急性腦出血患者血腫周圍組織IL-17與NF-κB p65的表達

任 鑫

赤壁市人民醫院腦外科，湖北 赤壁 437300

急性腦出血是臨床中較為常見的顱內疾病，對患者的健康安全造成嚴重威脅[1]。研究指出，在組織損傷及炎癥反應中有諸多機制參與該過程[2]。IL-17是與自身免疫疾病密切相關的細胞活性因子，其可激活下游NF-κB p65因子而發揮生物學活性，在疾病的發生及發展過程中發揮極其重要的作用[3]。IL-17/NF-κB信號通路廣泛存在于體內多種細胞中，參與諸多疾病的病理性變化過程[4]。本研究對急性腦出血患者血腫周圍組織中IL-17和NF-κB p65表達水平進行分析，探討IL-17/NF-κB信號通路發揮的生物學活性。

1 資料與方法

1．1一般資料經我院倫理委員會批準，選取赤壁市人民醫院神經外科2014-03—2015-09收治的48例急性腦出血患者(圖1)，依照手術取材時間不同分為4組，分別為<6 h組、6～24 h組、>24～72 h組、>72 h組，每組12例。將血腫病灶區1 cm左右的腦組織作為實驗檢材，另取6例遠離血腫病灶區的腦組織作為對照組。<6 h組男7例，女5例，年齡(68.3±13.2)歲；6～24 h組中男8例，女4例，年齡(69.2±14.2)歲；>24～72 h組男7例，女5例，年齡(67.3±11.2)歲；>72 h組男6例，女6例，年齡(66.9±14.1)歲；對照組男3例，女3例，年齡(65.1±15.3)歲。5組性別、年齡等差異無統計學意義(P>0.05)。

圖3 患者 男，63歲，左小腦區存在出血病灶

1．2入組標準[5](1)血小板計數>8×1010個/L，且無出血傾向；(2)未出現昏迷及大面積腦梗死病灶；(3)心、肝、腎功能基本正常；(4)患者及家屬對本次研究知情并簽署知情同意書。

1．3排除標準[6](1)入院前1周內使用過蛇毒類制劑或纖溶酶藥物；(2)3個月內接受過手術治療；(3)處于哺乳或妊娠期；(4)對本次研究使用藥品過敏；(5)主動退出研究。

1．4方法手術過程中取出生物檢材，及時置于液氮中。后集中使用RT-PCR法檢測生物檢材中IL-17 mRNA的表達水平，其中PCR引物，由生工(上海)生物工程有限公司合成，RT-PCR試劑盒購買自普邁(上海)生物有限公司。使用Western blot法檢測檢材中NF-κB p65核蛋白水平，其中核蛋白提取試劑盒購買自生工(上海)生物工程有限公司，NF-κB p65抗體購買自萬類(沈陽)生物有限公司。

2 結果

2．1 IL-17 mRNA表達水平對照組與<6 h組IL-17 mRNA表達水平比較無明顯差異(P>0.05)，其余三實驗組IL-17 mRNA表達水平顯著高于對照組(P<0.05)。>24～72 h組血腫周圍組織中IL-17 mRNA水平最高 (P<0.05)。見表1、圖2。

表1 各組IL-17 mRNA表達水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與<6 h組比較，#P<0.05；與6～24 h組比較，^P<0.05；與>24～72 h組比較，aP<0.05

2．2 NF-κB p65表達水平四實驗組血腫周圍組織中NF-κB p65水平均顯著高于對照組(P<0.05)。>24～72 h組血腫周圍組織中NF-κB p65水平最高(P<0.05)。見表2、圖3。

表2 各組NF-κB p65表達水平

注：與對照組比較，*P<0.05；與<6 h組比較，#P<0.05；與6～24 h組比較，^P<0.05；與>24～72 h組比較，aP<0.05

圖2 各組IL-17 mRNA表達水平 圖3 各組NF-κB p65表達水平

3 討論

大量研究顯示，在急性腦出血的發病及發展過程中，諸多機制均參與其中，炎癥反應是參與該過程重要的病理性反應[7-8]。有學者對早期急性腦出血發病前期分析發現，單核細胞、中性粒細胞等出現遷徙、滲出等現象，造成血腫周圍組織炎癥反應加劇，多種炎癥介質大量聚集，造成神經細胞凋亡[9]。體內包括小膠質細胞在內的多種細胞會分泌補體及其他細胞因子，參與血腫病灶區的炎癥級聯反應[10]。此外，有學者研究發現，黏附因子也是參與急性腦出血病灶區炎癥反應及細胞聚集的重要生物活性物質之一[11]。

IL-17是人體內十分重要的具有廣泛生物學活性的細胞因子之一，其參與體內大量的炎性反應，在人炎癥性疾病的發生及發展過程中扮演十分重要的作用[12]。研究證實，當IL-17與其受體結合后，激活MAPK、NF-κB及JAKs信號通路發揮生物學活性[13]。NF-κB是人體內重要的轉錄調節因子，調控人體內誘導趨化因子、細胞因子、補體、黏附因子等細胞因子的轉錄。當病原微生物、細胞因子、活性氧等因素刺激細胞后，可激活NF-κB活性，并形成較為復雜的正反饋調節環路，與機體的病理性改變密切相關[14]。

本研究顯示，急性腦出血患者血腫病灶區周圍組織中IL-17及NF-κB p65的表達水平明顯偏高，提示IL-17及NF-κB p65的表達與急性腦出血血腫周圍組織的炎性反應密切相關，且兩指標的動態變化在時間上具有高度的一致性。IL-17/NF-κB p65通路激活后，促進細胞的水通道蛋白及基質金屬蛋白酶的表達與激活，誘導神經細胞凋亡，加速病灶區及周圍組織損傷，加速急性腦出血血腫的發生[15-16]。有研究指出，急性腦出血后可能導致血Th細胞免疫調節功能失調，導致Th17型細胞活性增強，釋放大量IL-17等細胞因子[17-18]。而IL-17則通過血液向病灶部位聚集，并將大量中性粒細胞募集至病灶處，進一步加重炎癥反應[19-20]。本研究顯示，當IL-17介導的炎癥信號通路激活后，導致病灶區及周圍正常組織內細胞代謝異常，過度激活細胞內NF-κB，使其磷酸化水平升高，出現大量NF-κB p65聚集。

急性腦出血患者血腫周圍組織通過上調IL-17及NF-κB p65的表達及活性，加重炎性反應，誘發細胞損傷，造成病情惡化。提示治療時可考慮通過調節IL-17及NF-κB p65活性對急性腦出血患者進行干預。

[1] MOKIN M，DUMONT T M，VEZNEDAROGLU E，et al．Solitaire flow restoration thrombectomy for acute ischemic stroke：Retrospective multicenter analysis of early postmarket experience after FDA approval[J]．Neurosurgery，2013，73(1)：19-25．

[2] MENON B K，SAVER J L，PRABHAKARAN S，et al．Risk score for intracranial hemorrhage in patients with acute ischemic stroke treated with intravenous tissue-type plasminogen activator[J]．Stroke，2012，43(9)：2 293-2 299．

[3] 馬莉．NF-κB p65在IL-17上調MCP-1表達中的影響作用研究[D]．鄭州：鄭州大學，2016．

[4] ZHANG L，CHOPP M，TENG H，et al．Combination treatment with N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline and tissue plasminogen activator provides potent neuroprotection in rats after stroke[J]．Stroke，2014，45(4)：1 108-1 114．

[5] 張立堂，龐敏，楊筱君，等．急性腦出血患者外周血Th17細胞變化及其臨床意義[J]．中國現代神經疾病雜志，2013，13(7)：628-631．

[6] ZHANG L T，PANG M，YANG X J，et al．Changes and clinical significances of Th17 cells in the peripheral blood of patients with acute cerebral hemorrhage[J]．CJCNN，2013，13(7)：1 321-1 327．

[7] 李萍，趙樹明，胡亞男，等．腦出血發病機制研究進展[J]．中華老年心腦血管病雜志，2015，17(2)：214-215．

[8] XUE Q，BO Z．Cerebral Hemorrhage Complicating Heparin-induced Thrombocytopenia after Percutaneous Coronary Intervention：A Clinical Dilemma of Medical Treatment[J]．Natl Med J Chin，2015，128(11)：1 561-1 562．

[9] ZHENG H P，CHEN C L，HU Z P，et al．Does clopidogrel with aspirin after acute minor stroke or transient ischemic attack increase the risk of cerebral hemorrhage?[J]．Natl Med J Chin 2014，127(18)：3 352-3 353．

[10] 謝澤鋒，辛崗，李康生，等．體外LPS預處理小膠質細胞炎性細胞因子分泌反應的探討[J]．中國熱帶醫學，2015，15(7)：781-784．

[11] WANG Y，XU J，ZHAO X，et al．Association of hypertension with stroke recurrence depends on ischemic stroke subtype[J]．Stroke，2013，44(5)：1 232-1 237．

[12] LYU X L，WU Z X，RONG-BO Q U，et al．Endova-scular Treatment of Cerebral Aneurysms During Acute(<；72 Hours)Subarachnoid Hemorrhage[J]．J Neurol Sci，2012，29(3)：934-942．

[13] 郭江燕，高梓珊，姜姝姝，等．IL-17和NF-κB通路與類風濕性關節炎的相關性研究[J]．長春中醫藥大學學報，2015，31(1)：192-194．

[14] 張格娟，楊格強，狄政利，等．急性腦梗死患者腦微出血相關危險因素分析[J]．陜西醫學雜志，2015，17(7)：821-823．

[15] 李錦師，陸練軍，沈健，等．MMP-9在擴大時間窗急性腦梗死靜脈溶栓出血轉化中的意義[J]．卒中與神經疾病，2015，5(1)：18-20．

[16] 馬莉，沈燕．NF-κB P65 siRNA對 IL-17誘導下MCP-1表達的影響作用[J]．中國免疫學雜志，2015，31(10)：1 333-1 336．

[17] 賀利利，李正發，楊同華，等．Th17細胞在免疫相關性全血細胞減少癥中的免疫調節作用[J]．醫學分子生物學雜志，2015，13(1)：45-49．

[18] 段炤，林智平，劉青，等．CD4CD調節性T淋巴細胞與輔助性T淋巴細胞17在川崎病發病機制中的作用[J]．中華實用兒科臨床雜志，2017，32(9)：652-655．

[19] ORTIZ M L，KUMAR V，MARTNER A，et al．Immature myeloid cells directly contribute to skin tumor development by recruiting IL-17-producing CD4+T cells[J]．Int J Clin Exp Med，2015，212(3)：351．

[20] BONESTROO H J C，HEIJNEN C J，GROENENDAAL F，et al．Development of Cerebral Gray and White Matter Injury and Cerebral Inflammation over Time after InflammatoryPerinatal Asphyxia[J]．Dev Neurosci，2015，37(1)：78-94．