腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及臨床意義

應(yīng)亞君 韓子華 柯 莽

1.浙江省臺(tái)州市腫瘤醫(yī)院病理科，浙江臨海 317500；2.浙江省臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）恩澤醫(yī)院泌尿科，浙江臺(tái)州 318050

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是衡量其惡性程度的主要因素，是引起患者死亡的主要原因之一，其受多基因與多因素的影響與調(diào)控，尤其與多種腫瘤抑制基因的表達(dá)失調(diào)密切相關(guān)[1,2]。TIP30是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，位于人類第11號(hào)染色體短臂端11P15.1上，其主要作用是抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移和生長，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)降失或表達(dá)相對(duì)較弱，但國內(nèi)有關(guān)TIP30在膀胱癌中的表達(dá)報(bào)道較少[3-7]。本文旨在探討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及臨床意義，探討其在膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展中的作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2017年6月我院病理科存檔的膀胱尿路上皮癌蠟塊共50例。納入病例均有完整臨床資料，且經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。其中男38例，女12例；年齡 37～84 歲，平均（67.4±5.9）歲；浸潤性 16 例，非浸潤性34例；初發(fā)32例；復(fù)發(fā)18例。另選取膀胱尿路上皮癌的癌旁組織（距腫瘤緣3～5 cm）30例作為對(duì)照組，其中男23例，女7例；年齡38～80歲，平均（66.7±5.4）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 免疫組化檢測

采用En Vision二步法免疫組化檢測，將石蠟包埋的標(biāo)本連續(xù)4 μm切片，5%羊血清37℃封閉2 h減少非特異性背景，采用檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)，滴加TIP30單克隆一抗工作液4℃孵育過夜，PBS沖洗后加入二抗En Vision試劑室溫下孵育1 h，PBS沖洗，滴加新鮮配置DAB顯色，Mayer蘇木素復(fù)染細(xì)胞核襯染，水洗、烤干、中性樹封片和鏡檢。試劑公司提供的陽性切片作陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。TIP30單克隆抗體、En Vision二步法免疫組化試劑盒（通用型）購買自北京中杉生物公司。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察膀胱尿路上皮癌與癌旁組織中TIP30表達(dá)的差異，并分析膀胱尿路上皮癌組織中TIP30表達(dá)與病理特征關(guān)系。

1.3.1 免疫組化結(jié)果判斷 以胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為TIP30陽性細(xì)胞，陰性對(duì)照組除細(xì)胞核染成藍(lán)色外應(yīng)無棕黃色反應(yīng)物。按照高倍鏡視野下細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞比例綜合評(píng)分，其中陽性細(xì)胞根據(jù)染色強(qiáng)度：無色、淺黃色、棕黃色和棕褐色分別為0、1、2和3分；顯色細(xì)胞比例：陰性、比例≤10%、比例11%～30%、比例31%～60%和比例≥61%分別為0、1、2和3分。上述兩項(xiàng)分值的乘積≥2分判定TIP30表達(dá)（+），否則 TIP30 表達(dá)（-）[8]。

1.3.2 TIP30表達(dá)與病理特征關(guān)系 包括性別、年齡、腫瘤是否復(fù)發(fā)、浸潤深度和病理分級(jí)等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件包，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30基因表達(dá)比較

50例膀胱尿路上皮癌中TIP30表達(dá)陽性17例（34.00%），大部分為淺黃色顆粒，少部分為棕黃色顆粒。30例癌旁組織TIP30表達(dá)陽性28例（93.33%），大部分為棕褐色和棕黃色顆粒，少部分為淺黃色顆粒。膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中TIP30的陽性率低于癌旁組織（χ2=26.82，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表達(dá)與病理特征關(guān)系

膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達(dá)與性別、年齡與腫瘤是否復(fù)發(fā)等病理特征無關(guān)（P>0.05），與浸潤深度和病理分級(jí)等密切相關(guān)（P<0.05）。見表1。

表1 膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達(dá)與病理特征關(guān)系

3 討論

TIP30基因是2007年由國外學(xué)者首先報(bào)道的一種與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因，其蛋白編碼產(chǎn)物是一種分子量為30 kDa的TIP30蛋白[8-10]。大量的報(bào)道顯示，TIP30基因主要通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制血管新生來抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，一方面，TIP30基因是一種轉(zhuǎn)錄輔助因子，具有絲/蘇氨酸激酶活性，可以和 RNA聚合酶Ⅱ最大亞基結(jié)合并磷酸化其C末端的七肽重復(fù)基序，在特定生理病理環(huán)境下調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和血管生成相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[11-14]；另一方面，TIP30基因能夠以 RanG TP非依賴形式直接與Import in β家族成員及核孔蛋白相結(jié)合，抑制核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能，通過抑制核物質(zhì)輸入促進(jìn)細(xì)胞凋亡來發(fā)揮抑癌作用[15-17]。TIP30基因在胃癌、腸癌、黑色素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌等癌中的表達(dá)較弱或無明顯表達(dá)，明顯低于正常的人體組織中的表達(dá)，提示TIP30基因參與了大多數(shù)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移的過程[18]。

膀胱癌是我國尿路系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其中90%以上為膀胱尿路上皮癌，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟的過程，近年來TIP30基因在膀胱癌中的表達(dá)及作用越來越受到臨床的重視。李文華等[19]研究發(fā)現(xiàn)膀胱移行細(xì)胞癌組織中TIP30基因表達(dá)明顯下降，且與發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和浸潤等密切相關(guān)。陜光等[20]研究發(fā)現(xiàn)抑癌基因TIP30基因在膀胱尿路上皮癌中呈低表達(dá)，而在癌旁組織中呈高表達(dá)，與其腫瘤浸潤深度、分化程度和臨床分期密切相關(guān)。我們通過采用免疫組織化學(xué)的方法檢測了膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30表達(dá)的差異，研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中TIP30的陽性率明顯低于癌旁組織。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表達(dá)存在明顯下調(diào)趨勢，其表達(dá)下調(diào)或失表達(dá)極有可能促進(jìn)膀胱尿路上皮癌的發(fā)生和發(fā)展。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達(dá)與浸潤深度和病理分級(jí)等病理特征明顯相關(guān)。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表達(dá)與其惡性程度與浸潤深度呈負(fù)相關(guān)，可能參與其病情的轉(zhuǎn)移和浸潤的過程。臨床上需進(jìn)一步研究TIP30基因與膀胱尿路上皮癌其它生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系及其相互作用機(jī)制，有助于了解膀胱尿路上皮癌發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制，進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療，以期為膀胱癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)[21]。

總之，膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表達(dá)存在明顯下調(diào)趨勢，其表達(dá)下調(diào)或失表達(dá)極有可能促進(jìn)膀胱尿路上皮癌的發(fā)生和發(fā)展，并與其惡性程度與浸潤深度呈負(fù)相關(guān)，參與其病情的轉(zhuǎn)移和浸潤的過程，有望成為膀胱尿路上皮癌基因診斷及靶向治療的新靶點(diǎn)。但本研究的樣本量偏少，且未對(duì)TIP30基因的RNA進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容可能存在一定的偏差。

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