維吾爾藥材石榴花質量標準研究

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新疆維吾爾自治區藥物研究所/新疆維吾爾藥重點實驗室，新疆　烏魯木齊　830004

石榴花為石榴科植物石榴PunicagranatumL.的干燥花瓣，是維吾爾族習用藥材，維語名為阿娜爾、古麗娜。維醫認為其性質二級干寒，具有收斂止瀉，止汗止血的作用，常用于腹瀉日久；外用于治療出血不止，口舌生瘡，脫肛痔瘡，口臭牙疼，皮膚瘙癢[1]。被收載于《衛生部藥品標準·維吾爾藥分冊》(1999年版)，《中華本草·維吾爾藥卷》(2005年版)。研究發現，石榴花中含有酚酸類，黃酮類、揮發油、萜類、葡萄糖、果糖等化學成分，其中沒食子酸含量相對較高[2-3]，具有抗菌、抗病毒、降壓降脂、抗氧化、抗糖尿病、保肝護肝等藥理活性[4-5]。在石榴花鑒別項中，僅有《維吾爾藥分冊》中有關于性狀及顯微鑒別，而無其他水分、灰分、薄層等鑒別相關項。隨著市場對石榴花藥材需求量逐年增加，藥材的質量控制與評價已成為當務之急。研究通過對不同批次石榴花藥材進行薄層，顯微定性鑒別，并對藥材中水分、總灰分、水溶性及醇溶性浸出物進行檢測，根據測定數據，制定相應的限量指標，旨在為維吾爾藥材石榴花的質量標準提供科學試驗依據。

1　儀器與材料

1.1儀器MS105DU型電子天平(METTLER TOLEDO)；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海齊欣科學儀器有限公司)；SXZ-4-10型馬弗爐(北京市永光明醫療儀器有限公司)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CX-31型生物顯微鏡(日本OLYMPUS)；YOKO-ZS型紫外分析攝影儀(武漢藥科新技術開發公司)；CA-1115型冷卻水循環裝置(上海愛朗儀器有限公司)；UPC-I-10T型優普超純水器(四川優普超純科技有限公司)。

1.2材料乙醇(分析純，批號：20170310，天津市河東區紅巖試劑廠)；甲醇(分析純，批號：20160721，天津永晟精細化工有限公司)；乙酸乙酯(分析純，批號：20160228，天津市風船化學試劑科技有限公司)；石油醚(分析純，批號：20160608，天津市河東區紅巖試劑廠)；環己烷(分析純，批號：20100418，天津市福晨化學試劑廠)；甲酸(分析純，批號：20160926，天津市風船化學試劑科技有限公司)；三氯化鐵(分析純，批號：20130609，天津市化學試劑三廠)；甲苯(分析純，批號：20150628，天津市風船化學試劑科技有限公司)；鹽酸(分析純，批號：20170926，北京化工廠)；沒食子酸對照品(分析純，批號：110831-200803，中國藥品生物制品檢定所)；薄層層析硅膠G板(批號20141225，青島海洋化工有限公司)。石榴花藥材實地采集或由藥材公司購買，均經新疆維吾爾自治區藥物研究所何江副研究員鑒定為石榴的干燥花瓣，憑證樣本存放于新疆維吾爾自治區藥物研究所標本室。

2　方法

性狀通過對該藥材外觀、質地、斷面、臭、味、測量等記錄相關數據；水分測定依據《中國藥典》2015年版第四部通則0832水分測定法烘干法進行；灰分測定依據《中國藥典》2015年版第四部通則2302灰分測定法進行；浸出物測定依據《中國藥典》2015年版第四部通則2201浸出物測定法進行；薄層色譜鑒別依據《中國藥典》2015年版第四部通則0502薄層色譜法進行；顯微鑒別依據《中國藥典》2015年版第四部通則2001顯微鑒別法進行。

3　結果

3.1性狀本品多皺縮，有的破碎，完整者展平后呈卵形或卵圓形或，長20～30 mm，寬20～25 mm。花瓣紅色或暗紅色，羽狀網脈。主脈基部寬至先端漸細，頂端圓形，邊緣微波狀，具疏而淺的鈍鋸齒，基部寬碶形或近圓形。薄而質脆，易碎。氣微，味苦澀。

3.2顯微鑒別本品粉末紅棕色。花冠表皮細胞表面呈類多角形或不規則形。壁波狀彎曲，表面有細密彎曲的角質紋理。側面觀外壁向外隆起，呈乳突狀，邊緣微波狀。螺紋導管常見，直徑10～20 μm；網紋導管、梯紋導管偶見。花粉粒呈類圓形或橢圓形，淡黃色或近無色，直徑14～22 μm ，具3孔溝。薄壁細胞類圓形或長圓形。花絲細胞類長方形，壁薄，表面有紋理。

3.3水分、灰分、浸出物測定通過對10批次維吾爾藥材石榴花進行測定，水分測定結果最高為9.36%，最低為6.64%，平均為7.46%，暫定水分不得超過10%。總灰分測定結果最高為14.14%，最低為6.34%，平均為8.54%，暫定總灰分不得超過15%。浸出物測定結果浸出物量最高為65.07%，最低為61%，平均為62.91%，暫定浸出物不得低于55%。

表1　維吾爾藥材石榴花水分、灰分、浸出物測定(%)

3.4薄層鑒別取本品粉末2 g，加無水乙醇30 mL，超聲處理60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL使之溶解，即為供試品溶液。取沒食子酸[3，6-7]作為對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

4　討論

在浸出物條件篩選過程中，選取1批次維吾爾藥材石榴花，采用水和醇分別進行冷浸法和熱浸法測定，測定結果顯示水溶性浸出物浸提過程中熱浸大于冷浸，醇溶性浸出物量遠大于水溶性浸出物量。設置乙醇濃度30%、50%、70%、90%、100%五個濃度梯度，在醇溶性浸出物浸提過程中隨著乙醇濃度的增加其浸出物量反而減少，當乙醇濃度為30%時，其浸出物量最大。冷醇浸提過程中浸出物量在26.1%～55.19%之間，熱醇浸提過程中浸出物量在41.77%～63.04%之間，所以采用30%乙醇對10批次維吾爾藥材石榴花進行熱醇浸提。

薄層鑒別條件篩選過程中，根據文獻選取了綠原酸[8-11]和沒食子酸作為鑒別的對照品溶液，以綠原酸為對照品溶液，以不同的展開劑進行試驗，結果不是很理想，目的斑塊區分較為困難或是模糊不清，分離度較差。以沒食子酸作為對照品溶液，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸與環己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑時，對展開劑的比例進行適當的調整，供試品能基本上都能鑒別出來，與對照品在相應的位置能顯示出相同顏色的斑塊。根據實驗結果，后者作為展開劑時，效果最為理想，所以試驗決定采用沒食子酸作為對照品溶液，環己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)為展開劑，以1%三氯化鐵乙醇溶液作為顯色劑，結果可以滿足實驗的要求。最終，以此薄層條件對10批次維吾爾藥材石榴花進行薄層鑒別研究。

研究對維吾爾藥材石榴花進行了質量標準研究，其水分、灰分、浸出物限量測定，薄層色譜及顯微結構相關定性鑒別研究，其試驗相關數據為維吾爾藥材石榴花的質量標準及評價提供科學試驗依據。

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[4]李海霞, 王釗, 劉延澤. 石榴科植物化學成分及藥理活性研究進展[J]. 中草藥, 2002, 33(8):765-766.

[5]張立華, 孫曉飛, 張艷俠,等. 石榴花化學成分及生物活性研究進展[J]. 山東農業科學, 2009(3):33-35.

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[11]張敏捷, 朱萍, 李玎,等. 蘋果花粉中異鼠李素和綠原酸鑒別及總黃酮測定[J]. 藥物分析雜志, 2016(4):617-623.