草魚病原菌AvX005的分離鑒定及其拮抗菌篩選研究

何 濤，鄒 升，龔 亮，趙 峰，周朋吉，李艷平，曹麗娜，丁學知，夏立秋

( 湖南師范大學 生命科學學院，淡水魚類發育生物學國家重點實驗室，微生物分子生物學省重點實驗室，湖南 長沙 410081 )

草魚(Ctenopharyngodonidellus)作為我國產量較大的淡水魚類養殖品種，具有生長快、飼料蛋白需求低、肉質好等優點[1]。然而隨著草魚集約化養殖規模不斷擴大、養殖密度增加，導致養殖水質變差，草魚重大病害爆發日益頻繁，其中細菌性疾病最為嚴重，制約和危害了草魚養殖業的健康可持續發展。2016年4—7月，湖南望城喬口漁場爆發了較大范圍的草魚疾病，發病草魚均表現為游動緩慢、反應遲鈍，體表發黑，胸鰭鰭條基部和局部魚體肌肉出現出血癥狀，肛門紅腫，鰓絲呈灰白，部分魚體出現脫鱗。該病持續時間長，短期內可導致草魚大量死亡。因此分離并鑒定草魚細菌性疾病病原對草魚病害的有效防治具有重要意義。

我國水產養殖動物細菌性疾病防治中，抗菌類藥物發揮了重要作用[2]。然而此類藥物的過量使用，也帶來了越來越多的問題，如病原菌的抗藥性，養殖水體的菌群失調，以及藥物殘留對生態環境污染問題[3]。近年來，生物防治成為研究熱點，拮抗菌以其無殘留、綠色安全等優點逐漸替代抗生素，得到越來越多的關注。目前研究比較多的水產益生菌主要有乳酸菌、芽孢桿菌(Bacillus)、光合細菌、硝化細菌等，其中部分已被廣泛應用于水質調控和飼料添加劑，然而在針對特定病原的拮抗菌研究相對較少。因此，加強病原菌拮抗菌的理論研究和應用開發，有助于更快、更好的服務于水產養殖業。筆者自湖南望城喬口爆發病魚池的病魚體內分離純化獲得一株優勢菌株，經回復感染試驗能使草魚致死，對該病原菌進行了生理生化特性和分子鑒定，并篩選其拮抗菌，分離純化抑菌活性物質，利用LC-MS/MS鑒定該物質及其分子量，以期為漁場該病原的檢測和生物防治提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

患病草魚及本試驗草魚均為常規草魚品種，患病草魚取自爆發魚病的湖南望城喬口漁場，每尾體質量約100 g，體長約12 cm。健康草魚取自實驗室養殖基地，每尾體質量約100～120 g，于實驗室水族箱飼養，用于后續試驗。

1.2 培養基

LB液體培養基：蛋白胨10 g， 酵母提取物5 g，氯化鈉10 g， 超純水1000 mL；LB固體培養基：在液體LB培養基中加2%的瓊脂粉。發酵培養基：葡萄糖18 g，蛋白胨14.5 g，KH2PO42.5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，MnSO40.02 g，FeSO4·7H2O 0.02 g，超純水1000 mL。

1.3 主要試劑及儀器

細菌基因組提取試劑盒，PMD-18T載體，質粒提取試劑盒，PCR產物純化試劑盒均購自上海生工生物試劑有限公司；TaKaRa Ex TaqDNA 酶，DL-5000Marker購自寶生物工程(大連)有限公司。冷場電子掃描顯微鏡(Hitachi Su8010)購自日立公司，超高效液相色譜儀UHPLC(Agilent 1290)購自美國安捷倫公司，凝膠成像儀購自美國Kodak公司，PCR 擴增儀購自德國Eppendorf公司，電泳儀購自北京六一儀器廠。

1.4 病原菌的分離

將同一批具有典型癥狀的患病草魚，用75%的酒精棉擦拭體表后于超凈工作臺中無菌條件下解剖，分別取鰓、心、肝、胰、腎組織加無菌水研磨搗碎，吸取上清液稀釋涂布于固體LB培養基平板中，37 ℃培養24 h后挑取優勢單菌落再次劃線純化，純化的菌株接種于液體LB培養基中于37 ℃恒溫振蕩培養箱中培養18～20 h，保種于25%無菌甘油中，冰箱中-80 ℃凍存備用。

1.5 回復感染試驗

取冰箱中-80 ℃凍存的菌株活化，擴大培養后，離心收集菌體，用0.85%無菌生理鹽水將其稀釋制備成1×109cfu/mL、1.0×108cfu/mL的菌懸液。將試驗用的健康草魚隨機分組，每組10尾。試驗采用曝曬24 h后的自來水作為養殖水體，水溫控制在20～23 ℃，采用腹腔注射法。腹腔注射分為3組：第1組注射1.0×109cfu/mL菌懸浮液，第2組注射1.0×108cfu/mL菌懸浮液，對照組注射0.85%無菌生理鹽水，注射量均為0.2 mL/尾。觀察14 d，記錄魚體癥狀和死亡情況。患病試驗魚按照1.4方法進行細菌的再分離。

1.6 病原菌的分類與鑒定

1.6.1 病原菌形態觀察

病原菌在LB培養基上于37 ℃培養20 h后，觀察和記錄菌落形態特征。挑取單菌落于載玻片上滴加3～5 μL的無菌水制成菌懸液，進行涂片、固定和革蘭氏染色后在ZISS光學顯微鏡下觀察菌體形態。同時將細菌涂布制片，在冷場電子束掃描電子顯微鏡下觀察菌體超微結構。

1.6.2 分子鑒定

1.6.2.1 16S rDNA的擴增與測序

菌株于37 ℃振蕩搖床培養16 h，利用細菌基因組提取試劑盒(生工)提取細菌基因組，利用通用引物擴增維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)的16S rDNA的全長序列，引物序列為：27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；1492R：5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′，序列預期長度約為1500 bp。PCR反應體系20 μL。含有10× PCR Ex Taq Buffer 2 μL，2.5 mmol/L dNTP Mixture 1.6 μL，上游引物0.6 μL(10 pmol/L)、下游引物 0.6 μL(10 pmol/L)，模板 1 μL，TaKaRa Ex Taq(5 U/μL) 0.2 μL，ddH2O 14 μL。PCR反應條件為：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性45 s，55 ℃復性45 s，72 ℃延伸2 min，30個循環，最后延伸10 min。PCR產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測并回收。回收產物用PMD-18T vector進行連接，之后轉化到大腸桿菌(Escherichiacoli)Top10感受態細胞中，進行氨芐抗性篩選，挑取單克隆培養提取質粒，酶切鑒定后送至上海生工進行測序。

1.6.2.2 系統發育樹的構建

將測序獲得的序列利用BLAST和GenBank數據中序列進行同源性分析。根據比對結果，在GenBank中檢索獲得標準菌株的16S rDNA序列，利用Mega 6.0軟件采用鄰接法構建系統發育樹(重復數為1000，步長值取百分比)。

1.6.3 生理生化鑒定

參照《細菌系統鑒定手冊》[4]中的細菌鑒定方法，測定菌株各項生理生化項目，每項測試均設置對照。

1.7 拮抗菌的篩選

1.7.1 候選菌株分離

采集池塘水和底泥樣品，稱取10 g底泥和量取10 mL水樣加入90 mL的無菌水中，超凈工作臺中蝸旋振蕩搖勻，然后吸取上清液以10倍梯度稀釋法稀釋，取稀釋后的樣品各100 μL涂布于固體培養基平板，每個稀釋梯度涂布3個平板，最后將平板倒置于37 ℃恒溫培養箱中培養24～36 h，選擇合適菌落數的平板(30～300 cfu)，挑取單菌落進行平板劃線純化，經多次劃線純化后，得到純菌種，4 ℃保存備用。

1.7.2 拮抗菌的初篩

將培養至對數期的菌株AvX005菌液，取100 μL菌液均勻涂布于固體LB培養基平板，等平板表面在超凈臺里面風干后，用接種環挑取從池塘水和底泥中分離純化的菌株點種于涂布有菌株AvX005菌液平板培養基的表面。在30 ℃培養24 h后觀察點種菌落周圍是否產生抑菌圈。對周圍產生抑菌圈的菌落進行分離純化，直至獲得對菌株AvX005具有拮抗作用的純培養物。

1.7.3 拮抗菌的復篩

將初篩的菌株接種至液體發酵培養基中，于30 ℃，165 r/min的搖床培養48 h，然后取其搖瓶中發酵液于離心機，13 000 r/min離心20 min，取其上清液10 μL滴于濾紙片上。將菌株AvX005活化后，取對數期100 μL菌液涂于LB固體瓊脂培養基表面，風干后，用鑷子捏取含發酵液的濾紙片貼于平板瓊脂培養基的表面，30 ℃培養24 h，觀察并測量抑菌圈的直徑。

1.8 拮抗成分理化性質的研究及分離鑒定

1.8.1 生物活性測定

將培養48 h的解淀粉芽孢桿菌發酵液(10 000 r/min離心20 min)取上清液分別經溫度40、60、80、100 ℃處理1 h后，各取10 μL用于抑菌試驗。蛋白酶K(20 mg/mL)處理1 h后，滅活蛋白酶K，各取10 μL用于抑菌試驗。pH梯度 1、3、5、7、9、11、13處理1 h后調pH至中性，各取10 μL用于抑菌試驗。

1.8.2 超高效液相色譜分離

取發酵48 h的解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)發酵液100 mL，4 ℃，10 000 r/min離心20 min收集發酵上清液，用6 mol/L HCl調pH為2，冰箱4 ℃靜置12 h，然后10 000 r/min離心20 min收集沉淀，烘干，加入甲醇抽提，再加入少量無菌水用NaOH調為pH 7.0，10 000 r/min離心20 min，取上清液放置真空濃縮儀中冷凍干燥，2 mL 50%甲醇溶解，0.22 μm孔徑濾膜過濾，以進樣量為10 μL進行超高效液相色譜分離。所用柱子為ZORBAX SB-C18(4.6×150 mm，5 μm)，所用儀器為Agilent 1290 Infinity。流動相A1為ddH2O，B1為乙腈，流速0.5 mL/min，運行方法見表1。0～20 min乙腈5%～100%，20～22 min乙腈100%，22～24 min乙腈100%～5%，24～25 min乙腈5%，檢測波長分別為235、250、275 nm。將收集到的組分在真空濃縮儀中凍干，除去乙腈，加入50%甲醇溶解，然后進行抑菌活性檢測。

1.8.3 質譜鑒定

在經超高效液相色譜分離收集的樣品中添加0.1%的甲酸，進樣20 μL于LTQ XL液質聯用儀，所用柱子為C18柱，流動相為10%～90%甲醇梯度，檢測波長為UV 235、250、275 nm，ESI離子源。噴霧壓力為35 psi，干燥氣(N2)流速為12 L/min，溫度為300 ℃。離子化電壓為4000 V，二級質譜中氦氣為碰撞氣體，全掃描模式。

表1 色譜梯度洗脫程序

2 結果與分析

2.1 病魚患病癥狀

發病草魚表現為游動緩慢、反應遲鈍，體表發黑，胸鰭鰭條基部和局部魚體肌肉出現出血癥狀，肛門紅腫；剖檢可見體內肝胰臟、脾臟、腎臟等有不同程度的腫脹，腸腔內有淡黃色的腹水。

2.2 分離菌的形態特征

自患病草魚的鰓、肝、心、胰臟中分離到菌落形態一致、大小、顏色均一的優勢菌(編號為AvX005)。該菌在37 ℃固體LB培養基中菌落見圖1，呈灰白色圓形，直徑約為2 mm。表面光滑、濕潤、中央隆起、邊緣整齊。(分離到的菌株AvX005經冷場電子束掃描電鏡觀察，菌株呈短桿狀，兩端鈍圓，散落或聚集分布(圖2)。

圖1 AvX005菌株的菌落形態

圖2 AvX005菌株掃描電鏡觀察

2.3 回復感染試驗測定

將分離菌株進行回復感染試驗，其結果見表2。試驗結果表明該菌株對草魚具有較強的致病性，其病癥與自然患病的癥狀相似。對照組注射0.85%無菌生理鹽水的草魚未出現死亡和發病病癥。取感染試驗草魚病變組織進行細菌分離，分離得到大量與原分離菌株形態及生理生化特性一致的菌株，表明所分離的菌株是此次魚病爆發的病原菌。

表2 回復感染試驗結果

2.4 生理生化特征分析

菌株AvX005為革蘭氏陰性短小桿菌，具有運動性，V-P反應和吲哚反應為陽性，葡萄糖氧化發酵等部分生理生化指標測定結果見表3。

表3 菌株AvX005的生理生化試驗結果

注：“+”表示陽性，“-”表示陰性.

2.5 菌株AvX005的16S rDNA擴增及系統發育分析

分離菌株的全基因組DNA提取凝膠電泳圖中條帶清晰(圖3)。該菌用16S rDNA的通用引物進行PCR擴增獲得長度約為1500 bp的特異性條帶(圖4)。將16S rDNA擴增測序結果進行BLAST比對分析顯示，該菌與已知維氏氣單胞菌B7具有最高相似性，序列相似性達到99%。利用Mega 6.0的Kimura-2-Parameter模型，運用鄰接構建系統發育樹見圖5，顯示該菌與維氏氣單胞菌聚為一支，結合菌株的形態，16S rDNA序列分析(圖6)和生理生化表型特征，將該菌株AvX005命名為維氏氣單胞菌AvX005，該菌株16S rDNA序列在GenBank上獲得的登錄號為KU64116.1。

圖3 菌株AvX005的總DNA

圖4 菌株AvX005的16S rDNA擴增 M: DL 5000 DNA Marker；1～2: 16S rDNA基因片段檢測.

圖5 根據16S rDNA基因序列構建系統發育樹

Aeromonassp. mixed culture J7-6(氣單胞菌J7-6)；A.veroniiB565 strain B565(維氏氣單胞菌B565)；Aeromonassp. CSTL-6(氣單胞菌CSTL-6)；A.veroniistrain IQ105(維氏氣單胞菌IQ105)；A.veroniistrain E65(維氏氣單胞菌E65)；Aeromonassp. MK2(2010)(氣單胞菌MK2)；A.veroniistrain B7(維氏氣單胞菌B7)；A.veroniistrain X005(維氏氣單胞菌X005)；A.enteropelogenesstrain CECT4487(腸棕氣單胞菌CECT4487)；A.sanarelliistrain A2-67(圣雷利氣單胞菌AE122)；A.caviaestrain CECT 838(豚鼠氣單胞菌CECTCECT 838)；A.lacusstrain AE122(湖泊氣單胞菌AE122).

圖6 維氏氣單胞菌AvX005與維氏氣單胞菌 B7 的16S rDNA序列差異A:維氏氣單胞菌B7的16S rDNA序列；B:維氏氣單胞菌AvX005的16S rDNA序列.

2.6 拮抗菌篩選

2.6.1 菌株的初篩

自魚塘底泥和水樣中分離得到344株菌，采取點種法進行篩選，得到10株產生較大透明圈的菌株。

2.6.2 菌株的復篩

通過對初步篩選得到的10株菌，進行抑菌活性測定，得到5株較高產抑菌物質的產生菌，編號為Pa.1、BS、BS1、B1和B2，菌株活性測定見圖7，菌株BS抑菌活性最好，分子生物學方法鑒定為解淀粉芽孢桿菌，系統發育見圖8。生理生化特征為：革蘭氏染色呈陽性，能利用葡萄糖進行氧化發酵，水解淀粉，明膠液化，蛋白胨水解，甲基紅和吲哚試驗呈陰性，V-P試驗呈陽性，這符合解淀粉芽孢桿菌的生理生化基本特征。

2.7 拮抗菌發酵液的理化性質

解淀粉芽孢桿菌發酵上清液抑菌活性隨溫度的升高整體改變較大，低于80 ℃時保持較高活性，高于80 ℃時，活性降低較快；pH中性條件下抑菌活性最好，強酸環境中活性保持較好，強堿環境中幾乎失活；蛋白酶K處理后活性仍保持較好(表4)。

圖7 拮抗菌株的發酵上清液對維氏氣單胞菌的拮抗效果

圖8 根據16S rDNA基因序列構建系統發育樹Bacillus amyloliquefaciens(解淀粉芽孢桿菌)，B. subtilis(枯草芽孢桿菌)，B. velezensis(貝萊斯芽孢桿菌)，B. methylotrophicus (甲基營養芽孢桿菌).

條件抑菌圈直徑/mm溫度40℃8．30±0．2060℃7．26±0．2580℃6．47±0．25100℃5．26±0．21pH17．26±0．1537．50±0．1057．50±0．1078．16±0．0597．36±0．15113．36±0．15132．10±0．10蛋白酶K6．33±0．21CK(發酵上清液)8．33±0．21

2.8 拮抗菌活性物質分離

解淀粉芽孢桿菌抑菌活性產物分離見圖9，分別收集A1到A7洗脫峰，冷凍干燥后溶解于50%甲醇溶液，各取10 μL進行抑菌試驗，結果顯示A5洗脫峰對維氏氣單胞菌有明顯的拮抗效果(圖10)。修改UHPLC運行方法，對A5洗脫峰在超高效液相色譜儀上進一步分離，檢測波長為275 nm，得到洗脫峰B1、B2(圖11)，B1出峰時間為3.065 min，B2出峰時間為8.909 min，分別收集洗脫峰B1、B2，冷凍干燥后50%甲醇溶液溶解(濃縮10倍)，各取10 μL進行抑菌試驗，結果顯示，B2對維氏氣單胞菌有明顯的拮抗效果(圖12)。

圖9 解淀粉芽孢桿菌活性產物超高效液相色譜分離A1～A7：解淀粉芽孢桿菌活性產物洗脫峰被分成7組，并分別收集.

圖10 解淀粉芽孢桿菌粗提物色譜洗脫峰抑菌活性檢測A：維氏氣單胞菌拮抗試驗，A1～A7：各洗脫峰；CK：解淀粉芽孢桿菌發酵上清液.

圖11 解淀粉芽孢桿菌抑菌活性物A5組分的超高效液相色譜分離B1～B7：解淀粉芽孢桿菌活性產物洗脫峰被分成2組，并分別收集.

圖12 解淀粉芽孢桿菌B1、B2洗脫峰活性檢測CK1：無菌水；CK2：50%甲醇溶液；B1，B2：濃縮10倍的洗脫峰；CK：濃縮10倍的解淀粉芽孢桿菌抑菌活性粗提物.

2.9 質譜鑒定

超高效液相色譜儀上分離解淀粉芽孢桿菌活性峰B2，濃縮10倍，LTQ-XL質譜儀對B2進行鑒定，結果顯示，該抑菌活性物質荷為1045.29 [M-H]-(m/z)，可知其分子量為1045.29(圖13)。結合二級質譜圖發現B2離子峰所裂解出的碎片離子較多(圖14)，可推知B2化合物較穩定。

圖13 解淀粉芽孢桿菌抑菌活性物質B2一級質譜圖

圖14 解淀粉芽孢桿菌抑菌活性物質B2二級質譜圖

3 討 論

3.1 病原菌分離與鑒定

維氏氣單胞菌屬弧菌科、氣單胞菌屬，1987年，Hickman-Brenner等[5]首次將此菌確定為該屬中的一個新種。該菌廣泛存在于淡水的河流、湖泊、池塘等多種水域環境，是一種致病性較強的人魚畜共患致病菌[6-7]，對水產養殖業和人都具有一定的危害性。近年來國內已報道可被維氏氣單胞菌感染的水產動物包括黃鱔(Monopterusalbus)、胭脂魚(Myxocyprinusasiaticus)、鰻鱺(Anguilla)、中華鱉(Trionyxsinensis)、羅非魚(Oreochromis)、異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)、南方鲇(Silurusmeridionalis)稚魚、黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)、胡子鲇(Clariasfuscus)等[8-16]，主要病癥為患病個體出血及腹水。本試驗患病草魚除了上述癥狀外，還出現鱗片脫落和鰓絲呈灰白色等癥狀。維氏氣單胞菌可感染的水產動物種類和發病范圍逐年擴大，因此快速分離鑒定出病原菌是有效防治魚類疾病爆發的必要條件。水產養殖中魚類細菌性病原的診斷方法有很多，主要包括生理生化特性鑒定技術(如API檢測試劑盒)[17]、免疫學診斷技術(如間接ELISA)[18]、分子生物學技術(如LAMP)[19]等。PCR檢測方法操作簡單、準確、快速，可用于草魚病原維氏氣單胞菌的快速檢測。本研究從湖南望城喬口爆發病魚池病魚的病變組織分離到的一株優勢菌，菌株16S rDNA全長1508 bp，在NCBI上經BLAST分析，結果顯示，與維氏氣單胞菌B7具有最高相似性；不同的是菌株AvX005在第12、385、644、1504堿基位置上出現差異，分別為C、C、G、G，而維氏氣單胞菌B7分別為A、T、A、A，菌株AvX005在第1堿基位置上比維氏氣單胞菌B7多了一個A，結合生理生化特征鑒定等確定該菌株為維氏氣單胞菌(基因登錄號：KU64116.1)，命名為維氏氣單胞菌AvX005，經回復感染試驗顯示，該菌具有較強的致病性。試驗魚發病癥狀與自然發病癥狀相似，從感染試驗的患病草魚體內分離獲得大量與原分離菌株形態及生理生化特性一致的菌株，確定所分離的維氏氣單胞菌是此次爆發性疾病的病原。已有研究表明，維氏氣單胞菌也是湖南省草魚疾病的主要病原菌之一[20]。

3.2 拮抗菌的篩選

拮抗菌的篩選通常采用體外試驗方法，紙片法是常用的方法之一。指示菌為病原菌，指標是待測菌能夠在瓊脂培養基上對指示菌產生抑制效果[21]。本試驗以病原維氏氣單胞菌為指示菌，自養殖池塘底泥中篩選了一株活性較好的解淀粉芽孢桿菌，其抑菌直徑達8.3 mm。目前，國內外關于水產病原性維氏氣單胞菌拮抗菌的篩選研究極少，國內僅李聯泰等[22-23]對維氏氣單胞菌進行了拮抗菌的篩選及對其拮抗物質、生長條件做過相關研究。因此，本試驗篩選到的拮抗菌進一步豐富了維氏氣單胞菌的拮抗菌資源。利用拮抗微生物抑制水體中病原微生物的生長，使病原菌的密度低于其致病密度，進行水產養殖病害的防治，是國內外水產養殖病害控制的熱點[24]。解淀粉芽孢桿菌是一種對人畜相對安全的細菌，可作為候選益生菌有望在水產養殖中得到應用。

3.3 抑菌活性物的初步研究

解淀粉芽孢桿菌作為重要的生防細菌，其抑菌活性范圍非常廣。如解淀粉芽孢桿菌R3[25]、Es-2[26]可以有效抑制致病性細菌，解淀粉芽孢桿菌SQR9[27]、PPCB004[28]可以有效抑制植物病原真菌。然而在水產養殖益生菌的應用研究中關于解淀粉芽孢桿菌拮抗魚類病原菌的抑菌活性產物的分離鑒定研究報道甚少。Nair等[29]通過營養肉湯培養基篩選到假單胞菌(Pseudomonas)、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢桿菌、短小芽孢桿菌(B.pumilus)對創傷弧菌(Vibriovulnificus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophilia)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、哈維弧菌(V.harveyi)、鰻弧菌(V.anguillarum)有明顯拮抗作用，然而沒有對其抑菌活性物進行分離鑒定。本研究篩選的解淀粉芽孢桿菌發酵上清液對維氏氣單胞菌具有拮抗作用，表明它能生產胞外抗細菌活性成分，將發酵上清液調至pH 2.0時，產生能抗菌的沉淀(上清液無抑菌活性)，沉淀經甲醇溶解的溶液仍具有抑菌活性，表明可采用酸沉醇提方法提取抑菌活性物質。酸沉醇提法[30]主要用于提取發酵上清液中的脂肽類物質。眾多研究表明，解淀粉芽孢桿菌能夠產生伊枯草菌素、芬薺素和表面活性素的脂肽類抗生素，具有廣泛抑制真菌與細菌的能力[31]。本研究篩選到的解淀粉芽孢桿菌抑菌活性物的抑菌活性隨溫度的升高整體改變較大，低于80 ℃時保持較高活性，高于80 ℃時，活性降低較快；pH中性條件下抑菌活性最好，強酸環境中活性保持較好，強堿環境中幾乎失活；對蛋白酶不敏感。質譜鑒定其活性物質分子量為1045.29，這與已有研究報道解淀粉芽孢桿菌產生的脂肽類化合物理化性質相似，化合物分子量接近。因此初步推測此抑菌活性物可能為一種脂肽類化合物，對其活性物質進行結構解析和確定及其對維氏氣單胞菌抑菌作用機理仍待進一步研究。

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