一種醫用消毒超聲耦合劑對五種多重耐藥菌的殺滅效果

李 棟, 李曼玉, 郭亞萍, 楊 志

(1 慶陽市中醫院, 甘肅 慶陽 745000; 2 甘南藏族自治州舟曲縣醫院, 甘肅 甘南 746300; 3 山東瑞泰奇醫療器械有限公司, 山東 德州 253000 )

近年來，多重耐藥菌問題已成為臨床抗感染中日益突出的問題，如何減緩多重耐藥菌的產生，阻斷多重耐藥菌的傳播已引起政府、社會尤其是醫學界的廣泛關注[1]。醫療衛生機構在診療操作過程中的每一個環節，因預防消毒不當，均可導致多重耐藥菌的傳播[2-5]。在超聲診斷科室，由于超聲探頭與人體表皮接觸，至今為止，絕大多數醫療機構在進行超聲診斷時仍采用普通超聲耦合劑作為超聲探頭與人體表皮之間的填充介質，普通超聲耦合劑無消毒或抑菌作用，更甚者其衛生指標在應用一定時間后也超出了合理的衛生范圍[3-4]，攜帶菌量觸目驚心，成為了多重耐藥菌傳播的通道。現行的醫用超聲耦合劑行業標準為YY 0299-2008《醫用超聲耦合劑》，該標準中未對耦合劑進行衛生學指標的要求，也未根據不同風險操作對耦合劑進行分類，存在極大的安全隱患。

關于超聲探頭或超聲耦合劑在超聲診療過程中引起的感染事件[5-6]，諸如術前腹部超聲檢查引起孕婦剖宮產術后手術部位感染事件，新生兒接受超聲檢查后感染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)而引發嚴重的膿皰病事件，因耦合劑污染加拿大某兒童機構10年持續暴發嚴重的洋蔥伯克霍爾德菌感染事件，耦合劑污染銅綠假單胞菌導致醫院感染事件等在國內外均有報道。由此可見，隨著醫用超聲耦合劑在醫學診斷中應用的增加，體外超聲探頭及耦合劑的潛在醫院感染傳播風險不容小覷。

切斷超聲探頭與人體皮膚黏膜之間病原菌傳播的通道，是降低超聲診療過程中多重耐藥菌感染的必要干預措施。采用中、低效消毒劑對超聲探頭進行消毒或采用具有消毒作用的超聲耦合劑替代普通醫用超聲耦合劑作為介質是目前被廣泛推廣的干預措施[6]。因此，選取一種以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分的醫用消毒超聲耦合劑，于2016年3月—2017年5月對五種多重耐藥菌進行載體定量殺滅試驗，研究醫用消毒超聲耦合劑對多重耐藥菌的殺滅效果，為臨床科學合理選用超聲耦合劑提供參考，現將試驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗樣品 醫用消毒超聲耦合劑(批號：20170305)：主要由三氯羥基二苯醚、丙二醇、丙三醇、卡波姆、三乙醇胺等組成，其中三氯羥基二苯醚的含量為2.98 g/L，該試樣由山東瑞泰奇醫療器械有限公司提供。

1.1.2 試驗菌株 菌株來源為臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌(MDR-AB)、MRSA、多重耐藥銅綠假單胞菌(MDR-PA)、耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌(CRKP)、產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌(ESBLs-EC)。依據《全國臨床檢驗操作規程》進行標本的細菌培養與分離，通過微生物鑒定藥敏分析系統及配套藥敏試條進行藥敏試驗，藥敏分析系統為法國生物梅里埃的Vitek Compact。依據2015年美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)規定的標準[7]進行抗菌藥物敏感性判斷，質控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853。

1.1.3 中和劑 C/G肉湯(含1%胰蛋白+0.5%氯化鈉+10%吐溫80+3%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉+3%組氨酸)、1/4倍C/G肉湯。

1.2 殺菌試驗方法[8]

1.2.1 菌片制備 將新華濾紙裁剪成10 mm×10 mm 的正方形，壓力蒸氣滅菌后備用。取各試驗菌純化分離的單個典型菌落接種營養瓊脂培養基斜面，于37℃培養18～24 h。分別以胰蛋白胨生理鹽水(TPS) 洗下菌苔并稀釋成適當濃度的菌液，制成菌量為2×108～1×109CFU/mL的菌懸液，加入等量的0.3%牛血清白蛋白配制成試驗用菌懸液，菌液濃度為 1×108～5×108CFU/mL。將經滅菌的載體片平鋪于無菌平皿內，用滴染法染菌，置37℃恒溫培養箱干燥備用。

1.2.2 中和劑鑒定試驗 選取MRSA為試驗菌，依據《消毒技術規范》(2002版)設為6組，按載體定量殺滅試驗方法進行中和劑鑒定試驗。作用時間：樣品原液、中和劑C/G肉湯、第1、2組消毒作用時間為0.5 min；1/4倍樣品原液，中和劑1/4倍C/G肉湯，第1、2組消毒作用時間為1.5 min。

1.2.3 載體定量殺滅試驗 取無菌平皿，按每片 5.0 mL的量，吸取試驗樣品原液注入平皿中，將盛有消毒劑平皿置(20±1)℃水浴 5 min，用無菌鑷子取預先制備的菌片3片分別放入平皿中，并使之浸沒于試驗樣品中，置于(20±1)℃恒溫水浴箱內，作用至預定時間。用無菌鑷子將菌片取出分別移入含5.0 mL 中和劑的試管中。將試管在手掌上振打80次，中和作用10 min。混勻后，吸取1.0 mL 直接接種平皿，每管接種 2 個平皿，測定活菌數。另取一平皿，注入10.0 mL稀釋液代替消毒劑，放入2片菌片，作為陽性對照組。試驗重復3 次。

2 結果

2.1 中和劑鑒定試驗結果 結果表明，用含1%胰蛋白+0.5%氯化鈉+10%吐溫80+3%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉+3%組氨酸C/G肉湯作為中和劑，可有效中和醫用消毒超聲耦合劑原液殘留的殺菌成分對試驗菌的殺滅作用，該中和劑及其中和產物對試驗菌和培養基均無影響。1/4倍C/G肉湯作為中和劑，可有效中和1/4倍醫用消毒超聲耦合劑原液殘留的殺菌成分對試驗菌的殺滅作用，該中和劑及其中和產物對試驗菌和培養基均無影響。見表1。

表1 消毒超聲耦合劑中和劑鑒定試驗結果Table 1 Neutralizer identification test result of disinfection ultrasonic coupling agent

2.2 載體定量殺滅試驗結果 結果表明，該醫用消毒超聲耦合劑原液作用1.5、3.0、4.5 min，對MDR-AB、MRSA、MDR-PA、CRKP、ESBLs-EC的載體菌片殺滅對數值均>3.0。見表2。

表2 消毒超聲耦合劑對多重耐藥菌載體定量殺滅試驗結果Table 2 Carrier quantitative germicidal test result of disinfection ultrasonic coupling agent on the killing of MDROs

注：陰性對照無菌生長

3 討論

醫用超聲診斷已成為臨床使用最頻繁的疾病診斷方法，在超聲引導下的微創穿刺手術也得到了廣泛推廣。在超聲診療過程中，超聲探頭與超聲耦合劑直接接觸患者皮膚、黏膜或開放性的創口，存在極大的交叉感染風險，為此，多所醫療衛生機構對超聲探頭及醫用超聲耦合劑進行了衛生質量調查，調查結果不容樂觀。有調查研究[9]顯示，未經消毒的超聲探頭帶菌率為100%。有文獻[10]研究顯示，超聲探頭上檢出的多數菌株為多重耐藥菌株。

多重耐藥菌引起的感染是一個國際性問題[11]，近五年來，在國內云南、山東、湖南、湖北、重慶、四川、新疆等不同省市地區的多所研究機構對多重耐藥菌的臨床分布特征、危險因素及感染監測情況進行了分析，研究[12-13]顯示，銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌五種菌株中多重耐藥菌在檢出率及分布范圍上均位列前十，甚至前五。因此，本研究選擇此五類多重耐藥菌作為試驗菌株。

醫用超聲耦合劑是在超聲診斷或治療操作中，充填或涂敷于皮膚與探頭(或治療頭)輻射面之間，用于透射聲波的中介媒質，改善探頭與患者皮膚之間的超聲耦合效果，所以，醫用超聲耦合劑的衛生質量及殺菌性直接影響超聲探頭與人體接觸面的衛生質量狀況。消毒型醫用超聲耦合劑對多重耐藥菌的載體定量殺滅試驗，殺滅對數值>3.0，達到2002年版《消毒技術規范》中對消毒劑的消毒作用要求，說明其在超聲診療中可代替消毒劑使用，能減少醫務人員的操作程序，提高操作效率，并可降低因普通耦合劑使用引起的交叉感染。

近年來，關于消毒型醫用超聲耦合劑的實驗室殺菌性能及臨床使用消毒效果均有報道，其中一種以植物源松油醇為殺菌成分的消毒耦合劑殺菌試驗顯示，原液作用1.5 min，對載體上大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的平均殺滅對數值均>3.0[14]。使用消毒型醫用超聲耦合劑與非消毒型醫用超聲耦合劑用于超聲診斷檢查，臨床對照試驗結果顯示，檢查前、后探頭和受檢部位皮膚細菌數差異有統計學意義[15]，但關于消毒型醫用超聲耦合劑對多重耐藥菌的殺滅效果研究目前很少有公開報道。因此，進行了一種醫用消毒超聲耦合劑對五種多重耐藥菌的殺滅效果的實驗室研究。

本研究所采用的醫用消毒超聲耦合劑是以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分，三氯羥基二苯醚在皮膚、黏膜消毒及衛生手消毒中有廣泛應用，該化合物對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、酵母菌屬及病毒均有殺滅或抑制作用。研究顯示，試驗所采用的以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分的醫用消毒超聲耦合劑原液作用1.5、3.0、4.5 min，對MDR-AB、MRSA、MDR-PA、CRKP、ESBLs-EC五種常見耐藥菌均可達消毒的要求。

[1] 黃勛, 鄧子德, 倪語星, 等.多重耐藥菌醫院感染預防與控制中國專家共識[J].中國感染控制雜志, 2015, 14(1):1-9.

[2] 唐文, 陶瑾, 張愛紅.普外科及乳腺科多藥耐藥菌感染調查與預防控制[J].中華醫院感染學雜志, 2014, 24(15):3802-3803,3851.

[3] 沈芃, 費春楠, 劉軍, 等.醫院超聲探頭及耦合劑帶菌狀況調查[J].中國消毒學雜志, 2012, 29(4) :290-291.

[4] 談智, 孫巍, 陳越英, 等.醫用超聲耦合劑衛生質量狀況調查[J].中國消毒學雜志, 2014, 31(6):574-576,579.

[5] Weist K, Wendt C, Petersen LR, et al. An outbreak of pyodermas among neonates caused by ultrasound gel contaminated with methicillin-susceptibleStaphylococcusaureus[J]. Infect Control Hosp Epidemiol, 2000, 21(12): 761-764．

[6] 劉希茹, 張流波.醫用超聲診療過程中的衛生現況及消毒進展[J].中國消毒學雜志, 2017, 34(5):468-472.

[7] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance stand-ards for antimicrobial susceptibility testing，twenty-fifth informational supplement[S]. PA: CLSI， 2015.

[8] 中華人民共和國衛生部.消毒技術規范[S].北京, 2002.

[9] 李術慧, 刑美卿, 孫麗麗.B超探頭微生物監測及預防醫院感染對策[J].中華醫院感染學雜志, 2004, 14(9):1038.

[10] 劉黎明, 戴丹, 胡東輝.體外超聲探頭院內微生物污染的流行病學分布情況分析[J].現代預防醫學, 2015, 42(12):2273-2275.

[11] Rodriguez-Villalobos H，Glupczynski Y. Emergence and dissemination of multi-resistant Gram negative Enterobacteriaceae: lessons to be learnt from local and national surveillance programs in Belgium[J]. Acta Clin Belg, 2015, 70(1): 1-10.

[12] 王錦, 黃梅, 王虹.多重耐藥菌的臨床分布特征和危險因素分析[J].中國衛生檢驗雜志, 2014, 24(24):3622-3624.

[13] 賈雪芝, 孔焱, 李巖, 等.某院多重耐藥菌分布與耐藥性分析[J].國際檢驗醫學雜志, 2017, 38(4):560-562.

[14] 鞠方濤, 王秋紅, 崔滿春, 等.一種醫用超聲耦合劑消毒凝膠殺菌效果和毒性觀察[J].中國消毒學雜志, 2013, 30 (4):303-305,308.

[15] 董冬梅, 楊德春, 魯啟英, 等.殺菌型醫用超聲耦合劑消毒殺菌效果的觀察[J].中華醫院感染學雜志, 2011, 21(11):2281-2282.