銀屑病患者外周血濾泡輔助性T細胞比例、血清IL-21水平變化及其與病情的關系

呂萌，沈萃萃

(廣州中醫藥大學臨床醫學院，廣州510405)

銀屑病是一種自身免疫性疾病，其發病機制尚未完全明確，可能與遺傳、內分泌、免疫功能異常及微循環障礙等有關[1，2]。濾泡輔助性T細胞(Tfh)是近年發現的CD4+T細胞亞群[3,4]，已被證實可參與自身免疫性疾病的發生。Tfh主要以膜表面表達CXC趨化因子受體5(CXCR5)以及誘導共刺激分子(ICOS)表達等為特征[5]。CXCR5是Tfh區別于其他CD4+T細胞的標志，ICOS表達在活化Tfh細胞中。Tfh可分泌IL-21[6]，但血清IL-21并不全是由Tfh分泌，輔助性T細胞17(Th17)也能分泌IL-21。本研究觀察了銀屑病患者外周血Tfh、活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平變化，并探討其在銀屑病發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年10月～2017年2月廣州中醫藥大學第一附屬醫院收治的銀屑病患者77例(觀察組)，男44例、女33例，年齡33～62(44.2±5.3)歲，銀屑病皮損面積與嚴重程度評分(PASI評分)[7](總分72分，得分越高，病情越重)≥10分42例、<10分35例。所有患者符合趙辯主編《臨床皮膚病學》[8]中的相關診斷標準。排除自身免疫系統疾病、感染性疾病以及其他慢性疾病者，入院前30天內接受過可能會影響免疫功能的藥物治療者，合并惡性腫瘤者。另選同期在廣州中醫藥大學第一附屬醫院接受體檢的健康者70例(對照組)，男41例、女29例，年齡32～63(44.4±5.5)歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經廣州中醫藥大學第一附屬醫院醫學倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 外周血Tfh(CD4+CXCR5+T細胞)、活化Tfh(CD4+CXCR5+ICOS+T細胞)及Th17比例檢測 所有研究對象(觀察組入院次日)采集清晨空腹靜脈血6 mL，均分為2份，取任意一份EDTA抗凝，與等體積的PBS混勻，加入Ficoll淋巴細胞分離液獲取外周血單個核細胞；將單個核細胞保存在含有10%胎牛血清的二甲基亞砜培養液中。用PBS重懸上述細胞，分別加入CD45-PC7、CD3-ECD、CD4-FITC、CXCR5-PC以及ICOS-PE抗體各20 μL，充分震蕩后置于陰暗處孵育20 min。滴加PBS 2 mL，離心后去除上清液，重復洗滌2次；滴加PBS 500 μL重懸，流式細胞儀檢測CD4+CXCR5+T細胞、CD4+CXCR5+ICOS+T細胞。采用RPMI 1640培養液調整上述單個核細胞密度為8.0×105個/mL，隨后將細胞懸液接種于6孔板中，加入50 ng/mL的佛波酯、500 ng/mL離子霉素、1 mmol/L布雷非德菌素A，在37 ℃、5% CO2培養箱中培養4 h，加入CD45-PC7、CD3-ECD、CD8-PE各20 μL，室溫避光條件下孵育20 min，PBS重復洗滌2次，離心處理去除上清液；固定劑固定15 min，PBS洗滌1次，離心處理去除上清液；加入破膜劑在室溫下孵育5 min，離心處理去除上清液；加入IL-17抗體，室溫避光條件下孵育20 min，離心處理去除上清液；加入PBS 500 μL重懸，上流式細胞儀檢測Th17。

1.3 血清IL-21檢測 取另一份空腹靜脈血標本，分離血清后采用ELISA法檢測血清IL-21。嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 兩組外周血Tfh、活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平比較 觀察組外周血Tfh、活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平均高于對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組外周血Tfh、活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 觀察組PASI評分≥10分者與<10分者外周血Tfh、活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平比較 觀察組PASI評分≥10分者外周血活化Tfh比例及血清IL-21水平均高于PASI評分<10分者(P均<0.05)，但二者外周血Tfh、Th17比例比較P均>0.05。見表2。

表2 觀察組PASI評分≥10分者與<10分者外周血Tfh、 活化Tfh、Th17比例及血清IL-21水平比較

注：與PASI評分<10分者比較，*P<0.05。

3 討論

研究認為，免疫功能異常可參與銀屑病發生、發展[9,10]。Tfh是一種功能強大的T細胞亞群，是CD4+效應T細胞的一個亞群，因其表達CXCR5和IL-21等，故可存在于淋巴濾泡中并輔助B細胞活化和分化。IL-21為Tfh分泌的主要細胞因子，也是其最主要的效應執行分子。目前主要通過檢測T細胞表面CXCR5和ICOS蛋白的方法來確定Tfh。外周血Tfh比例在多種自身免疫性疾病患者(如系統性紅斑狼瘡)中升高，故筆者推測Tfh細胞可能參與銀屑病的發生、發展。國內外多項研究報道，自身免疫性疾病患者外周血Tfh比例明顯升高，且其升高程度和致病性抗體水平呈正相關關系，提示外周血Tfh可參與自身免疫性疾病的發生。本研究結果顯示，觀察組外周血Tfh、活化Tfh比例均明顯高于對照組。表明外周血Tfh在銀屑病的發生、發展過程中具有至關重要的作用。薛國輝等[11，12]報道，銀屑病患者外周血Tfh比例升高，本研究結果與之相符。表明外周血Tfh在銀屑病的發生、發展過程中具有重要作用。觀察組外周血Th17比例明顯高于對照組，表明Th17細胞也可能參與了銀屑病的發生、發展過程，與文獻[13～16]報道相符。觀察組血清IL-21水平明顯高于對照組，表明IL-21作為Thf的效應分子參與銀屑病的發生、發展。

本研究結果顯示，觀察組PASI評分≥10分者外周血活化Tfh比例及血清IL-21水平均明顯高于PASI評分<10分者，表明檢測外周血活化Tfh比例及血清IL-21水平有助于患者病情判斷。Tfh細胞可自分泌或旁分泌IL-21，Th17也可分泌IL-21。綜合本研究結果，筆者認為觀察組血清IL-21水平高于對照組是由于活化Tfh比例升高而不是由于Th17分泌增多所致。表達ICOS的活化Tfh可能是在銀屑病發病過程中起致病作用的主要效應細胞，其可嚴重影響Tfh的存活狀態，同時對Tfh分泌IL-21的能力進行調控。因此認為，活化Tfh可能是通過調控IL-21的分泌而參與銀屑病的發生、發展。活化Tfh可調控IL-21的分泌，影響外周血IL-21水平，繼而影響炎癥反應過程，導致銀屑病的發生、發展。

綜上所述，檢測外周血活化Tfh比例及血清IL-21水平有助于輔助評估銀屑病患者病情。

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