一起β型溶血性鏈球菌引起食物中毒的實驗室檢測

黃志勇

（四川省成都市龍泉驛區(qū)疾病預(yù)防控制中心 四川 成都 610100）

2017年4月27 日11時，中心接到某鎮(zhèn)衛(wèi)生院電話報告，該院自4月27日10:00左右起，陸續(xù)接診了7例患者，均有腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等癥狀，有共同就餐史，疑似細(xì)菌性食物中毒，中心立即派出應(yīng)急小組赴現(xiàn)場調(diào)查、采樣，現(xiàn)將實驗室檢測工作報告如下。

1.材料和方法

1.1 試劑與器材

普通營養(yǎng)瓊脂平皿、改良Y瓊脂平皿、EMB、MYP、SS、血平板，志賀菌屬、改良科瑪嘉菌屬、金黃色葡萄球菌、李斯特菌等顯色培養(yǎng)基，哥倫比亞血瓊脂平板和 TSB 增菌液、普通營養(yǎng)瓊脂桿菌肽藥敏紙片、致病性大腸桿菌診斷血清、革蘭氏染液、顯微鏡、恒溫生化培養(yǎng)箱。

1.2 樣品來源

廚師和患者肛拭子8份，保存于Cary-Blair 運送培養(yǎng)基中送檢；7份剩余食品及2份患者嘔吐物樣品，低溫送檢；6份廚房用具涂抹樣，保存于3mL生理鹽水中送檢。除剩余食品樣品外，所有樣品均采集平行樣。

1.3 方法[1]

嘔吐物、廚師肛拭子及廚師手廚房用具涂抹樣，食品、廚房用具依據(jù)《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗》（GB 4789）、《細(xì)菌性腹瀉臨床實驗室診斷操作指南》（WS/T498-2017）進(jìn)行檢測。

2.結(jié)果分析

2.1 增菌分離培養(yǎng)結(jié)果[2]

按無菌操作稱取剩余食品樣品25g加入盛有225mLTSB的均質(zhì)袋中，以8000r/min 均質(zhì)2min，36℃培養(yǎng)24h。將各樣品接種于普通營養(yǎng)瓊脂平皿、改良Y瓊脂平皿、EMB、MYP、SS、血平板，志賀菌屬、改良科瑪嘉菌屬、金黃色葡萄球菌、李斯特菌等顯色培養(yǎng)基，改良Y瓊脂平皿置于26℃培養(yǎng)，其余置于36℃培養(yǎng)。自18h起持續(xù)觀察，培養(yǎng)23h時，發(fā)現(xiàn)在1份嘔吐物樣品的血平板上有溶血環(huán)小菌落，該菌落周圍透明、針尖樣，繼續(xù)觀察至29h，在1份食品樣品（牛肉）血平板上也發(fā)現(xiàn)周圍透明、針尖樣溶血環(huán)菌落，該菌落生長緩慢，繼續(xù)培養(yǎng)觀察至約40h，此菌落生長為圓形、邊緣整齊、界限分明、灰白色、半透明的菌落，有透明溶血環(huán)2～3mm，挑取可該疑菌做血平板純培養(yǎng)。

2.2 分純培養(yǎng)結(jié)果

將11株可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和TSB增菌液，36℃培養(yǎng)18h，肉湯液變澄清，試管底部有顆粒狀沉淀，搖動試管沉淀成絮狀。培養(yǎng)48h后排除金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、沙門菌、志賀菌、變形桿菌、致瀉大腸埃希菌、李斯特菌、蠟樣芽孢桿菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森菌。

2.3 鑒定結(jié)果

挑取可疑菌落革蘭氏染色鏡檢，鏡檢結(jié)果為短鏈狀排列球菌。然后進(jìn)行觸酶試驗、氧化酶試驗、鏈激酶試驗、桿菌肽抑制試驗，同時做陽性和陰性對照試驗，可疑菌落除觸酶試驗陰性外，鏈激酶試驗、氧化酶試驗、桿菌肽抑制試驗均為陽性。結(jié)果表。

表 樣品檢驗結(jié)果一覽表

2.4 血清學(xué)實驗結(jié)果

8例患者血清學(xué)凝集試驗，恢復(fù)期血清平均滴度相對急性期血清平均滴度，呈8.2倍增長。一般認(rèn)為雙份血清呈4倍增長既有意義。

綜合以上試驗結(jié)果：1名廚師和7名患者的肛拭子、2名患者嘔吐物、1份剩余食物，檢出β型溶血性鏈球菌。

3.討論及建議

3.1 嚴(yán)控致病菌

溶血性鏈球菌廣泛存在于水、空氣、糞便等環(huán)境樣品以及人和動物的口、鼻、咽喉中，可通過空氣飛沫、直接接觸傳播或通過黏膜和皮膚傷口感染，被污染肉、奶、蛋等食品及其制品也會對人進(jìn)行感染。人畜化膿性感染部位、上呼吸道感染患者常成為食品的污染源。溶血性鏈球菌通常污染食品途徑有3條:第一，食品加工前就已帶菌；第二食品加工或銷售中造成污染；第三熟食制品包裝不嚴(yán)造成污染。本次食物中毒發(fā)生在某小公司，由于食堂工作人員短缺，臨時外借1名廚師，該廚師在有腹瀉的情況下，沒有拒絕邀請，而是帶病堅持工作，遂導(dǎo)致此次食物污染中毒事件的發(fā)生[3]。因此建議：第一食品安全監(jiān)管部門加強對公司內(nèi)部食堂食品衛(wèi)生監(jiān)管力度，提高經(jīng)營者的食品安全意識。第二食品安全監(jiān)管部門責(zé)令該公司食堂對污染食品進(jìn)行無害化處理，并清洗消毒加工場所，改進(jìn)加工工藝，維修或更換生產(chǎn)設(shè)備。第三食品安全監(jiān)管部門和衛(wèi)生部門聯(lián)合組織，通過群眾喜聞樂見的方式，廣泛開展食品安全健康教育活動，提高群眾食品安全意識和防病知識。

3.2 提高檢測能力

對于傳染病和細(xì)菌性食物中毒等疫情事件，病原微生物的常規(guī)國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，過程繁瑣、周期較長，如致病菌的檢測要經(jīng)過增菌、分離、鑒定等步驟，通常需要4～5天；而病毒的檢測往往要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)這一個時間過程，這樣分離鑒定至少需要大約3周或更長時間。這樣疫情就得不到及時有效控制，就會造成老百姓經(jīng)濟和健康利益受損，也嚴(yán)重影響政府及相關(guān)部門公信力[4]。近年來隨著聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)在衛(wèi)生檢驗領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，實時熒光定量PCR檢測法已經(jīng)成為檢測病源微生物快速有效的試驗方法，也逐漸成為傳染病及細(xì)菌性食物中毒等疫情最重要的分離鑒定技術(shù)手段，眾所周知，該方法具有靈敏、特異、簡單、快速等特點，在農(nóng)、林、牧、醫(yī)等各領(lǐng)域得到充分的應(yīng)用和發(fā)展； 特別是在應(yīng)對傳染病或細(xì)菌性食物中毒疫情事件中，該技術(shù)能快速、準(zhǔn)確地找到致病菌，為有效控制疫情，提供強有力的技術(shù)支撐。此次事件發(fā)生正趕上中心唯一的PCR檢測儀維修保養(yǎng)期，致病菌分離鑒定全程采用傳統(tǒng)方法，包括培養(yǎng)法、血清學(xué)分析法等，凸顯檢測方法步驟繁瑣和費時費力，該事件同時說明基層疾控中心擁有多臺PCR檢測儀的必要性。

[1]GB 4789．食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗[S].

[2]程小迎,張梅.乙型溶血性鏈球菌食物中毒的實驗室檢測[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2015 ,27(9):968-969.

[3]茍偉民.一起乙型溶血性鏈球菌引起的食物中毒結(jié)果分析[J].中國實用醫(yī)藥,2011(6 )25 :267.

[4]郭丹桂，許少洪.實時熒光定量PC R 技術(shù)在疫情和食物中毒檢測中的應(yīng)用[J].職業(yè)與健康，2013,29(21):2857-2858.