血清抗apoA-1IgG、MMP-9與急性腦梗死患者頸動脈粥樣硬化的相關分析

張 薇， 劉 丹， 張廣煒， 張 偉， 李紅芳， 楊志甫， 郭新玲

載脂蛋白A1(ApolipoproteinA-1，apoA-1)是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的主要結構和功能組分，約占其蛋白質含量的75%，其自身抗體抗apoA-1 IgG一方面通過影響apoA-1的功能繼而導致HDL功能障礙，參與到動脈粥樣硬化及其相關疾病中[1];另一方面，抗apoA-1 IgG能夠增加促炎性相關分子，如白細胞介素8(IL-8)和MMP-9的釋放。MMP-9作為炎癥因子已被證明是動脈粥樣硬化及腦梗死的血清標志物，它是鋅依賴的蛋白水解酶，能夠催化細胞外基質蛋白的降解，可以選擇性的降解Ⅳ和Ⅴ型膠原蛋白，從而削弱動硬化斑塊纖維帽，使得斑塊更容易破裂[2,3]。國內外研究已表明[4]，動脈粥樣硬化不僅是膽固醇的聚集、平滑肌細胞增殖的復雜過程，免疫介導的炎癥反應在動脈粥樣硬化中也起著重要作用。動脈粥樣硬化的始因是動脈壁內皮細胞的炎癥反應，表達的炎癥趨化因子導致白細胞遷移，早期主要是循環中的單核細胞，穿過內皮細胞進入內膜，從而導致后期的動脈粥樣硬化斑塊形成，隨著動脈粥樣硬化斑塊的增加，血管管腔不斷的阻塞，動脈血流逐漸減少，或斑塊破裂，最終導致急性腦梗死的發生。我們通過探討抗apoA-1 IgG、MMP-9與急性腦梗死患者頸動脈粥樣硬化的相關性，為動脈粥樣硬化及腦梗死的病因提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機選擇我科急性腦梗死患者120例,男性80例，女性40例，平均年齡(65.5±9.53)歲。均符合1996年全國第四屆腦血管病學術會議修訂的腦梗死的診斷標準，且經頭部CT或MRI檢查證實，并排除：自身免疫性疾病或服用免疫抑制劑、自身免疫機制參與發生、發展的疾病、嚴重肝、腎功能不全、惡性腫瘤及急慢性感染性炎癥者、急性冠脈綜合征的患者、心源性腦栓塞的患者。

1.2 方法與分組

1.2.1 抗apoA-1 IgG、MMP-9的測定 入組患者于入院次日清晨空腹采集肘靜脈血共計5 ml，置于全塑干燥管內，在常溫環境中以3000 r/min離心5 min，分離后吸取上層血清放于-80.0 ℃冰箱保存，最后統一用ELISA方法檢測抗apoA-1 IgG、MMP-9水平。

1.2.2 頸動脈超聲檢查 采用飛利浦投資有限公司生產的EPIQ-7型彩色多普勒超聲診斷儀，由我院同一位超聲科醫生檢測。分別探查雙側頸總動脈遠段(分叉下方)、頸總動脈球部(分叉部)、頸內動脈近段(分叉上方)內-中膜厚度(IMT)和血管管腔內徑。內-中膜厚度為管腔與血管內膜交界處的垂直距離，取不同位點(頸總動脈遠段、 頸動脈球部、頸內動脈近段)的平均值作為內-中膜增厚測值，觀察有無內-中膜增厚或粥樣硬化斑塊形成，并進行斑塊穩定性評價。其中IMT≧1.00 mm即為內-中膜增厚；局限性IMT≧1.50 mm定義為粥樣硬化斑塊形成，二者皆認為存在頸動脈粥樣硬化。根據斑塊穩定性進一步分為不穩定性斑塊和穩定性斑塊，前者包括軟斑、混合斑；后者指硬斑。

1.2.3 分組 根據頸部血管超聲分為4組：(1)IMT正常組20例(IMT<1.00 mm)；(2)IMT增厚組10例(IMT≧1.00 mm)；(3)穩定斑塊組57例；(4)不穩定斑塊組33例，其中(1)組為頸動脈正常組；后3組均為頸動脈粥樣硬化組。

2 結 果

2.1 4組腦梗死患者一般臨床資料及抗apoA-1 IgG、MMP-9的比較 頸動脈IMT正常組、IMT增厚組、穩定性斑塊組、不穩定性斑塊組中，體重指數(Baric index,BMI)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、抗apoA-1 IgG、MMP-9、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL)水平依次逐漸升高，差異有統計學意義(P<0.05)(見表1)。

2.2 頸動脈粥樣硬化組與頸動脈正常組比較 入組的腦梗死患者根據頸部血管超聲分為頸動脈正常組(20例)與頸動脈粥樣硬化組(100例)；頸動脈粥樣硬化組的抗apoA-1 IgG、MMP-9的表達水平明顯高于頸動脈正常組(P<0.05)(見表2)。

2.3 抗apoA-1 IgG、MMP-9血清水平與頸動脈粥樣硬化程度的相關性 斯皮爾曼(Spearman)等級相關分析：抗apoA-1 IgG、MMP-9血清水平與頸動脈粥樣硬化程度呈正相關(抗apoA-1 IgG：r=0.407，P<0.01；MMP-9：r=0.316，P<0.01)。

2.4 Logistic回歸分析 分別以IMT、斑塊穩定性為因變量;以年齡、性別、BMI、TG、TC、HDL、LDL、空腹血糖、抗apoA-1 IgG、MMP-9等與動脈粥樣硬化相關的危險因素作為自變量進行Logistic回歸分析。結果顯示：抗apoA-1 IgG、MMP-9是發生頸動脈粥樣硬化和斑塊不穩定的獨立危險因素[抗apoA-1 IgG (μg/ml)OR=23.226，95%CI4.204～128.305，P<0.01，MMP-9 (ng/ml)OR=2.287,95%CI0.890～5.872，P<0.05;抗apoA-1 IgG (μg/ml)OR=3.301，95%CI1.212～8.991，P<0.01，MMP-9 (ng/ml)OR=2.345,95%CI1.129～4.871，P<0.05]。

表1 4組患者一般臨床資料比較

與正常組比較*P<0.05；與增厚組比較#P<0.05；與穩定斑塊組比較△P<0.05

表2 頸動脈正常組和頸動脈粥樣硬化組抗apoA-1 IgG、MMP-9的比較

與正常組比較*P<0.05，**P<0.01

3 討 論

在動脈粥樣硬化的發展過程中，一些自身抗體與加速動脈粥樣硬化有關，且在心血管疾病中得到了證實，Mizoguchi Etsuko[5]等發現有些自身抗體參與了冠狀動脈性疾病(Coronary cardiopathy，CAD)的發生，且與其范圍和嚴重程度相關。我們研究的抗apoA-1 IgG是apoA-1的自身抗體 。目前關于抗apoA-1 IgG的研究多集中于自身免疫性疾病及心血管疾病[6]，而關于血清抗apoA-1 IgG與腦梗死患者頸動脈粥樣硬化的相關性研究未見報道。

本實驗結果表明，在入組的急性腦梗死患者中，頸動脈粥樣硬化的發生率為83.3%，頸動脈粥樣硬化組的抗apoA-1 IgG、MMP-9的表達水平明顯高于頸動脈正常組，Logistic回歸顯示，抗apoA-1 IgG、MMP-9是頸動脈粥樣硬化發生的獨立危險因素，且與頸動脈粥樣硬化程度呈正相關。這提示血清抗apoA-1 IgG、MMP-9與頸動脈粥樣硬化的發生密切相關，且與頸動脈粥樣硬化程度密切相關。Dalia El-Lebedy[7]報道，抗apoA-1 IgG是心肌梗死與自身免疫性疾病相關血栓性事件血清標志物，高水平的抗apoA-1 IgG使得許多血栓事件相關的疾病發病率增高，如重度頸動脈狹窄。

另有研究顯示[8]，在一些無自身免疫性、炎癥性疾病的腦梗死患者中，因頸動脈重度狹窄行動脈內膜切除術(CEA)時，同時也檢測到了抗apoA-1 IgG水平的升高。我們的研究結果與上述研究一致。

本研究中，Logistic回歸分析顯示，血清抗apoA-1 IgG、MMP-9是頸動脈粥樣硬化斑塊不穩定性的獨立危險因素。Montecucco[9]等在小鼠模型中用抗apoA-1 IgG被動免疫增加動脈粥樣硬化和動脈粥樣硬化斑塊的易損性。隨后人們在嚴重頸動脈狹窄患者和輸注多克隆抗apoA-1 IgG的去apoE小鼠體內發現，與對照組相比，斑塊內膠原含量降低，巨噬細胞和MMP-9含量明顯升高，其中MMP-9在動脈粥樣硬化斑塊內炎性細胞聚集發揮核心作用，且MMP-9選擇性的降解明膠，破壞斑塊纖維帽，同時抗apoA-1 IgG誘導中性粒細胞從血流向動脈粥樣硬化斑塊內浸潤，均使得斑塊更加不穩定，最終增加動脈粥樣硬化斑塊易損性，這些都表明血清抗apoA-1 IgG和MMP-9水平可能反應動脈粥樣硬化程度及斑塊的易損性[10]，我們的研究結果與以上實驗研究相符。

我們知道，動脈粥樣硬化及動脈粥樣硬化性血栓形成是腦梗死的主要病因及發病機制之一，尤其是頸動脈粥樣硬化，頸動脈位置比較表淺，便于超聲檢查，且頸動脈粥樣硬化的程度可相對反應全身動脈粥樣硬化的程度[11]。

結合以上研究，檢測抗apoA-1 IgG、MMP-9的血清水平可能成為發現早期動脈粥樣硬化的新方法，而且抗apoA-1 IgG是自身抗體，我們可能通過特定的免疫靶向治療，為腦梗死頸動脈粥樣硬化患者提供一種新的治療方法。而且若將頸部血管超聲與血清抗apoA-1 IgG、MMP-9檢測有效結合，可能為動脈粥樣硬化及其相關疾病的危險分層提供理論依據，為頸動脈粥樣硬化患者預防腦梗死等血栓性事件提供新的思路。

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