前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達變化及其臨床意義

劉濤，張璐，張凡

(江漢大學附屬醫院，武漢430015)

膠質瘤抑癌候選基因2(GLTSCR2)是一種抑癌基因，主要定位于細胞核，可通過p53依賴性信號通路抑制細胞增殖并對細胞周期進行調控[1～4]。研究發現，在膠質母細胞瘤、成神經細胞瘤和結腸癌等惡性腫瘤細胞中GLTSCR2低表達，其低表達與患者預后不良有關[5]。本研究探討GLTSCR2在前列腺癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年7月～2012年7月江漢大學附屬醫院收治的前列腺癌患者45例。所有患者符合《前列腺癌診斷標準》[6]，并經術后組織病

理檢查明確診斷。排除標準：①既往行外科手術、化療或放療等抗腫瘤治療；②有前列腺炎病史，術前1周發生急性尿潴留；③術前2周接受前列腺按摩或直腸指檢，術前1個月接受前列腺穿刺?；颊吣挲g(64.3±7.1)歲，Gleason評分(4.7±0.7)分，血清前列腺特異性抗原(PSA)水平(29.4±3.1)ng/mL，吸煙29例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期25例，Ⅲ、Ⅳ期20例；組織分化程度：高中分化31例，低未分化14例；有淋巴結轉移6例，無淋巴結轉移39例。同期選擇該院收治的前列腺增生患者40例，年齡(65.1±7.8)歲。所有患者經術后組織病理檢查明確診斷。

排除標準：①慢性前列腺炎；②合并惡性腫瘤、全身嚴重感染；③術前2周接受前列腺按摩或直腸指檢，術前1個月接受前列腺穿刺。本研究經江漢大學附屬醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 前列腺組織GLTSCR2蛋白表達檢測 采用免疫組化法。取手術切除的前列腺癌組織及其配對的癌旁正常組織以及手術切除的前列腺增生組織，液氮中保存。實驗前取部分組織，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。將切片置于60 ℃烤箱烤片2 h，二甲苯脫臘，梯度乙醇脫水；3% H2O2室溫孵育15 min，消除內源性過氧化物酶活性；微波加熱抗原修復；加入山羊血清封閉液室溫孵育20 min，再加入GLTSCR2一抗4 ℃孵育過夜；次日PBS沖洗3次，加入生物素標記的羊抗小鼠IgM二抗，37 ℃孵育15 min；DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。GLTSCR2蛋白陽性染色主要定位于細胞質或細胞核，呈褐色或棕褐色顆粒。隨機選擇5個400倍視野，計數陽性細胞數。根據染色強度和陽性細胞所占比例綜合判定GLTSCR2蛋白表達。染色強度：-為0分，+為1分，++為2分，+++為3分。陽性細胞所占比例：≤25%為1分，>25%～≤75%為2分，>75%為3分。二者乘積為0～9分，其中0～2分為低表達、3～9分為高表達。

1.3 隨訪 前列腺癌患者從術后開始，每3個月隨訪1次，隨訪方式包括門診及住院復查、電話隨訪等，隨訪截至2017年3月31日。比較不同GLTSCR2蛋白表達者預后情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS21.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗或Fishers確切概率法。生存分析采用Kaplan-Meier法及Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同前列腺組織GLTSCR2蛋白表達比較 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達34例份(75.6%)、癌旁正常組織為23例份(51.1%)、前列腺增生組織為13例份(32.5%)。前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低達率明顯高于癌旁正常組織和前列腺增生組織(χ2分別為5.789、15.881，P均<0.05)，而癌旁正常組織與前列腺增生組織比較差異無統計學意義(χ2=3.004，P>0.05)。

2.2 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達與患者臨床病理參數的關系 見表1。

2.3 前列腺癌組織不同GLTSCR2蛋白表達者生存時間比較 34例前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達者平均生存時間為31.4個月，11例前列腺癌組織GLTSCR2蛋白高表達者平均生存時間為61.2個月。前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達者平均生存時間明顯短于GLTSCR2蛋白高表達者(χ2=5.081，P<0.05)。見圖1。

表1 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達與患者臨床病理參數的關系

圖1 前列腺癌組織不同GLTSCR2蛋白表達者生存曲線

3 討論

PSA是前列腺癌較敏感的血清腫瘤標志物，可用于前列腺癌的早期篩查，但仍有部分患者確診前就錯過了根治性手術的最佳時機，只能采取藥物或手術去勢治療。藥物或手術去勢治療雖然可以明顯延緩前列腺癌進展，但接近90%患者經過15～30個月的雄激素治療后出現雄激素抵抗，引起前列腺癌復發[7]。因此，探討前列腺癌的發病機制并進行干預，對改善患者預后具有重要意義。

GLTSCR2是最新發現的一種細胞核蛋白，可參與細胞增殖、分化、凋亡等多種生物學過程[8,9]。Lee等[10]研究發現，GLTSCR2可抑制細胞周期進展并誘導細胞凋亡，可能作為一種抑癌基因參與腫瘤的發生、發展。Kim等[11]研究發現，敲除小鼠GLTSCR2基因能促進結腸癌細胞增殖。Moon等[12]報道，GLTSCR2低表達與乳腺癌患者瘤體體積和預后不良密切相關。Kim等[13]研究證實，上調GLTSCR2表達可抑制腦膠質瘤細胞侵襲和遷移。但亦有報道認為，下調肺癌A549細胞GLTSCR2表達，可抑制MDM2介導的p53降解途徑，并阻斷細胞周期進展[14]。Zhang等[15]研究亦認為，在不同組織中GLTSCR2參與的信號通路不同，從而使GLTSCR2表現出抑癌和促癌雙重作用。以上研究表明GLTSCR2可能具有組織特異性，對不同組織來源的腫瘤細胞具有不同的生物學功能。既往有研究報道，正常前列腺組織p53蛋白低表達，而前列腺癌組織p53蛋白過表達，其表達變化與腫瘤的侵襲和轉移有關[16]。p53是GLTSCR2調控的重要靶基因，細胞質內GLTSCR2能夠通過抑制MDM2介導的降解途徑促進p53表達，進而參與調控細胞周期阻滯和細胞凋亡等生物學過程[17]。Kalt等[18]研究表明，GLTSCR2能夠通過抑制腫瘤細胞代謝，阻斷腫瘤的發生、發展。然而關于GLTSCR2在前列腺癌組織中的表達及其作用機制相關研究較少。

本研究結果發現，前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達率明顯高于癌旁正常組織和前列腺增生組織，而癌旁正常組織與前列腺增生組織比較差異無統計學意義，說明GLTSCR2蛋白在前列腺癌組織中可能具有抑癌基因作用。本研究還發現，GLTSCR2蛋白低表達與Gleason評分和血清PSA水平有關，提示GLTSCR2蛋白低表達可能參與前列腺癌的發生、發展過程。本研究前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達者生存時間明顯短于GLTSCR2蛋白高表達者，提示GLTSCR2蛋白表達變化可能有助于評估前列腺癌患者預后。

綜上所述，GLTSCR2蛋白在前列腺癌的發生、發展過程中具有抑癌基因作用；前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達越低，患者預后越差。

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