微波提取法提取北五味子木脂素條件研究

孟華 董智睿

【摘要】目的：通過單因素實(shí)驗(yàn)法，探討微波法提取北五味子中木脂素的工藝條件。方法：根據(jù)木脂素的溶解性、微波功率、溶劑/基質(zhì)比率、萃取時(shí)間這些因素，利用高效液相色譜進(jìn)行分析，確定最佳提取工藝條件。結(jié)果：通過單因素實(shí)驗(yàn)法的驗(yàn)證，確定了最佳的提取條件。結(jié)論：以經(jīng)過驗(yàn)證的最佳提取工藝條件，用微波提取法提取北五味子木脂素，提取得到的木脂素含量最高。

【關(guān)鍵詞】五味子;木脂素;微波提取法;單因素實(shí)驗(yàn)

我國五味子屬藥用植物資源豐富又是著名的滋補(bǔ)性中藥。因其果實(shí)甘、酸、辛、苦、成五味俱全，故名五味子[l]。五味子分北五味子和南五味子，北五味子質(zhì)比南五味子優(yōu)良。北五味子呈不規(guī)則的球形或扁球形，直徑5～8mm。表面紅色、紫紅色或暗紅色，皺縮，顯油潤，果肉柔軟，有的表面呈黑紅色或出現(xiàn)“白霜”。

《本草經(jīng)疏》中提到;五味子主益氣者，肺主諸氣，酸能收，正入肺補(bǔ)肺，故益氣也。其主咳逆上氣者，氣虛則上壅而不歸元，酸以收之，攝氣歸元，則咳逆上氣自除矣。勞傷贏瘦，補(bǔ)不足，強(qiáng)陰，益男子精。《別錄》養(yǎng)五臟，除熱，生陰中肌者，五味子專補(bǔ)腎，兼補(bǔ)五臟，腎藏精，精盛則陰強(qiáng)，收攝則真氣歸元，而丹田暖，腐熟水谷，蒸糟粕而化精微，則精自生，精生則陰長，故主如上諸疾也。

五味子中的主要有效成分是木脂素，其總含量的比例為2%～8%，木脂素結(jié)構(gòu)中大多具有聯(lián)苯環(huán)辛二烯母核，是一類低極性小分子的化合物。近年來，國內(nèi)外學(xué)者[2，3]已經(jīng)從五味子科植物中分離鑒定出近200種木脂素成分，其中具有明顯生物活性的有：五味子甲素schisandrinA、五味子乙素schisandrinB、五味子丙素schi sandrm C等。

五味子甲素、乙素、丙素、醇乙、酯乙可明顯延長小鼠對戊巴比妥鈉或環(huán)己巴比妥鈉的睡眠時(shí)間，乙素及酯乙對小鼠的睡眠時(shí)間有先延長后縮短的雙相性影響[4]。

微波輔助提取又稱微波萃取，是利用微波的熱效應(yīng)對樣品及其有機(jī)溶劑進(jìn)行加熱，從而將目標(biāo)組分從樣品肌體中分離出來的一種新型高效分離技術(shù)。與傳統(tǒng)的萃取技術(shù)相比，微波萃取技術(shù)具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，被譽(yù)為“綠色萃取技術(shù)”，并已成為實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的重要關(guān)鍵技術(shù)之一[5]。以單一因素法探索提取五味子中木脂素的合適溶劑，微波功率、萃取時(shí)間、萃取溫度、溶劑/基質(zhì)比率，初步確定最佳工藝條件，用高效液相色譜進(jìn)行含量測定[6]。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 木脂素的分析

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

對照品溶液制備：精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇一水（83： 17）溶液配成lOml溶液。按色譜條件：島津shim-PackC18柱，（250mmx4.6mm，lOμm）;流動相：甲醇一水（65： 35）;柱溫：40℃;流速：1.0ml/min：檢測波長230 nm進(jìn)樣旦.5.OμL。測定峰面積積分值，以濃度（ μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（mv）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[7]。

Y甲素=17479X+120012，R2=0.9991;

Y乙素=10116X+63690，R2=0.9999;

Y酯甲=16415X-2766.4，R2=0.9986。

1.1.2 供試品溶液的測定

供試品溶液制備：移取5.0g五味子提取物，加入適量甲醇溶液，配制成10 ml的溶液，再取部分上述溶液，進(jìn)行薄膜過濾，即得到木脂素粗溶液。按上述色譜條件，測定供試液中木脂素的峰面積積分值，以回歸法計(jì)算得含量，從而確定提取木脂素的最佳提取工藝條件。

2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1 反應(yīng)影響因素的探索

2.1.1 溶劑的選擇

精確稱取5份5克北五味子粉末樣品置燒瓶中，按溶劑/基質(zhì)比率為12：1分別加入氯仿、丙酮、正己烷、苯、乙醇溶液，設(shè)定微波功率600W，微波萃取時(shí)間8min。然后過濾，將濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，干燥成膏狀稱重。用高效液相色譜分析溶劑對提取效率的影響。

2.1.2 微波功率的選擇

精確稱取3份5克北五味子粉末樣品置燒瓶中，按溶劑/基質(zhì)比率為12：1加入氯仿溶液，微波萃取8min。然后過濾，將濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，干燥成膏狀稱重。用高效液相色譜分析微波功率對提取效率的影響。

2.1.3 溶劑/基質(zhì)比率

精確稱取5份5克北五味子粉末樣品置燒瓶中，設(shè)置微波功率600W，萃取時(shí)間8min，溫度58℃，分別用溶劑/基質(zhì)比率10：1、12：1、14：1、16：1、20：1的氯仿溶劑。然后過濾，將濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，干燥成膏狀稱重。用高效液相色譜分析溶劑/基質(zhì)比率對提取效率的影響。

2.1.4 萃取時(shí)間

精確稱取5份5克北五味子粉末樣品置燒瓶中，按溶劑/基質(zhì)比率為12：1的配比加入氯仿溶液，分別用微波萃取5min、8min、lOmin、12min、15min。 然后過濾，將濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，干燥成膏狀稱重。用高效液相色譜分析萃取時(shí)間對提取效率的影響。

2.2 木脂素的含量測定

2.2.1 溶液的制備

精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇一水（83：17）溶液配成10ml溶液，搖勻，過濾，備用。

精密稱取供試品，用甲醇一水（83：17）溶液配成10ml溶液，搖勻，過濾，備用。

2.2.2 檢驗(yàn)條件

色譜柱： 島津shim-Pack C18柱（250mmx4.6mm，10μm）;流動相：甲醇.水（65： 35）;柱溫：40℃;流速：1.0ml/min;檢測波長：254nm;進(jìn)樣量：5.0μL。

3 結(jié)論

經(jīng)單因素探索實(shí)驗(yàn)優(yōu)化確定了的最佳工藝條件為：微波功率600W，溶劑/基質(zhì)比率為12：1，萃取時(shí)間為8min，實(shí)驗(yàn)溫度58℃。經(jīng)驗(yàn)證，在該條件下的產(chǎn)品產(chǎn)量確為所有進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中的最高產(chǎn)量。

參考文獻(xiàn)

[1]王振中.五味子的藥理研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國藥研究，1996，7 （02）：119-121.

[2]可成友，高珍等.北五味子植物化學(xué)成分及其活性的研究進(jìn)展[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007 （03）： 57-60.

[3] Bischof MG， BernroiderE， Krssak M，et al. Hepaticglycogen Metabolism in type1 diabetes after long-term near normoglycemia [J].Diabetes， 2002， 51： 49-54.

[4]霍艷雙，陳曉輝，李康等.北五味子的鎮(zhèn)靜、催眠作用[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22 （02）：126-128.

[5]沈嵐，馮年平，韓朝陽等.微波萃取對不同形態(tài)結(jié)構(gòu)中藥及含不同極性成分中藥的選擇性研究[J].中草藥，2002， 33 （07）： 604-607.

[6]高春花，鐘海雁等.五味子木脂素提取分離純化和含量測定的研究進(jìn)展[J].食品與機(jī)械，2007，23 （01）：151-155.

[7]王洋，牛遇達(dá)等.北五味子中五味子甲素及乙素含量的高效液相色譜分析[J].林產(chǎn)化學(xué)與工，2007，27 （01）：85-88.