后續研究在蛋白水平上對QSOX-1、GSN作為診斷原發性肝癌的分子生物標志物進行驗證，初步認定QSOX-1、GSN對原發性肝癌的診斷具有潛在價值[3]。本研究探討血清QSOX-1、GSN、AFP聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年10月～2016年1月廣西醫科大學附屬腫瘤醫院收治的原發性肝癌患者60例(肝癌組)，均符合《原發性肝癌診療規范》(2011年版)中的診斷標準，入院前未行任何抗腫瘤治療，并排除活動性肝病、妊娠、生殖系胚胎源性腫瘤及轉移性肝癌。其中，男41例、女19例，年齡31～74(51.23±10.00)歲。同期選擇廣西醫科大學附屬腫瘤醫院收治的乙肝、肝硬化、肝膿腫等其他肝病患者60例(肝病組)，均根據臨床表現及實驗室檢查、影像學檢查等明確診斷，并排除肝臟惡性腫瘤。其中，男43例、女17例，年齡33～77(48.60±9.42)歲，疾病類型：乙肝20例、肝硬化20例、肝膿腫10例、肝吸蟲病10例。同期另選在廣西醫科大學附屬腫瘤醫院體檢的健康志愿者60例(對照組)，男36例、女24例，年齡30～75(48.40±12.14)歲。三組性別、年齡具有可比性。本研究經廣西醫科大學附屬腫瘤醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 血清QSOX-1、GSN、AFP檢測 所有研究對象入組次日采集清晨空腹外周靜脈血5 mL，靜置2 h，1 000×g離心15 min，留取血清，-80 ℃冰箱保存。采用Multiskan MK3型酶標儀、ELISA法檢測血清QSOX-1、GSN，采用羅氏Cobas e601型全自動免疫分析儀、電化學發光法檢測血清AFP。所有操作嚴格按照試劑盒說明進行。

1.3 血清QSOX-1、GSN、AFP單獨或聯合檢測診斷原發性肝癌的效能分析 分別繪制血清QSOX-1、GSN、AFP單獨檢測診斷原發性肝癌的受試者工作特征(ROC)曲線，確定血清QSOX-1、GSN、AFP單獨檢測診斷原發性肝癌的臨界值；血清QSOX-1、GSN、AFP聯合檢測診斷采用Binary Logistic回歸分析，產生各個體預測概率的新變量，得出ROC曲線，采用ROC曲線下面積(AUC)評價血清QSOX-1、GSN、AFP單獨及聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以M(P25，P75)表示，多組比較采用Kruskal-WallisH檢驗，組間兩兩比較采用Mann-Whitney秩和檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清QSOX-1、GSN、AFP水平比較 見表1。

表1 各組血清QSOX-1、GSN、AFP水平比較[M(P25，P75)]

注：與對照組比較，*P<0.01；與肝病組比較，#P<0.01。

2.2 血清QSOX-1、GSN、AFP單獨及聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能分析 ROC曲線分析顯示，血清QSOX-1、GSN、AFP單獨檢測診斷原發性肝癌的AUC分別為0.891、0.801、0.802，95%CI分別為0.846～0.935、0.736～0.867、0.729～0.874，P均<0.01。血清QSOX-1、GSN、AFP單獨檢測診斷原發性肝癌的最佳臨界值分別為26.192 pg/mL、100.567 ng/mL、9.500 ng/mL，此時三者診斷原發性肝癌的Youden指數分別為58.3%、53.3%、55.0%，敏感性分別為88.3%、70.0%、73.3%，特異性分別為70.0%、83.3%、81.7%。AFP+QSOX-1、AFP+GSN、QSOX-1+GSN、AFP+QSOX-1+GSN診斷原發性肝癌的AUC分別為0.911、0.848、0.895、0.918，95%CI分別為0.871～0.950、0.790～0.907、0.850～0.939、0.879～0.956，P均<0.01。此時，其診斷原發性肝癌的Youden指數分別為64.2%、59.2%、63.3%、65.8%，敏感性分別為88.3%、80.0%、85.0%、90.0%，特異性分別為75.8%、79.2%、78.3%、75.8%。

3 討論

影像學檢查及血清腫瘤標志物檢測是目前臨床早期篩查原發性肝癌的主要手段[4]。超聲檢查雖能發現病灶，但其檢出率過于依賴檢測儀器的敏感性，并要求影像科醫師具有豐富的經驗[5]。血清腫瘤標志物檢測具有取材簡單、操作便捷、檢測費用低等優點，但由于受多種因素影響，其敏感性和特異性均不令人滿意。因此，探索更佳的血清腫瘤標志物早期篩查原發性肝癌一直是臨床研究熱點。

蛋白質組學技術是現代生命科學研究的方法之一，如同位素標記的相對和絕對定量技術、液相色譜串聯質譜技術，可較全面、整體地分析相關蛋白的組成、表達、修飾狀態，揭示蛋白功能與生命活動規律。因此，通過蛋白質組學技術探尋敏感的腫瘤標志物，可能是腫瘤發病機制研究的新路徑[6，7]。

QSOX-1是由TRX和ERV1融合而成的多結構域蛋白，廣泛存在于消化系統、呼吸系統、生殖系統等高二硫鍵蛋白分泌組織，可催化蛋白硫醇氧化成二硫化物，參與細胞內蛋白折疊過程。研究發現，敲除QSOX-1表達可抑制腎癌細胞增殖，提示QSOX-1可能具有癌基因作用[8]。有研究發現，QSOX-1高表達與胰腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤的侵襲性有關，說明QSOX-1是與腫瘤侵襲性有關的蛋白分子[9～11]。Yano等[12]應用吉非替尼治療胰腺癌時發現，血清QSOX-1表達升高，并認為QSOX-1可能是治療胰腺癌潛在靶點之一。另有研究發現，QSOX-1高表達與腫瘤患者預后不良有關[13]。本課題組前期基于蛋白質組學技術研究發現，QSOX-1、GSN有可能是診斷原發性肝癌潛在的分子生物標志物[2]。

GSN是一種鈣調節蛋白，屬于凝溶膠蛋白超家族，可參與肌動蛋白絲的剪切、聚合、解聚，影響細胞骨架重排，同時與細胞凋亡、免疫、炎癥等有關。研究發現，GSN具有參與腫瘤侵襲、轉移等生物學功能，其作用機制可能與PI3K、c-erb-2/EGFR、Ras-PI3K-Rac等信號通路有關[14]。王紹清等[15]通過抑制鼠源肝癌細胞Hca-F中GSN表達發現，GSN表達下調可降低鼠源肝癌細胞Hca-F的侵襲能力，提示GSN可能與肝癌發展有關。Deng等[16]研究發現，在肝癌組織中GSN高表達，其高表達與肝癌細胞增殖和侵襲相關。上述研究提示，GSN亦可能為診斷原發性肝癌潛在的分子生物標志物。

本研究結果顯示，肝癌組、肝病組、對照組血清QSOX-1、GSN、AFP水平依次遞減，說明血清QSOX-1、GSN、AFP均與肝癌的發生、發展有關。本研究以ROC曲線的AUC及Youden指數作為診斷原發性肝癌效能的評價指標，結果顯示，在單獨及聯合檢測中，血清QSOX-1+GSN+AFP聯合檢測的AUC、Youden指數最佳，分別為0.918、65.8%；兩兩指標(AFP+QSOX-1、AFP+GSN、QSOX-1+GSN)聯合檢測的AUC分別為0.911、0.848、0.895，Youden指數分別為64.2%、59.2%、63.3%；單獨(QSOX-1、GSN、AFP)檢測的AUC分別為0.891、0.801、0.802，Youden指數分別為58.3%、53.3%、55.0%。說明QSOX-1+GSN+AFP聯合檢測診斷原發性肝癌的效能優于兩兩指標聯合檢測及單獨檢測。敏感性和特異性分析發現，QSOX-1+GSN+AFP聯合檢測診斷原發性肝癌的敏感性最佳，其特異性達到75.8%。說明QSOX-1+GSN+AFP聯合檢測可降低原發性肝癌的漏診率及誤診率，提高診斷準確性。

綜上所述，血清QSOX-1、GSN、AFP聯合檢測可提高對原發性肝癌的診斷敏感性，優化診斷效能，對原發性肝癌的早期篩查具有一定參考價值。

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