兩種葉菜中5種典型手性農藥對映體的超高效液相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)分析方法研究

駱 沖,黃聰靈,朱富偉,謝書越,黃健祥,葉 倩,鄧義才,萬 凱*

(1.廣東省農業科學院農產品公共監測中心，廣東 廣州 510640；2.農業部農產品質量安全檢測與評價重點實驗室，廣東 廣州 510640；3.農業部農產品質量安全風險評估實驗室(廣州)，廣東 廣州 510640)

圖1 5種手性農藥的結構式
Fig.1 Molecular structure of five chiral pesticides

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.2 樣品的前處理

將新鮮的菜心、油麥菜分別用粉碎機粉碎勻漿。稱取粉碎后的樣品10.00 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋5 min，使樣品中的農藥得到充分提取。然后向提取液中加入1.0 g NaCl和2.0 g無水硫酸鎂，渦旋1 min后，3 800 r/min離心5 min，取上層清液1.8 mL置于裝有30 mg PSA粉末和15 mg GCB粉末的2.0 mL離心管中，渦旋混勻1 min ，8 000 r/min離心2 min，取上層清液過0.22 μm 有機濾膜至進樣瓶中，經UPLC-MS/MS 檢測，基質外標法定量分析。

1.3 色譜-質譜條件

色譜條件：色譜柱：CHIRALCEL OD-RH色譜柱(150 mm×4.6 mm，5.0 μm)；柱溫：35 ℃；流動相為2 mmol/L乙酸銨水溶液(A)-乙腈(B)；進樣量：5 μL；梯度洗脫程序：0～10 min，55%～50%B；10～11 min，50%～75%B；11～15 min,75%B；15～15.2 min，75%～55%B；15.2～25 min，55%B。

質譜條件：離子源：電噴霧離子源ESI；加熱模塊：400 ℃；脫溶劑溫度：250 ℃；霧化氣流量：3 L/min；干燥氣流量：10 L/min；檢測方式：多反應監測方式(MRM)，駐留時間均為0.05 s，其他質譜參數見表1。

表1 5種手性農藥的質譜參數Table 1 Mass spectrometric parameters of 5 chiral pesticides

1.4 標準溶液的配制

標準工作溶液：準確移取一定量標準儲備溶液至10.00 mL容量瓶中，用乙腈定容，分別配成0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 mg·L-1的溶劑標準工作液，分別用菜心和油麥菜空白陰性樣品的提取液準確配制相應濃度的2種基質標準溶液。

1.5 實際樣品加標回收實驗

在陰性菜心、油麥菜樣品中進行加標回收實驗，加標水平分別為0.01、0.1、0.5 mg·kg-1，加標24 h后按照“1.2”方法提取凈化，然后在“1.3”條件下上機檢測，每個水平重復6次。同時配制相應濃度的基質標準溶液，采用基質外標法定量分析。

2 結果與討論

2.1 前處理方法的優化

合適的樣品前處理可達到去除樣品中的基體與其他干擾物質、富集目標物、定量轉換等目的。在QuEChERS提取方法中，加入無水硫酸鎂和氯化鈉能夠產生鹽析效應，使基質中親水性成分的溶解度降低，促使溶劑相和水相分離，從而提高提取率。而一些吸附劑的加入會造成部分目標物的損失[26]。本文前處理方法是經過改良的QuEChERS方法，基本原理一致。

2.1.2凈化劑的優化QuEChERS方法的凈化劑為PSA，本實驗所用基質為葉菜，其色素含量較高，而GCB對色素具有很好的吸附作用，因此本實驗選擇PSA及GCB作為菜心提取液的凈化劑，并對其用量分別做了優化。

實驗考察了加入10、20、30、40、50 mg PSA對1.8 mL提取上清液凈化效果的影響。發現隨著PSA量的加大，提取液的顏色逐漸變淺，5種手性農藥的平均回收率增高，當PSA用量為30 mg時，5種手性農藥的回收率為77.9%～99.5%，再加大PSA的用量反而使某些農藥的回收率降低，因此確定PSA粉的用量為30 mg。

固定PSA用量為30 mg，在1.8 mL提取上清液中考察GCB加入量為5、10、15、20、25、30 mg時對凈化效果的影響。結果顯示，GCB對色素具有強大的吸附作用，隨著GCB用量的增大，提取液顏色迅速變淺，在加入30 mg PSA和15 mg GCB的條件下，提取液顏色已基本呈無色透明。但隨著GCB加入量的增大,5種手性農藥的回收率逐漸增高，當GCB用量為15 mg時，回收率基本穩定，GCB用量為20、30 mg時，部分農藥的回收率反而降低，這可能是GCB吸附色素后，繼而吸附目標化合物所致。故本實驗選擇GCB的用量為15 mg。

2.2 流動相的選擇

2.3 標準曲線、相關系數及基質效應

取“1.4”部分配制的對映體系列標準溶液和2種基質標準溶液在UPLC-MS/MS上測定，重復3次，以對映體濃度(x，mg·L-1)為橫坐標，3次進樣提取離子峰平均峰面積(y)為縱坐標，進行曲線擬合，獲得對映體的標準溶液、基質標準曲線方程和相關系數(表2)。結果表明，5種對映體手性農藥在0.005～1.0 mg·L-1質量濃度范圍內呈良好線性，相關系數r2≥0.996 4，以標準曲線的最低檢測濃度為檢出限，得檢出限為0.005 mg·L-1。

表2 5種對映體手性農藥在菜心中的保留時間、回歸方程、相關系數和基質效應Table 2 Retention times，regression equations,correlation coefficients(r2),and matrix effects for five enantionmers of chiral pesticide in flowering cabbage

2.4 加標回收率、相對標準偏差、檢出限及定量下限

對加標樣品按照“1.5”方法處理，每個水平重復測定6次，同時配制相應濃度的基質標準溶液，基質外標法定量，加標回收率與相對標準偏差(RSD)結果見表3。結果表明：5種手性農藥在兩種葉菜中的平均回收率為68.8%～104%，RSD為1.0%～13.7%；以最低添加濃度計算方法的定量下限，以標準曲線最低濃度為方法檢出限，得5種手性農藥在菜心、油麥菜基質中的定量下限均為0.01 mg·kg-1，檢出限均為0.005 mg·kg-1。

表3 不同基質中5種手性對映體的加標回收率與相對標準偏差Table 3 Recoveries and relative standard deviation of five kinds of chiral enantiomers in different matrixs

圖2 菜心添加樣品的提取離子色譜圖Fig.2 Chromatogram of Chinese flowering cabbage(0.1 mg·kg-1 for each enantiomer)a-1.metalaxy-1；a-2.metalaxy-2；b-1.paclobutrazol-1；b-2.paclobutrazol-2；c-1.triadimefon-1；c-2.triadimefon-2；d-1. myclobutanil-1；d-2.myclobutanil-2；.e-1.famoxadone-1；.e-2 famoxadone-1

2.5 分離度

2.6 實際樣品的檢測

表4 甲霜靈在葉菜中的檢出結果Table 4 Determination results of metalaxyl in leaf vegetables

3 結 論

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