基于《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》中黃芪質量控制的比較研究

姜慶華+林評蘭+謝瑞芳+李瑤+周昕

摘 要 目的：對《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》中黃芪部分進行比較。方法：根據《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》，對國內和巴黎購買的3批次黃芪飲片進行質量控制。結果：這3批次飲片均符合《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》要求。結論：雖然《中華人民共和國藥典》與《歐洲藥典》對黃芪的質量控制的要求有一定區別，但是無論是性狀鑒別、指標成分的含量，還是安全性檢查，《中華人民共和國藥典》均不低于《歐洲藥典》。

關鍵詞 歐洲藥典 中華人民共和國藥典 黃芪 質量控制

中圖分類號：R921 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2018）03-0077-06

Comparison of the quality control of Astragalus mongholicus Radix based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia*

JIANG Qinhua1**， LIN Pinglan1，2** ， XIE Ruifang1， LI Yao1， ZHOU Xin1***

（1. Department of pharmacy， Longhua Hospital affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 200032， China； 2. Department of nephrology， Shuguang Hospital affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine； TCM institute of kidney disease， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine； Shanghai Key Laboratory of Traditional Chinese Clinical Medicine， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To compare the quality control of Astragalus mongholicus Radix based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia. Methods： The quality control was performed to three batches of Astragalus mongholicus Radix from China and Paris， France based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia. Results： The results showed they all met the requirements of both European and Chinese Pharmacopoeias. Conclusion： Although some differences exist between two Pharmacopoeias， the quality criteria of Chinese Pharmacopoeia for Astragalus mongholicus Radix are not inferior to those of European Pharmacopoeia in the identification of characteristics， the content of mark ingredient and safety examination.

KEY WORDS European Pharmacopoeia； Chinese Pharmacopoeia； Astragalus mongholicus Radix； quality control

雖然中藥有較好的臨床效果，但在法國和歐盟的范圍內傳統中藥僅能以保健品、食品的名義合法銷售，而非藥品。在歐盟藥典中，黃芪也有專論，這就意味著，其相關飲片在歐洲應用，也需符合《歐洲藥典》的要求。本文以黃芪飲片為例，探討了《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》的異同，為我國中藥飲片進入國際市場提供參考。

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗儀器

臺式顯微鏡，分析天平，高效液相色譜、二級陣列管檢測器，超聲儀，臺式離心機，旋轉蒸發儀，超高效液相色譜、ELSD檢測器，Waters色譜柱。

1.2 試劑與材料

50%甘油，正丁醇，正庚烷，冰醋酸，甲醇，乙醇，乙腈，磷酸，氨水，乙酸乙酯；硅膠薄層色譜板gel 60 F254，刻度毛細管，十八烷基甲硅烷硅膠小柱（40～60 μm）。

1.3 對照品

黃豆苷（≥99%），黃豆苷元（≥99%），黃芪甲苷對照品，人參皂苷（≥99%）。

1.4 飲片

黃芪飲片分不同時間購買，其產地、來源等如表1所示。上述飲片基源由生藥學專家何波鑒定為蒙古黃芪（Astragalus mongholicus var. Mongholicus）的干燥根。這些飲片均符合《中華人民共和國藥典》對黃芪的質量要求。

2 實驗方法與結果

2.1 黃芪飲片粉末顯微鑒定

將黃芪飲片樣本打粉，過355號篩（藥篩孔徑為355 μm，相當于《中華人民共和國藥典》中規定的3號藥篩），形成黃白色粉末，滴加水合氯醛溶液在顯微鏡下檢視。endprint

顯微特征結果表明，木纖維獨立散在或成簇，表面隔板增厚或縱裂增厚，初生細胞壁與次生細胞壁分開，兩者末尾破碎（批次1，批次2）或成批次3的流蘇狀，或者被輕微截斷。無色或橘色具緣紋孔導管緊密排列，木栓組織多層，多數伴有（栓內層）厚角組織化。石細胞多數可見，圓形、橢圓形、不規則形，細胞壁輕微增厚。滴加50%甘油溶液，置于顯微鏡下檢視，小型圓形或卵圓形淀粉顆粒，通常單個或2、3個復粒散在分布，符合《歐洲藥典》質量要求。

2.2 黃芪飲片薄層色譜定性研究

供試品溶液：稱取3 g飲片粉末，加入50 ml甲醇加熱回流50 min，濾過。濾液減壓蒸干溶劑，加入1 ml水復溶。溶液加于預先以3 ml甲醇和3 ml水預洗過含有6 ml十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱中，以水15 ml洗脫，棄去水液，再用30%甲醇25 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用20 ml甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干后以2 ml甲醇復溶；對照品溶液：1 mg/ml大豆苷元，2 mg/ml大豆苷混合溶液；薄層板：TLC硅膠F254，硅膠粒徑為2～10 μm；流動相：水-甲醇-乙酸乙酯（10∶13.5∶100 V/V/V）；點樣：取樣3 μl，8 mm條帶，溶劑展開7 cm；檢測：揮干，于254 nm紫外燈下檢測，茴香醛溶液處理后，100 ℃加熱3 min，至365 nm紫外燈下檢測。

結果表明，在254 nm紫外燈下（圖1Ⅰ），供試液與對照溶液中大豆苷元在上方相同位置顯示熒光斑帶，與對照溶液中大豆苷在下方相同位置顯示熒光斑帶；在365 nm紫外燈下（圖1Ⅱ），對照溶液中大豆苷和大豆苷元顯示藍白色熒光斑帶，供試品溶液在相同位置顯示棕色斑帶，同時供試溶液在點樣板上方區域顯示多條紫色斑帶，在點樣板下方區域顯示多條棕色斑帶，符合《歐洲藥典》要求。

2.3 黃芪指標化合物定量研究

2.3.1 兩種提取方法供試品溶液的制備

按照《歐洲藥典》8.0版，取黃芪飲片，干燥后，打成中粉，取約4 g粉末，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨水充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨水，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 ml使溶解，放冷。溶液通過預先以5 ml甲醇和5 ml水預洗過的含有1 g十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱中，以水20 ml洗脫，再用25%乙醇25 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇25 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，溶液經過0.45 μm尼龍濾膜過濾，取續濾液，即得。

按照《歐洲藥典》修訂版27.4取供試品粉約4 g，精密稱定，加甲醇40 ml，80 ℃超聲提取30 min，離心7 min取上清液，殘渣加甲醇25 ml，80 ℃超聲提取30 min，離心7 min取上清液，重復上述提取離心過程，合并所有上清液，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨水充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨水，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。溶液經過0.45μm尼龍濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.3.2 對照溶液的制備

精密稱取10 mg黃芪甲苷對照品，用甲醇溶解配成1 mg/ml的對照品溶液（a），稀釋成不同濃度的對照品溶液（b）、（c）、（d）；精密稱取5 mg人參皂苷rb1對照品，用5 ml甲醇溶解，用對照品溶液（a）定容至10 ml，得到對照品溶液（e）。

2.3.3 液相條件

C18色譜柱（0.1 m× 2.1 mm×1.8 μm）。溫度：40 °C；流速：0.6 ml/min；進樣量：2 μl；用Waters蒸發光散射檢測器檢測（漂移管溫度：40 °C，載氣：空氣）；流動相：0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液（13∶87，V/ V），具體比例見表2。

2.3.4 色譜結果

結果表明（圖2，3），在現有色譜條件下，均得到了良好分離。在對照品溶液中，人參皂苷與黃芪甲苷先后出峰，峰型對稱，保留時間分別為6.12 min和6.75 min，兩峰的分離度為6.3，符合藥典要求；兩種不同提取方式處理的單個批次的供試品溶液中，黃芪甲苷出峰時間均為6.75 min，峰型對稱。

將對照品溶液濃度對數為橫坐標，峰面積對數為縱坐標繪制對照品濃度-峰面積雙對數標準曲線，結果表明（表4），黃芪甲苷在0.097 8～0.489 mg/ml的范圍內有良好的線性，相關系數為0.996。

A=樣品溶液中黃芪甲苷色譜峰面積；K=黃芪甲苷對照品溶液峰面積及濃度雙對數標準曲線斜率；b=黃芪甲苷對照品溶液峰面積及濃度雙對數標準曲線截距；m=干燥的黃芪供試品粉末質量（g）；p =藥典黃芪甲苷對照品中黃芪甲苷的純度（97.8%）。

黃芪飲片粉末根據《歐洲藥典》和修訂版27.4中兩種方法進行前處理之后。結果表明，3批飲片樣品中，黃芪甲苷含量測定結果均符合0.040%的最低定量限要求。相同批次的黃芪兩次測得含量并不相同，但結果無明顯數量級的差異（表4）。endprint

分析原因可能是由樣品前處理中提取、轉移等操作步驟引起。故無法單從已知的測定結果中簡單判定兩種方法的優劣。兩種方法皆采用水飽和正丁醇萃取并用飽和氨水洗滌，可除去溶液中酚、酸性成分并富集皂苷類成分[1]。《歐洲藥典》方法中，供試品溶液通過十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱，富集和純化溶液中皂苷類成分，所得溶液相比步驟簡化的《歐洲藥典》修訂版27.4的提取方法所得供試品溶液外觀更為澄清透明，但是，作為藥典質量控制的專論，《歐洲藥典》修訂版27.4采用的超聲波加熱回流提取方法，操作更為簡便、節省時間，在實際檢測工作中具有更大的優勢。至于兩種方法中，批次1的數據降低與批次2、3的升高的趨勢相反，可能是操作的誤差引起的。

黃芪中含有大量以黃芪甲苷為代表的環黃芪醇皂苷，均為三萜皂苷，如黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和異黃芪皂苷等[2-3]。環黃芪醇皂苷含有相同的苷元母核，因配糖體部分不同而分為多種皂苷，環黃芪醇皂苷的配糖體上有3個取代位置，黃芪甲苷糖體3個位置均與OH相連，而其它環黃芪醇皂苷配糖體上聯接OH或OAc，故工業提取中采用皂化反應原理，在氫氧化鉀的作用下，將所有的環黃芪醇皂苷、乙酰化轉化為黃芪甲苷，可增加提取率。而在中國與歐洲藥典黃芪甲苷提取中，均不采用乙酰化反應，體現了專論方法的專一性和穩定性，精確有效地測量飲片中有效成分的含量。

黃芪甲苷僅有紫外末端吸收，用紫外（203 nm）檢測時雜質干擾大、溶劑背景吸收難以消除[4-5]，故采用ELSD檢測器，樣品顆粒與蒸發光發生多個類型的散射過程[6]，直接以峰面積值和相對應的樣品濃度計算標準曲線時，得到線性結果較差，而將峰面積與樣品濃度值分別取自然對數后可得更理想的線性關系（r=0.998 2） [7]。ELSD 檢測器為質量型檢測器，不受外部環境干擾，試劑在檢測器中全部蒸發，不干擾檢測，靈敏度、穩定性及重現性亦能符合含量測定的要求。

2.42.5 《歐洲藥典》與《中華人民共和國藥典》黃芪專論標準和方法的比較研究

根據《歐洲藥典》8.0版與《中華人民共和國藥典》2015年版中的黃芪部分質量和標準的比較，歸納整理如表5。

可得到如下結論：①兩藥典規定的黃芪飲片基源、采收時間以及加工方式有一定的區別。②在性狀鑒定方面，《中華人民共和國藥典》對于黃芪的干燥飲片外觀、性狀有詳細的描述與要求，并對飲片橫截面有具體顯微結構描述，而《歐洲藥典》對飲片橫截面沒有具體要求。③在薄層色譜鑒定方面，《歐洲藥典》中黃芪采用大豆苷與大豆苷元進行飲片鑒定，以區別于含量測定中所使用的阿魏酸與黃芪甲苷，避免重復。而《中華人民共和國藥典》中，飲片薄層色譜鑒定與含量測定采用的對照品均為黃芪甲苷。此外，《中華人民共和國藥典》薄層鑒別還使用黃芪對照飲片。④在其他測試方面，《中華人民共和國藥典》具有浸出物、重金屬及有害元素、有機氯農藥含量的限制要求；而《歐洲藥典》將上述內容歸納為雜質及酸不溶性灰分。⑤在含量測定方面，兩者對于黃芪中的黃芪甲苷要求是相同的。《歐洲藥典》在黃芪對照品溶液中加入人參皂苷rb1，用以確定液相系統檢測條件的適用性，使測量結果更為準確可信。《中華人民共和國藥典》中對于對黃芪有毛蕊異黃酮苷含量至少為0.020%的要求，而《歐洲藥典》則沒有。

3 結語

本文根據《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》對國內以及在巴黎十三區華人街購買的黃芪飲片進行初步的質量研究，結果表明這3批次飲片符合《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》要求。

我們將《歐洲藥典》與《中華人民共和國藥典》中對黃芪飲片質量要求進行比較，可以看出，雖然《中華人民共和國藥典》與《歐洲藥典》對黃芪的質量控制的要求有一定區別，但是無論是性狀鑒別、指標成分的含量，還是安全性檢查，《中華人民共和國藥典》均不低于《歐洲藥典》。

參考文獻

[1] 劉浩文， 劉嘉儀， 楊妙榮， 等. 黃芪藥材中黃芪甲苷含量測定的兩種方法的比較研究[J]. 中藥新藥與臨床藥理， 2011， 22（6）： 659-662.

[2] 王金山. 黃芪中有效成分環黃芪醇皂苷和黃芪甲苷的含量測定[J]. 海峽藥學， 2009， 21（2）： 39-41.

[3] 劉正磊， 馮素香， 李娟，等. 高效液相-蒸發光散射檢測法測定黃芪藥材中黃芪甲苷含量[J]. 中醫學報， 2012， 27（3）： 334-335.

[4] 鄔成華. 高效液相色譜-蒸發光散射檢測法測定黃芪注射液中黃芪甲苷含量[J]. 上海醫藥， 2001， 22（2）： 83-84.

[5] 張凱， 尹子郡， 張躍進， 等. HPLC法測定復方烏骨藤膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量[J]. 西北林學院學報， 2016， 31（1）： 250-253.

[6] 李翔， 朱臻宇， 朱東亮， 等. 高效液相色譜-蒸發光散射檢測梯度洗脫法測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量[J]. 第二軍醫大學學報， 2006， 27（3）： 331-333.

[7] 王建舫， 胡格， 張濤， 等. 高效液相色譜-蒸發光散射法測定芪參口服液中黃芪甲苷的含量[J]. 中獸醫醫藥雜志， 2012， 31（5）： 11-14.endprint