注射用葡萄糖酸依諾沙星含量測定的探討

王和協(xié) 董幫興

（安徽省安慶市食品藥品檢驗(yàn)中心 安徽 安慶 246000）

葡萄糖酸依諾沙星為第三代喹諾酮類藥物。臨床主要用于對其敏感的革蘭陰性菌和陽性菌引起的感染，也可用于軟組織感染。文獻(xiàn)[1]中，采用紫外分光光度法測定[2]含量；有關(guān)依諾沙星濃度測定的方法國內(nèi)、外都有報(bào)道，有采用LC/MS/MS法[3]、微透析法[3]，本文以甲醇為溶劑，HPLC[4]法測定含量；不但準(zhǔn)確快速，而且與紫外分光光度法比較，結(jié)果沒有顯著性差異。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

MODEL500型高效液相色譜儀，F(xiàn)A1004N電子天平

1.2 試藥

注射用葡萄糖酸依諾沙星規(guī)格：0.1g，批號：0812011，0812012，0812013)，依諾沙星對照品(批號：0453-9901，純度為91.1%，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇為色譜純，枸櫞酸為化學(xué)純。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津VP-ODS（4.6mm×250mm，5um），方法1：流動相為1.1%枸櫞酸（三乙胺調(diào)節(jié)pH3.5）-甲醇（1:1）；流速為1mL/min-1，進(jìn)樣量為20L，檢測波長254nm。

2.2 對照品溶液的備制取依諾沙星對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1mL中含依諾沙星30ug的溶液，即得。圖譜見a

2.3 供試品溶液的備制精密稱取本品適量，加流動相制成每1mL中含依諾沙星30ug的溶液，即得。圖譜見b 5.98min5.98min

2.4 線性關(guān)系與回歸方程

精密稱取依諾沙星對照品約13.2mg于200mL的量瓶中，加流動相稀釋定容。分別移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL于10mL的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，依方法2.1的色譜條件進(jìn)樣20L，以色譜峰面積（385128.406，701734.375，1022143.500，1396222.500，1701711.000）對進(jìn)樣濃度ug/ml進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=55460.88855X+43091.9622999（r-O.9995）。實(shí)驗(yàn)表明依諾沙星在6ug·mL-1～30ug·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 檢測限

取依諾沙星對照品溶液6ug·mL-1，用流動相稀釋成一系列從高到低濃度的梯度溶液，以信噪比3:1，依諾沙星的最小檢測限為 0.6ug·mL-1。

2.6 進(jìn)樣重復(fù)性考察取含量測定項(xiàng)下供試品溶液，精密量取20uL注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，計(jì)算RSD為0.51%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.9項(xiàng)下的溶液分別于0h，2h，4h，6h，8h，12h進(jìn)樣20uL，記錄峰面積。結(jié)果表明，含量測定項(xiàng)下的供試品溶液于12h內(nèi)依諾沙星主峰面積未見明顯變化（RSD為0.79%），供試品溶液在12h內(nèi)未見新雜質(zhì)產(chǎn)生，可見兩溶液在12h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取相當(dāng)于30mg（32.9mg）依諾沙星的樣品于100mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度。各吸取1mL于9個10mL的量瓶中，每3個量瓶為一組。低、中、高組分別加入適量對照品溶解稀釋使之成為含依諾沙星約80，100和120濃度的溶液，以外標(biāo)法計(jì)算的平均回收率為99.6，RSD為1.0，見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

2.9 樣品含量測定結(jié)果

取樣品適量加流動相溶解并定量稀釋至每1mL約含30ug依諾沙星的溶液，流動相系統(tǒng)中進(jìn)樣。同法測定，取批號0812011樣品5份，照2.5項(xiàng)下方法，測得樣品含依諾沙星分別為標(biāo)示量的99.2%，98.3%，98.9%，97.7%和100.1%，RSD為0.9%，重復(fù)性良好。分別取三批樣品用紫外分光光度法與HPLC法測定結(jié)果見表2。

表2 紫外分光光度法與HPLC法的比較（%，n=3）

3.討論

3.1 相對于注射用葡萄糖酸依諾沙星原有國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中的紫外分光光度法測定含量，本文探討了HPLC法測定含量測定注射用葡萄糖酸依諾沙星的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果都較令人滿意。經(jīng)過調(diào)整甲醇和枸櫞酸溶液的比例，本文找到了以甲醇-1.1%枸櫞酸溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH3．5）（1:1）為流動相的系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)表明該色譜系統(tǒng)能在較短的分析時間內(nèi)得到較完美的色譜峰，為今后用HPLC法測定其含量提供了一個較好的參考方法。

3.2 本文試驗(yàn)參考依諾沙星有關(guān)物質(zhì)測定項(xiàng)下的波長254nm，省去了確定測定波長步驟，并且使測定有關(guān)物質(zhì)與含量項(xiàng)下的流動相統(tǒng)一，省時，省力。

[1]中國藥典委員會.中國藥典（二部）[S].2015年版,北京化學(xué)工業(yè)出版社,2015.

[2]周虹.LC/MS/MS法同時測定食品中喹諾酮類藥物[J].口岸衛(wèi)生控制,2005,10.

[3]劉志東.微滲析技術(shù)研究依諾沙星眼用緩釋凝膠劑兔眼內(nèi)藥動學(xué)[J].中國新藥雜志,2005.

[4]譚志榮，高效液相色譜法檢測生物樣品中喹諾酮類藥物的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2006.