前哨淋巴結活檢及微轉移檢測對乳腺癌的臨床診療價值

乳腺癌中主要發生在女性，男性很少[1]。目前治療乳腺癌主要是以前哨淋巴結活檢(sentinel lymph node biopsy，SLNB)代替腋窩淋巴結清掃(axillary lymph node dissection，ALND)來進行治療。前哨淋巴結(sentinel lymph node，SLN)是原發腫瘤所必經的第一批特殊的淋巴結，最能反映淋巴結的轉移現象。淋巴結的微轉移檢測不準確，是淋巴結陰性腫瘤患者術后復發的原因之一，前哨淋巴結活檢是結合了淋巴結的微轉移對患者進行檢測，明確了腫瘤的分期，為患者的治療提供了準確信息[2]。隨著醫學的不斷發展和各個專家的研究，用放射性膠體和γ-探測儀定位乳腺癌前哨淋巴結和帶放射性標記的血清白蛋白定位前哨淋巴結，成功率高達95%，但國內相關應用比較少，因此需進一步研究。本實驗將對乳腺癌前哨淋巴結活檢及微轉移檢測對乳腺癌的臨床診療價值做出分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年5月至2017年6月間，于本院確診并接受治療的乳腺癌患者共133例，患者均為女性，年齡29～71歲，病程時間2～6年，活檢病理診斷為浸潤性導管癌或單純性導管原位癌。

1.2 納入與排除標準

納入標準：臨床無腋淋巴結轉移，無遠處轉移，腫塊經粗針穿刺或活檢病理診斷為浸潤性導管癌，無腋部手術史的患者；自愿加入本次研究的患者。

排除標準：存在術前放化療史以及切取SLN后沒有進行監測的患者；不愿加入本次研究的患者。

1.3 研究方法

參與本次研究的133例患者，先行前哨淋巴結定位活檢術，然后行腋窩淋巴結清掃術[3-4]。每例患者淋巴結切除6～25枚，共計1995枚。每例檢出前哨淋巴結1～5枚，共399枚；每例檢出非前哨淋巴結5～20枚，共1596枚。將每例患者切除的淋巴結1867枚行常規單層切片HE染色，并每枚隔100 μm的深度連續切片進行卡納琳免疫組化染色法。用微波修復抗原法將其置入微波爐加熱10～15 min，取出后自然冷卻。PBS每次間隔3～5 min進行沖洗；依次滴加AE1/AE3-抗工作液、第二代生物標記二抗工作液、第二代辣根酶標記鏈酶卵白素工作液，每次滴加工作液后進行PBS沖洗3次，放置室溫進行孵育。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 乳腺癌患者淋巴結切除情況

參與本次研究的133例乳腺癌患者中，人均切除淋巴結(32.3±14.7)枚，共1995枚。每例檢出前哨淋巴結1～5枚，平均3枚，共399枚；每例檢出非前哨淋巴結5～20枚，平均(12.5±2.4)枚，共1596枚。

2.2 前哨淋巴結內轉移灶情況

研究中發現，單一層面切片的HE染色，前哨淋巴結發現45枚(8例)(17.7%)、非前哨淋巴結41枚(14例)(34.1%)發現轉移。對365枚前哨淋巴結行多層切片HE染色及免疫組化染色檢測，發現單層切片常規HE染色前哨淋巴結均有微小轉移，余下HE染色陰性的前哨淋巴結有微小轉移灶，直徑均小于2 mm，累計有96枚前哨淋巴結內有轉移灶。

對常規單一層面切片HE染色的患者，非前哨淋巴結行多層切片HE染色檢測，發現有微小轉移灶；對多層切片HE染色的患者進行多層連續切片及免疫組化，發現淋巴結存在微轉移；對前哨淋巴結無微轉移患者的非前哨淋巴結行多層連續切片及免疫組化研究，尚未發現淋巴結有微轉移灶。

2.3 前哨淋巴結癌轉移檢出情況

多層切片HE染色及免疫組化染色法對早期乳腺癌前哨淋巴結的陽性檢出率為41.37%(151/365)，單一層面切片HE染色法陽性檢出率為27.67%(101/365)，差異有統計學意義(χ2=3.952，P=0.031)。

3 討論

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，是導致女性死亡的首要原因，我國以每年新增3%～4%的發病率逐年上升[5]。單純的DCIS術后沒有1例發生前哨淋巴結轉移，而術前此類診斷為浸潤性導管癌的病例中有出現前哨淋巴結轉移，因此乳腺導管原位癌是否需行前哨淋巴結活檢亟待明確[6-8]。因此，能夠在術前術中做出正確的前哨淋巴結活檢技術受到廣泛的關注。

前哨淋巴結是腫瘤細胞經淋巴管轉移的第一站淋巴結，前哨淋巴結的存在為乳腺癌前哨淋巴結活檢技術奠定了基礎。本次研究說明了前哨淋巴結活檢可以準確反映腋窩淋巴結的轉移情況[9-10]，并且更安全、可靠、行之有效。多層切片結合免疫組化檢測比常規單一層面的HE染色更容易發現淋巴結的癌轉移情況，并且有助于微小轉移灶的檢出。對常規HE染色陰性者采用多層切片及免疫組化AE1/AE3法發現有前哨淋巴結轉移的現象[11-12]。對乳腺癌前哨淋巴結進行免疫組化染色、HE檢查、多層面切片均發現有微小轉移，本次研究對常規HE染色患者行多層面切片也均發現有微轉移。癌轉移是細胞蛋白在淋巴結中的表達，采用不同方法進行比較發現AE1/AE3是免疫組化最適合的抗體。資料表明，常規的病理檢測和治療，在術后復發率高達35%，且前哨淋巴結有癌轉移現象，因此，乳腺癌前哨淋巴結活檢亟待去證明使用，減少患者不必要的痛苦和負擔。通過本次研究發現連續切片及免疫組化染色AE1/AE3法與普通HE染色方法相比，對前哨淋巴結癌轉移檢出率明顯提高，連續切片及免疫組化染色AE1/AE3法可提高腫瘤分期的精確性，還提高了前哨淋巴結對腋淋巴結有無轉移的敏感率[13-14]。

綜上所述，前哨淋巴結活檢及微轉移的檢測可以用來指導是否對乳腺癌患者進行常規腋淋巴結清掃，對其進行連續切片及免疫組化染色檢測比普通HE染色檢出率明顯提高。