甲硝唑、克霉唑對精斑混合斑前列腺特異抗原檢驗的影響

劉振平，潘之侃，翟仙敦，傅燕芳，吳微微

1962年，Garaway首先提出某些治療藥物可以影響體液中多種成分濃度的檢測，這個問題受到了越來越多生化學家、檢驗工作者及臨床醫師的廣泛關注。對檢驗結果有影響的藥物，目前已達40 000多種[1]。

前列腺特異抗原(prostate-specific antigen,PSA)檢驗是法醫精斑確證試驗的首選方法。性侵案件中，由于受害人的隨機性，不可避免存在受害人有陰道用藥情況。為驗證這些藥物是否對PSA檢驗結果產生影響，實驗室在已知PSA濃度的精斑混合液中加入常用陰道藥物甲硝唑、克霉唑，觀察加藥前后PSA測量值有無變化，現報道如下。

1　材料與方法

1.1藥物分別將藥物粉碎，使用天平稱重，在0.01～0.08 g之間設置5個梯度，置于eppendorf管中備用，本次實驗所用藥物主要技術參數，摘自藥物使用說明，見表1。

表1　兩種實驗用藥物一般情況

1.2儀器全自動化學發光免疫分析儀(雅培i2000，美國)；天平(賽多利斯CP225D，德國)；抗體(雅培公司，試劑批號：64214FN00)；PSA金標試劑條(biowin，符合GA766-2008)

1.3已知濃度精斑制備日常受理案件中已知人精斑混合斑，超純水稀釋后使用化學發光免疫分析儀對PSA定量，終濃度分別為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1兩種。

1.4方法在裝有不同量的克霉唑、甲硝唑粉劑的eppendorf管中，分別加入濃度為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1的PSA稀釋液500 μL，藥物終濃度為0.022 6～0.153 2 g·mL-1，37 ℃孵育30 min，期間每隔5 min震蕩混勻。離心取上清200 μL，化學發光免疫分析儀定量檢測；同時進行金標試劑條PSA檢驗。

2　結果

已知濃度的PSA溶液加入藥物后檢測，克霉唑最低濃度為0.024 6 g·mL-1，最高濃度為0.152 4 g·mL-1；甲硝唑最低濃度為0.022 6 g·mL-1，最高濃度為0.153 2 g·mL-1。PSA定量值明顯下降，且下降值和加入的藥物量呈正相關，兩種藥物相比，克霉唑下降更明顯。金標法PSA檢驗與定量檢驗結果下降趨勢一致。 PSA定量值為7.399～8.141 ng·mL-1時，金標試劑條檢驗為弱陽性，PSA定量值為4.790 ng·mL-1時，金標試劑條表現為陰性，見表2。

表2　已知精斑與藥物混合后PSA檢驗結果

3　討論

PSA系成熟的男性前列腺及尿道周圍腺體上皮細胞產生的絲氨酸蛋白酶，也稱為E1蛋白、γ-精漿蛋白、P30、PA等[2]，具有高度的器官特異性和種屬特異性，能正確區別動物精斑與人類精斑[3]，尤其適用于輸精管結扎術后及精子缺乏個體的精斑檢驗[4-5]。因此，對混合斑進行PSA檢驗為大多數法醫物證實驗室精斑確證實驗的首選方法，并可根據PSA檢測結果制定下一步的檢驗方案[6]。

PSA試驗陰性，表示待測樣品中不存在精斑[3]。但在法醫實踐中，PSA試劑條陰性卻檢出男性DNA分型的現象時有報道[7-11]，楊思思等報道分析水中尸體PSA試劑條陰性但檢出男性精子DNA分型的原因考慮為PSA水中溶解、腐敗[8]，王智等考慮為被女性陰道內的蛋白酶破壞[11]，并未對形成原因做進一步實驗性驗證。作者所在實驗室也存在上述現象，通過對本地案件回訪發現，部分受害人案發前后有陰道用藥的行為。

為進一步驗證陰道用藥與PSA測量值的相關性，本研究采用將藥物加入到已知濃度的精斑中，觀察加藥前后PSA定量值是否有變化。藥物選用甲硝唑、克霉唑(主要是因為陰道炎是婦科陰道類疾病中最為常見的疾病[12]，對上述疾病治療通常采用甲硝唑、替硝唑類栓劑、克霉唑片劑等類型藥物抗治療)。PSA定量檢測濃度在0.001～1 000 ng·mL-1均能正確進行定量。為便于觀察藥物作用前后定量結果的不同和驗證金標PSA試劑條的靈敏度，將已知人精斑混合斑稀釋成高低兩個濃度，分別為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1兩種。藥物使用量在0.01～0.08 g之間，明顯低于說明書中的單次用藥量。試驗過程則模擬陰道用藥溶解后直接與PSA接觸的方式，將藥物粉碎后直接加入到含有人PSA的精斑浸泡液中，37 ℃孵育30 min，期間適時對混合液進行搖勻。

本研究結果，甲硝唑、克霉唑可以影響精斑混合斑中PSA濃度的檢測，加入藥物后，定量檢測值明顯下降。分析原因可能為加入的藥物使前列腺特異抗原結構或者帶有熒光標記的抗體發生結構改變，使得帶有熒光標記的抗體與抗原不能結合，定量值下降；PSA定量值為7.399～8.141 ng·mL-1時金標試劑為弱陽性，PSA定量值為4.790 ng·mL-1時金標試劑為陰性，分析認為金標試劑條靈敏度約5 ng·mL-1。

本實驗中，定量值為8.737 ng·mL-1的低濃度的PSA溶液，加入實驗藥物后PSA金標試劑條均表現為陰性，但定量法均能夠檢出。在本實驗室實際工作中，在對1例未知名女尸體陰道拭子進行檢驗時金標試劑條陰性，卻檢出微量精子DNA分型，后通過定量補測PSA濃度為0.491 ng·mL-1。因此，在法醫實踐中，使用金標法試劑條檢驗精斑時，如存在藥物等影響PSA的因素，檢驗時應采取各種措施提高檢材浸泡液中的PSA濃度，如增加檢材量、減少浸泡液體積、延長浸泡時間等，避免PSA濃度低于試劑條靈敏度造成陰性而漏檢。為了更客觀、真實地描述檢材中的PSA量，有能力的實驗室應引進準確性更高的現代化定量檢測設備，出具鑒定文書時，同時對檢測方法的靈敏度進行描述。

此外，實驗室還對市售婦科洗液婦炎潔與已知濃度的PSA溶液進行混合后定量檢測，結果顯示也可導致定量值下降，考慮到洗液大部分為中藥配方且成分復雜，其對PSA的影響實驗室將進一步研究并再做報道。

綜上，陰道藥物甲硝唑、克霉唑可使精斑混合斑中的PSA檢測值下降，金標試劑條表現為陰性，在法醫實踐中應當引起重視。對強奸案件進行受理檢驗時，除詳細了解案情、作案經過外，還應對受害人的身體狀況進行了解，詳細詢問受害人案發前后有無婦科用藥、具體用藥種類、具體洗液類型等，以免漏檢，并為案件的偵查起訴提供更多信息。

參考文獻：

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